本文關(guān)鍵詞：沙棗多糖純化、結(jié)構(gòu)表征及其生物活性研究

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【摘要】：本研究主要以沙棗為原料,對沙棗多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定、抗氧活性、抗腫瘤活性和降血脂活性進行了研究,主要研究成果如下：(1)采用熱水浸提法提取沙棗多糖,浸提時間2h,浸提溫度80℃,料液比1：35,提取次數(shù)2次,此條件下,沙棗多糖的得率為5.9%。(2)沙棗多糖粗品經(jīng)DEAE-52陰離子交換柱層析分離得到不同組分EAP-1、 EAP-2和EAP-3,收集主要的EAP-1組分,并采用SephadexG-100凝膠柱層析進一步純化得到沙棗多糖組分EAP-1a,通過高效液相色譜法(HPLC)、SephadexG-100凝膠柱層析法鑒定驗證均為均一多糖組分。(3)通過氣相色譜分析得到多糖組分EAP-la的單糖組成,主要由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖組成,且摩爾比為0.029：0.74：0.51：0.039：1.0：5.19,通過高效液相色譜分析得到多糖組分EAP-la的分子量為61421Da。(4)采用紅外光譜、核磁共振、圓二色譜、剛果紅試驗、β-消去試驗、原子力顯微鏡等方法確定多糖組分EPA-la具有α-吡哺環(huán)構(gòu)型,可能含有較長的側(cè)鏈和較多的分枝,在水溶液中可能以三股螺旋結(jié)構(gòu)存在。(5)沙棗粗多糖的體外抗氧化活性的研究結(jié)果表明：沙棗多糖具有一定的還原能力,在所測定的濃度范圍內(nèi),沙棗多糖羥基自由基(·OH)清除率最大可達59%；對超氧陰離子(O2-·)的清除率最大可達21%；對DPPH-自由基的清除作用隨多糖濃度的增大而增大,最大可達到40%。(6)沙棗多糖的體外抗腫瘤活性研究表明：MTT試驗結(jié)果表明,沙棗多糖在一定程度上能夠抑制HepG2細(xì)胞的增殖,并計算出對細(xì)胞處理時間為48h,對HepG2細(xì)胞的半抑制濃度(IC50)為469μg/ml;通過HE染色及Hoechst33342染色等細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察,發(fā)現(xiàn)在IC50 (469μg/ml)劑量下,細(xì)胞形態(tài)學(xué)發(fā)生了較為明顯的改變。說明沙棗粗多糖對人體肝癌細(xì)胞HepG2有一定的抑制效果。(7)沙棗多糖的降血脂活性研究表明,沙棗粗多糖能夠降低了試驗小鼠血清中總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)的含量,并能升高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平,降低低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平和動脈粥樣硬化指數(shù)(AI),并能夠有效防止動脈硬化的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：沙棗多糖 分離純化 結(jié)構(gòu) 生物活性
【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：O629.12
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 1 前言9-19
• 1.1 多糖概述9
• 1.2 多糖的研究進展9-14
• 1.2.1 多糖的來源9
• 1.2.2 多糖的提取9-11
• 1.2.3 多糖的分離、純化11-12
• 1.2.4 多糖的純度鑒定12
• 1.2.5 多糖的結(jié)構(gòu)分析12-14
• 1.3 多糖的生物活性研究14-17
• 1.3.1 多糖的降血糖活性研究14
• 1.3.2 多糖降血脂活性研究14-15
• 1.3.3 多糖的抗氧化活性研究15
• 1.3.4 多糖的抗腫瘤活性研究15-17
• 1.4 沙棗多糖的研究進展17
• 1.5 課題研究目的、意義和內(nèi)容17-19
• 1.5.1 課題研究目的和意義17-18
• 1.5.2 研究內(nèi)容18-19
• 2 材料與方法19-34
• 2.1 實驗材料19-22
• 2.1.1 主要原材料19
• 2.1.2 主要藥品試劑19-20
• 2.1.3 試驗儀器與設(shè)備20-21
• 2.1.4 主要試劑溶液配制21-22
• 2.2 實驗方法22-34
• 2.2.1 沙棗多糖的提取22
• 2.2.2 沙棗粗多糖的純化22
• 2.2.3 糖含量的測定22-23
• 2.2.4 蛋白質(zhì)含量的測定23
• 2.2.5 沙棗多糖純度及相對分子質(zhì)量的測定23-24
• 2.2.6 單糖組成分析24
• 2.2.7 紫外光譜分析24-25
• 2.2.8 紅外光譜分析25
• 2.2.9 β-消去反應(yīng)25
• 2.2.10 碘-碘化鉀實驗25
• 2.2.11 剛果紅實驗25
• 2.2.12 核磁共振分析25
• 2.2.13 圓二色譜分析25
• 2.2.14 原子力顯微鏡掃描25-26
• 2.2.15 沙棗多糖的抗氧化活性研究26-27
• 2.2.16 沙棗多糖對人肝癌細(xì)胞HepG2的體外抗腫瘤活性研究27-28
• 2.2.17 EAP抗腫瘤形態(tài)學(xué)觀察28-29
• 2.2.18 沙棗多糖降血脂活性研究29
• 2.2.19 血脂指標(biāo)的測定29-33
• 2.2.20 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析33-34
• 3 結(jié)果與討論34-56
• 3.1 沙棗多糖的提取和純化34-35
• 3.1.1 沙棗多糖的提取34
• 3.1.2 DEAE-52離子交換柱分級純化結(jié)果34
• 3.1.3 SephadexG-lOO凝膠柱層析純化結(jié)果34-35
• 3.2 糖含量及蛋白質(zhì)的測定35
• 3.3 多糖純度鑒定及分子量的測定35-37
• 3.3.1 SephadexG-100凝膠柱層析35-36
• 3.3.2 高效液相色譜法(HPLC)純度鑒定及分子量的測定36-37
• 3.4 單糖組成分析37-38
• 3.5 紫外光譜分析38-39
• 3.6 紅外光譜分析39
• 3.7 多糖糖肽鍵的鑒定39-40
• 3.8 碘-碘化鉀實驗40
• 3.9 剛果紅實驗40-41
• 3.10 核磁共振圖譜分析41-43
• 3.10.1 ~1H-NMR分析41-42
• 3.10.2 ~(13)C-NMR分析42-43
• 3.11 圓二色譜分析43-44
• 3.12 原子力顯微鏡44-45
• 3.13 沙棗多糖抗氧化活性的研究45-47
• 3.13.1 沙棗的多糖總還原能力的測定45
• 3.13.2 沙棗多糖清除羥基自由基的清除作用45-46
• 3.13.3 沙棗多糖對超氧陰離子的清除作用46-47
• 3.13.4 沙棗多糖對DPPH自由基的清除作用47
• 3.14 沙棗多糖對人肝癌細(xì)胞HEPG2的抗腫瘤活性研究47-50
• 3.14.1 MTT實驗結(jié)果47-48
• 3.14.2 HE染色檢測細(xì)胞凋亡48-49
• 3.14.3 Hoechst 33342染色激光共聚焦顯微鏡檢測細(xì)胞凋亡49-50
• 3.15 沙棗多糖降血脂活性分析50-56
• 3.15.1 高血脂癥模型的建立50
• 3.15.2 沙棗多糖對小鼠體重變化的影響50-51
• 3.15.3 沙棗多糖對小鼠臟器指數(shù)變化的影響51
• 3.15.4 沙棗多糖對小鼠血清中總膽固醇(TC)含量的影響51-52
• 3.15.5 沙棗多糖對小鼠血清中甘油三酯(TG)含量的影響52-53
• 3.15.6 沙棗多糖對小鼠血清中高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量的影響53
• 3.15.7 沙棗多糖對小鼠血清中低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量的影響53-54
• 3.15.8 沙棗多糖對小鼠動脈粥樣硬化指數(shù)(AI)的影響54-56
• 4 結(jié)論56-58
• 5 展望58-59
• 6 參考文獻59-65
• 7 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況65-66
• 8 致謝66

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6 劉s

本文編號：575023