發(fā)布時(shí)間：2017-06-29 23:02

  本文關(guān)鍵詞：鯽魚卵唾液酸糖蛋白對老年性骨質(zhì)疏松癥小鼠的改善作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：骨質(zhì)疏松癥具有骨代謝紊亂、骨密度下降、骨強(qiáng)度降低、骨折危險(xiǎn)系數(shù)增高等病理特征,已成為亟待解決的全人類健康問題。目前的治療藥物雖有一定療效,但副作用大,因此尋找安全有效的功能食品具有重要意義。魚卵是水產(chǎn)品加工中的主要副產(chǎn)物之一。我國淡水魚產(chǎn)量占魚類總產(chǎn)量的70%,其副產(chǎn)物比例大,鯽魚等雜食淡水魚的卵巢部分可達(dá)體重的25%,但魚卵加工形式單一,資源浪費(fèi)十分嚴(yán)重。目前對魚卵的高值化利用研究主要集中于功能脂質(zhì)上,對魚卵蛋白的功能特性研究較少。本課題組采用活性追蹤法,首次確定了魚卵唾液酸糖蛋白具有顯著促進(jìn)成骨前體細(xì)胞MC3T3-E1增殖的活性,提示魚卵唾液酸糖蛋白具有抗骨質(zhì)疏松癥的潛能。本論文以脫脂、水提等步驟從鯽魚魚卵中獲得水溶性唾液酸糖蛋白,灌胃快速骨老化小鼠SAMP6,研究其對老年性骨質(zhì)疏松癥小鼠骨代謝的影響。主要研究結(jié)果如下：Ca-SGP的主要組成為SA 5.89±1.11%,總磷1.99±0.22%,總糖7.94±1.33%,粗蛋白44.25±2.71%,可顯著促進(jìn)MC3T3-E1成骨細(xì)胞增殖。利用毒理學(xué)研究方法從三個(gè)階段系統(tǒng)評價(jià)Ca-SGP的安全性。急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,Ca-SGP對ICR小鼠的最大耐受劑量大于45g/(kg·bw),相當(dāng)于一個(gè)70kg成年人每日可攝入350g以上,屬無毒級別。遺傳毒性實(shí)驗(yàn)主要從原核細(xì)胞、常染色體和生殖染色體3個(gè)水平評價(jià)受試物的致突變作用。結(jié)果顯示,Ca-SGP對組氨酸缺陷型鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100和TA102無致突變作用。在750-6750mg/(kg·bw)劑量范圍內(nèi)對小鼠骨髓微核染色體和生殖細(xì)胞無致突變作用。說明Ca-SGP無遺傳毒性。90天喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,灌胃Ca-SGP未引起大鼠外周血象、臟器指數(shù)和血清、尿液生化指標(biāo)等的顯著性變化,說明Ca-SGP未造成大鼠感染,未對腎臟、肝臟和心肌等造成毒理損傷。以SA為追蹤目標(biāo)系統(tǒng)研究了Ca-SGP經(jīng)腸道吸收后的體內(nèi)變化規(guī)律。結(jié)果發(fā)現(xiàn),小鼠單次經(jīng)口灌胃3g/(kg·bw)的Ca-SGP后,0.5h內(nèi)進(jìn)入小腸粘膜并達(dá)到峰值,小腸道內(nèi)對Ca-SGP的吸收共持續(xù)3h。0至5h內(nèi)Ca-SGP不斷在血清中積累并逐漸達(dá)到峰值,此后至48h血清藥物濃度緩慢下降至基礎(chǔ)水平。4h時(shí)Ca-SGP在肝臟中達(dá)到最高濃度,肝臟內(nèi)的吸收持續(xù)到48h。大腸腸壁SA無顯著變化,說明大腸對Ca-SGP無明顯吸收利用過程。以3g/(kg·bw)的Ca-SGP連續(xù)灌胃10天,以SA為追蹤目標(biāo),研究了Ca-SGP在組織中的分布規(guī)律。結(jié)果發(fā)現(xiàn),小鼠血清SA濃度顯著上升(P0.01)。股骨、脛骨和腰椎等骨組織中SA含量較正常對照組小鼠大幅增加(P0.01),而肝臟、腦、腎臟、睪丸、子宮等組織器官內(nèi)SA水平無顯著變化。提示Ca-SGP的作用靶點(diǎn)是骨組織。以SAMP6為動物模型系統(tǒng)研究了Ca-SGP對老年性骨質(zhì)疏松癥小鼠的改善作用。分別以劑量為300 mg/(kg·bw)和600 mg/(kg·bw)的Ca-SGP灌胃5月齡SAMP6小鼠150天。結(jié)果顯示,Ca-SGP顯著升高血清BGP、BALP、PINP和PICP(P0.01)含量,促進(jìn)骨形成：顯著降低血清TRACP、NTX、CTX含量和尿液DPD、Ca/Cr、P/Cr水平(P0.01),抑制破骨活躍。Cath-K和MMP-9是骨吸收中發(fā)揮作用的最關(guān)鍵酶。結(jié)果發(fā)現(xiàn),Ca-SGP顯著降低了血清Cath-K和MMP-9水平(P0.01),抑制骨吸收酶活性。骨密度是骨質(zhì)疏松癥診斷的金標(biāo)準(zhǔn),骨生物力學(xué)性能決定骨質(zhì)量。結(jié)果顯示,Ca-SGP顯著提高了SAMP6小鼠股骨、脛骨和腰椎的骨密度(P0.01),提高股骨、脛骨的最大載荷和結(jié)構(gòu)強(qiáng)度(P0.01),提示Ca-SGP可全面改善骨質(zhì)量。RANKL與RANK結(jié)合后啟動骨吸收信號通路,OPG可競爭性地與RANKL結(jié)合,抑制骨吸收。結(jié)果發(fā)現(xiàn),Ca-SGP顯著升高血清OPG水平(P0.01),降低RANKL水平(P0.01),提高OPG/RANKL比值(P0.01)。說明Ca-SGP可以通過調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞OPG/RANKL分泌來調(diào)節(jié)破骨吸收。綜上,Ca-SGP安全無毒,作用靶器官為骨組織。Ca-SGP可顯著改善老年性骨質(zhì)疏松癥的骨代謝紊亂,提高骨強(qiáng)度。作用機(jī)制可能與其可調(diào)節(jié)OPG/RANKL系統(tǒng)有關(guān)。本論文首次在動物水平評價(jià)了Ca-SGP對骨質(zhì)疏松癥的改善作用,為魚卵的高值化利用提供了理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：鯽魚卵唾液酸糖蛋白 老年性骨質(zhì)疏松癥 快速骨老化 BALP TRACP 骨密度 OPG/RANKL
【學(xué)位授予單位】：中國海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：TS254.9;R580
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-15
• 前言15-29
• 1 骨質(zhì)疏松癥的研究進(jìn)展15-25
• 1.1 骨質(zhì)疏松癥的概述15
• 1.2 骨質(zhì)疏松發(fā)病的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)15-17
• 1.3 骨質(zhì)疏松癥的癥狀及診斷17-21
• 1.4 OPG/RANKL/RANK分子調(diào)節(jié)系統(tǒng)21-23
• 1.5 骨質(zhì)疏松癥治療藥物概述23-24
• 1.6 老年性骨質(zhì)疏松癥動物模型24-25
• 2 魚卵的開發(fā)利用研究進(jìn)展25-27
• 3 論文的立題依據(jù)和研究意義27-29
• 第一章 鯽魚卵唾液酸糖蛋白的基本成分分析29-36
• 1 材料和方法29-33
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料29-30
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法30-33
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析33
• 2 結(jié)果和討論33-35
• 2.1 不同水產(chǎn)動物全魚卵粉、脫脂魚卵和SGP中SA含量的比較33-34
• 2.2 不同水產(chǎn)動物卵SGP促M(fèi)C3T3-E1成骨細(xì)胞增殖活性的比較34
• 2.3 鯽魚卵全卵、脫脂卵、Ca-SGP和殘?jiān)慕M成成分分析34-35
• 3 小結(jié)35-36
• 第二章 鯽魚卵唾液酸糖蛋白的毒理學(xué)評價(jià)36-50
• 第一節(jié) 鯽魚卵唾液酸糖蛋白的急性毒性實(shí)驗(yàn)36-39
• 1 材料和方法36-37
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料36
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法36-37
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析37
• 2 結(jié)果和討論37-38
• 2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)37
• 2.2 對小鼠一般狀態(tài)的影響37
• 2.3 對小鼠臟器指數(shù)的影響37-38
• 3 小結(jié)38-39
• 第二節(jié) 鯽魚卵唾液酸糖蛋白的遺傳毒性實(shí)驗(yàn)39-45
• 1 材料和方法39-41
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料39-40
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法40-41
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析41
• 2 結(jié)果和討論41-44
• 2.1 Ca-SGP對原核細(xì)胞突變性的影響41-42
• 2.2 Ca-SGP對小鼠常染色體異常的影響42-43
• 2.3 Ca-SGP對小鼠生殖細(xì)胞突變的影響43-44
• 3 小結(jié)44-45
• 第三節(jié) 鯽魚卵唾液酸糖蛋白的90天喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)45-50
• 1 材料和方法45-46
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料45
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法45-46
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析46
• 2 結(jié)果和討論46-49
• 2.1 灌胃Ca-SGP對大鼠生長發(fā)育和臟器指數(shù)的影響46
• 2.2 灌胃Ca-SGP對大鼠外周血象的影響46-47
• 2.3 灌胃Ca-SGP對大鼠血糖和血脂的影響47
• 2.4 灌胃Ca-SGP對大鼠肝功能指標(biāo)的影響47-48
• 2.5 灌胃Ca-SGP對大鼠腎功能指標(biāo)的影響48
• 2.6 灌胃Ca-SGP對大鼠心肌功能的影響48-49
• 3 小結(jié)49-50
• 第三章 鯽魚卵唾液酸糖蛋白在小鼠腸道的吸收及組織分布研究50-58
• 1 材料和方法50-52
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料50-51
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法51
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析51-52
• 2 結(jié)果和討論52-56
• 2.1 小鼠小腸中SA的時(shí)間變化趨勢52
• 2.2 小鼠血清SA水平的時(shí)間變化趨勢52-53
• 2.3 小鼠肝臟中SA的時(shí)間變化趨勢53-54
• 2.4 小鼠大腸中SA的時(shí)間變化趨勢54
• 2.5 SA在小鼠血清中的分布54-55
• 2.6 SA在小鼠組織器官中的分布55-56
• 3 討論56-57
• 4 本章小結(jié)57-58
• 第四章 鯽魚卵唾液酸糖蛋白對骨快速老化小鼠骨質(zhì)疏松癥的改善作用58-73
• 1 材料和方法58-60
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料58-59
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法59-60
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析60
• 2 結(jié)果60-70
• 2.1 Ca-SGP顯著提高SAMP6小鼠血清骨形成指標(biāo)水平60-62
• 2.2 Ca-SGP顯著降低SAMP6小鼠血清和尿液骨吸收指標(biāo)水平62-63
• 2.3 Ca-SGP顯著降低血清骨吸收關(guān)鍵酶Cath-K和MMP-9的含量63-64
• 2.4 Ca-SGP顯著升高SAMP6小鼠股骨、脛骨和椎骨密度64-66
• 2.5 Ca-SGP顯著改善SAMP6小鼠脛骨、股骨骨生物力學(xué)性能66-68
• 2.6 Ca-SGP顯著升高血清OPG/RANKL比值68-69
• 2.7 血清OPG、RANKL與骨密度的相關(guān)性69-70
• 3 討論70-72
• 4 本章小結(jié)72-73
• 結(jié)論73-74
• 本論文的創(chuàng)新點(diǎn)74-75
• 參考文獻(xiàn)75-81
• 致謝81-82
• 個(gè)人簡歷82-83
• 發(fā)表的學(xué)術(shù)論文83

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王非;荊莉;石衛(wèi)峰;徐紅冰;;抗骨質(zhì)疏松藥物的不良反應(yīng)[J];藥品評價(jià);2013年23期

2 Hisataka Yasuda;;RANKL,a necessary chance for clinical application to osteoporosis and cancer-related bone diseases[J];World Journal of Orthopedics;2013年04期

3 譚雯;吳f^;;臨床常用抗骨質(zhì)疏松藥物[J];上海醫(yī)藥;2013年09期

4 段衛(wèi)華;;自發(fā)老年性骨質(zhì)疏松模型SAMP6小鼠研究進(jìn)展[J];天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2012年02期

5 許潔;趙東寶;劉文斌;;老年性骨質(zhì)疏松癥的防治進(jìn)展[J];中國全科醫(yī)學(xué);2010年11期

6 王洪復(fù);;老年性骨質(zhì)疏松癥病理機(jī)制與防治原則[J];中華保健醫(yī)學(xué)雜志;2010年01期

7 張軍芳;蔣飛霞;徐裔婷;;骨代謝生化標(biāo)志物與骨質(zhì)疏松癥研究進(jìn)展[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2009年03期

8 姚宗良;秦偉;;絕經(jīng)后婦女血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1的表達(dá)及其意義[J];中華實(shí)用診斷與治療雜志;2008年07期

9 賈經(jīng)漢;邱新建;陳志堅(jiān);;骨質(zhì)疏松動物模型的研究進(jìn)展[J];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志;2007年08期

10 張年國;張穎;曲秋芝;孫大江;;施氏鱘卵黃蛋白的分離純化及其性質(zhì)[J];中國水產(chǎn)科學(xué);2007年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 宋文蔚;;骨質(zhì)疏松癥的診斷和治療[A];浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會第二屆老年病專業(yè)委員會第一次年會學(xué)術(shù)論文集[C];2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 黃云梅;基于RANKL/RANK/OPG軸的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥發(fā)病機(jī)制及健骨顆粒干預(yù)研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2014年

2 王澤明;復(fù)元膠囊通過MAPKs通路調(diào)節(jié)OPG-RANKL-RANK系統(tǒng)防治骨關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

3 付應(yīng)霄;OPG對破骨細(xì)胞活性的影響及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制[D];揚(yáng)州大學(xué);2013年

4 王琦;海產(chǎn)動物來源n-3PUFA磷脂的提取及生物活性研究[D];中國海洋大學(xué);2008年

5 劉幼碩;脂聯(lián)素調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞OPG/RANKL的表達(dá)和TIMP-3誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡[D];中南大學(xué);2007年

6 王建衛(wèi);骨質(zhì)疏松對大鼠中晚期骨折愈合的影響及辛伐他汀對大鼠骨質(zhì)疏松性骨折愈合質(zhì)量的影響[D];浙江大學(xué);2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 賀敏;魚卵唾液酸糖蛋白調(diào)控成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞分化及作用機(jī)制的研究[D];中國海洋大學(xué);2014年

2 闕文君;骨轉(zhuǎn)換生化標(biāo)志物的研究進(jìn)展[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

3 袁亮;信號選擇性甲狀旁腺素模擬肽影響去勢雄性小鼠骨折愈合的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

4 李森;杜仲子總苷抗骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)研究[D];西北大學(xué);2010年

5 胡一梅;老年性骨質(zhì)疏松癥病理研究及治療進(jìn)展[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2006年

6 劉碌;針刺對快速老化模型小白鼠SAMP6骨質(zhì)疏松及微量元素含量影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津中醫(yī)學(xué)院;2002年

  本文關(guān)鍵詞：鯽魚卵唾液酸糖蛋白對老年性骨質(zhì)疏松癥小鼠的改善作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：499612