本文關(guān)鍵詞：殼寡糖誘導(dǎo)交鏈孢菌細(xì)胞凋亡及毒素抑制的研究

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【摘要】：殼寡糖是一種水溶性低聚糖,具有良好的生物兼容性,可生物降解并對人畜無毒,其抑菌活性在植物病害防治、食品防腐以及醫(yī)療等方面具有廣闊的應(yīng)用前景。目前對殼寡糖作用機(jī)理的研究主要集中于其誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性方面,在殼寡糖抑制病原真菌機(jī)理方面還報道較少。交鏈孢菌是侵染范圍很廣的一種侵染性真菌,在造成危害的同時,產(chǎn)生多種真菌毒素,采后番茄果實可受其侵染而發(fā)生黑霉病。本論文首先研究不同濃度的殼寡糖對菌絲生長和孢子萌發(fā)的抑制現(xiàn)象,從而確定寡糖對交鏈孢菌的生物學(xué)影響。結(jié)果表明,500 μg/mL的殼寡糖抑菌效果最明顯,對菌絲生長的抑制率達(dá)到55.56%,對孢子萌發(fā)的抑制率達(dá)到78%。掃描電鏡觀察不同濃度的殼寡糖對交鏈孢菌絲和孢子均有破壞作用,處理組菌絲體管狀形態(tài)模糊,表面粗糙,甚至出現(xiàn)菌絲消融狀態(tài)。同樣處理組孢子破裂,完全變形,出現(xiàn)原生質(zhì)溢出現(xiàn)象。其次通過對殼寡糖誘導(dǎo)交鏈孢菌的細(xì)胞凋亡過程進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)殼寡糖對交鏈孢菌原生質(zhì)體有致死作用。熒光顯微鏡觀察結(jié)果表明,殼寡糖處理組線粒體膜電位下降,ROS水平顯著增高。在激光共聚焦顯微鏡下觀察殼寡糖與交鏈孢菌絲和孢子的結(jié)合,發(fā)現(xiàn)菌絲體和孢子整體熒光染色較均勻,但是在菌絲隔膜處出現(xiàn)熒光斷裂現(xiàn)象,隔膜未被染色,表明殼寡糖可能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部與其DNA結(jié)合,凝膠阻滯作用驗證結(jié)果進(jìn)一步證實了該結(jié)論。以體外提取交鏈孢菌毒素的方法研究殼寡糖與致病毒素的相互作用表明,殼寡糖處理組細(xì)胞存活率基本不受影響,而毒素處理組大部分均出現(xiàn)質(zhì)壁分離現(xiàn)象和死亡現(xiàn)象,且存活率5%。殼寡糖和毒素共同作用細(xì)胞時,細(xì)胞形態(tài)較飽滿,細(xì)胞核無皺縮現(xiàn)象,存活率為90%,說明殼寡糖對毒素侵染番茄細(xì)胞有一定的抑制作用。最后本論文還研究了殼寡糖對采后番茄貯藏品質(zhì)的影響,發(fā)現(xiàn)殼寡糖可顯著降低果實發(fā)病率,抑制病斑擴(kuò)展速度,延緩果實硬度的降低,推遲番茄果實的甜度變化時間,有效保持果實顏色和抗壞血酸的含量,提高了總酚含量,有利于果實口感的改善和良好風(fēng)味的形成。
【關(guān)鍵詞】：殼寡糖 交鏈孢菌 細(xì)胞凋亡 毒素 品質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：TS201.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 1 前言9-20
• 1.1 交鏈孢菌概述9-10
• 1.2 殼寡糖簡介10-13
• 1.2.1 殼寡糖的生物學(xué)活性和生物安全性10-11
• 1.2.2 殼寡糖的制備方法11
• 1.2.3 殼寡糖在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用11-13
• 1.3 殼寡糖抑菌機(jī)理研究進(jìn)展13-15
• 1.3.1 殼寡糖對細(xì)菌的抑菌機(jī)理研究14-15
• 1.3.2 殼寡糖對真菌的抑菌機(jī)理研究15
• 1.4 細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展15-18
• 1.4.1 細(xì)胞凋亡概述15-16
• 1.4.2 ROS、Ca~(2+)、線粒體在細(xì)胞凋亡中的作用16-17
• 1.4.3 絲狀真菌細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展17-18
• 1.5 真菌菌毒素的研究概況18
• 1.6 研究目的和主要研究內(nèi)容18-20
• 1.6.1 研究目的18-19
• 1.6.2 主要研究內(nèi)容19-20
• 2 材料與方法20-30
• 2.1 實驗材料20-21
• 2.1.1 供試材料20
• 2.1.2 主要試劑20-21
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備21
• 2.2 實驗方法21-22
• 2.2.1 培養(yǎng)基的配制22
• 2.2.2 殼寡糖溶液的配制22
• 2.2.3 制備交鏈孢菌孢子22
• 2.3 殼寡糖對交鏈孢菌生物學(xué)性狀的影響22-23
• 2.3.1 殼寡糖對菌落徑向生長的影響22
• 2.3.2 殼寡糖對交鏈孢菌孢子萌發(fā)的影響22-23
• 2.3.3 殼寡糖對菌絲細(xì)胞膜滲透率的影響23
• 2.3.4 掃描電鏡觀察殼寡糖對交鏈孢菌絲和孢子的影響23
• 2.4 殼寡糖對交鏈孢菌細(xì)胞凋亡的影響23-25
• 2.4.1 殼寡糖對原生質(zhì)體存活率的影響23-24
• 2.4.2 線粒體膜電位的測定24
• 2.4.3 活性氧的測定24-25
• 2.5 殼寡糖對交鏈孢菌上的作用位點(diǎn)研究25-27
• 2.5.1 熒光標(biāo)記的殼寡糖的制備以及抑菌活性的測定25
• 2.5.2 熒光標(biāo)記的殼寡糖和2-AMAC與菌絲的結(jié)合25
• 2.5.3 熒光標(biāo)記的殼寡糖和2-AMAC與孢子的結(jié)合25-26
• 2.5.4 熒光標(biāo)記的殼寡糖在交鏈孢菌胞內(nèi)作用位點(diǎn)研究26-27
• 2.6 殼寡糖對毒素的抑制作用研究27-28
• 2.6.1 毒素的提取與純化27
• 2.6.2 殼寡糖對毒素侵染番茄的抑制作用27-28
• 2.7 殼寡糖對采后番茄儲藏品質(zhì)影響的研究28-30
• 2.7.1 果實處理28
• 2.7.2 果實發(fā)病率與病斑嚴(yán)重度檢測28
• 2.7.3 果實生理指標(biāo)測定28-30
• 3 結(jié)果與討論30-56
• 3.1 殼寡糖對交鏈孢菌生物學(xué)性狀的影響30-36
• 3.1.1 不同濃度殼寡糖對菌絲生長的影響30-31
• 3.1.2 不同濃度殼寡糖對孢子萌發(fā)的影響31-32
• 3.1.3 殼寡糖對菌絲細(xì)胞膜滲透率的影響32-33
• 3.1.4 掃描電鏡觀察殼寡糖對交鏈孢菌絲和孢子的影響33-36
• 3.2 殼寡糖對交鏈孢菌細(xì)胞凋亡的研究36-40
• 3.2.1 殼寡糖對交鏈孢菌原生質(zhì)體存活率的影響36-38
• 3.2.2 殼寡糖作用下交鏈孢菌線粒體膜電位的測定38-39
• 3.2.3 殼寡糖作用下交鏈孢菌活性氧的測定39-40
• 3.3 殼寡糖在交鏈孢菌上的作用位點(diǎn)研究40-44
• 3.3.1 熒光標(biāo)記的殼寡糖的制備以及抑菌活性的測定40-41
• 3.3.2 熒光標(biāo)記的殼寡糖與菌絲和孢子的結(jié)合41-43
• 3.3.3 交鏈孢菌DNA與殼寡糖的體外結(jié)合實驗43-44
• 3.4 殼寡糖對毒素侵染番茄的抑制作用44-50
• 3.5. 殼寡糖對采后番茄貯藏品質(zhì)的研究50-56
• 3.5.1 殼寡糖誘導(dǎo)果實對交鏈孢菌侵染抗性的變化50-52
• 3.5.2 殼寡糖誘導(dǎo)果實硬度的變化52
• 3.5.3 殼寡糖誘導(dǎo)后果實可溶性固形物含量的變化52-53
• 3.5.4 番茄果實顏色的變化53-54
• 3.5.5 抗壞血酸含量的測定54
• 3.5.6 可溶性酚含量的測定54-56
• 4 結(jié)論56-57
• 5 展望57-58
• 6 參考文獻(xiàn)58-66
• 7 攻讀碩士期間發(fā)表論文情況66-67
• 8 致謝67

【相似文獻(xiàn)】

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