本文關(guān)鍵詞：水產(chǎn)品貯藏過程中磷脂的鳥槍法分析及水解機理研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：磷脂(Phospholipids)是一類含有磷酸根脂質(zhì)的總稱,廣泛存在于各種生物體內(nèi)。水產(chǎn)品磷脂富含n-3型多不飽和脂肪酸,磷脂型的多不飽和脂肪酸相對于甘油酯型的多不飽和脂肪酸,其氧化穩(wěn)定性更好,消化吸收速度更快,具有一定的研究價值。本文利用基于鳥槍法的脂質(zhì)組學研究策略分析了15種水產(chǎn)品中磷脂的分子種和含量。在此基礎(chǔ)上,利用直接進樣電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法分析了太平洋鱈魚、南美白對蝦、褶牡蠣在不同貯藏條件下的磷脂分子種和含量的變化過程,以及通過分析不同水產(chǎn)品磷脂水解酶酶活力變化速率,結(jié)合磷脂變化情況進行相關(guān)性分析,探究不同水產(chǎn)品在貯藏中磷脂的水解規(guī)律。隨后,從水產(chǎn)品中提取純化磷脂水解酶并使其作用于純化的磷脂,通過分析其水解產(chǎn)物種類及含量變化進行磷脂的水解機理初步探究。本論文的研究和結(jié)果為水產(chǎn)品貯藏、低值水產(chǎn)品的高值化開發(fā)利用等提供理論依據(jù)。首先,本文建立了直接進樣電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜測定磷脂的方法。采用直接進樣的方式將樣品導入電噴霧離子源,利用三重四極桿質(zhì)譜的母離子掃描或中性丟失掃描功能,掃描磷脂的特征子離子或中性丟失碎片實現(xiàn)快速、高通量的對不同磷脂(磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸)的定性和定量。應用鳥槍法脂質(zhì)組學研究策略分析了15種新鮮水產(chǎn)品中磷脂分子種和含量,結(jié)果表明,魚、蝦、貝類三類水產(chǎn)品中,海水魚類的磷脂含量最豐富可占到總脂含量的33.91-42.12%,其次是蝦類和貝類,淡水魚中磷脂含量最低,僅占到其總脂含量的12.85-18.33%。就磷脂分子種組成而言,蝦類的磷脂分子種信息最復雜,約含有55-73種磷脂分子,南極磷蝦磷脂組成與其他蝦類不同,僅含有31種磷脂分子。魚類中的磷脂分子種最簡單,僅含有41-62種磷脂分子,貝類中EPA和DHA型磷脂含量最為豐富,并且貝類中富含縮醛磷脂,以牡蠣中縮醛磷脂含量最為豐富,可占到總磷脂含量的11.23%。新鮮水產(chǎn)品原料中溶血性磷脂含量普遍較少。其后,應用直接進樣電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測定了3種水產(chǎn)品(太平洋鱈魚、南美白對蝦、褶牡蠣)的磷脂含量及其分子種組成在4℃和-20℃貯藏條件下的變化。結(jié)果顯示,在不同貯藏條件下,三種水產(chǎn)品原料中磷脂含量均呈現(xiàn)減少的趨勢。溶血磷脂的變化趨勢為先上升后下降,其變化同磷脂變化有一定相關(guān)性,當磷脂減少速率增加時溶血性磷脂含量上升速度顯著增加。在-20℃貯藏條件下,三種水產(chǎn)品中磷脂和溶血性磷脂含量變化不明顯,表明磷脂和溶血性磷脂在低溫儲藏過程中能夠保持長時間的穩(wěn)定。通過對五種磷脂水解酶(脂肪酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D)的檢測分析,南美白對蝦中各類磷脂水解酶活力最高,在貯藏過程中,3種水產(chǎn)品在4℃儲藏條件下有較高的磷脂酶活力,而在-20℃酶活力在一定程度上被抑制。分析磷脂酶變化速率與磷脂變化的相關(guān)性表明,在貯藏過程中磷脂的降解主要為磷脂酶A2的作用,相關(guān)系數(shù)均大于0.9,同時磷脂酶D在磷脂酰肌醇的水解過程中表現(xiàn)出較強的水解活力(r0.9)。最后,通過從南美白對蝦中提取純化的磷脂酶分析磷脂的水解機理,提純酶液中包括脂肪酶、PLA,、PLA2、PLC及PLD。分析發(fā)現(xiàn),磷脂酶可以水解純化的南美白對蝦磷脂和蛋黃卵磷脂,產(chǎn)生相應的游離脂肪酸(FFA)和溶血性磷脂(LPLs),二者與磷脂的水解變化呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系,南美白對蝦純化得到的PC含量由516.45mg/g降至146.14mg/g,磷脂以多不飽和脂肪酸(PUFA)含量最為豐富。蛋黃卵磷脂中PC含量由517.22mg/g降至408.20mg/g,蛋黃卵磷脂中以單不飽和脂肪酸和飽和脂肪酸含量最為豐富。FFA含量顯著增加,南美白對蝦磷脂中PUFA含量增加了280.40mg/g(p0.001),蛋黃卵磷脂中PUFA含量增加了79.89mg/g(p0.001)。FFA中的PUFA顯著增加與PLA2含量豐富有關(guān)(p0.05)。說明磷脂酶可以水解磷脂產(chǎn)生一系列水解產(chǎn)物,對水產(chǎn)品磷脂在貯藏過程中的水解機理進行了初步探究并為后續(xù)研究提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：磷脂 水產(chǎn)品 鳥槍法 貯藏 水解
【學位授予單位】：中國海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：TS254.4
【目錄】：

• 摘要5-7
• abstract7-14
• 0 前言14-26
• 0.1 磷脂的結(jié)構(gòu)和生物學功能14-17
• 0.1.1 磷脂的分類與結(jié)構(gòu)14-15
• 0.1.2 磷脂的理化性質(zhì)15-16
• 0.1.3 磷脂的生理活性16-17
• 0.2 水產(chǎn)品磷脂研究概述17-18
• 0.2.1 水產(chǎn)品磷脂研究現(xiàn)狀17-18
• 0.2.2 水產(chǎn)品貯藏過程中磷脂水解研究現(xiàn)狀18
• 0.3 磷脂組學分析方法的建立18-22
• 0.3.1 磷脂的提取方法19
• 0.3.2 磷脂的分離方法19-20
• 0.3.3 磷脂種類及分子種的鑒定方法20-21
• 0.3.4 數(shù)據(jù)分析方法21-22
• 0.4 磷脂水解研究現(xiàn)狀22-24
• 0.4.1 脂肪酶和磷脂酶的分類22-23
• 0.4.2 磷脂酶的提取純化23-24
• 0.4.3 水產(chǎn)品中磷脂酶的研究現(xiàn)狀24
• 0.5 本論文的目的和意義24-26
• 1 不同水產(chǎn)品中的磷脂輪廓及分子種含量分析26-51
• 1.1 材料與儀器26-27
• 1.1.1 試劑與材料26-27
• 1.1.2 設備儀器27
• 1.2 實驗方法27-28
• 1.2.1 原料預處理27
• 1.2.2 水分含量測定27
• 1.2.3 總脂提取及含量測定27-28
• 1.2.4 甘油三酯含量測定28
• 1.2.5 磷脂含量測定28
• 1.2.6 鳥槍法分析磷脂種類及分子種28
• 1.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析28
• 1.3 結(jié)果與討論28-49
• 1.3.1 不同水產(chǎn)品脂質(zhì)組成及含量28-29
• 1.3.2 15種水產(chǎn)品磷脂種類及分子種組成29-48
• 1.3.2.1 不同魚類中的磷脂組成32-37
• 1.3.2.2 不同蝦類中的磷脂組成37-42
• 1.3.2.3 不同貝類中的磷脂組成42-46
• 1.3.2.4 不同水產(chǎn)品中的溶血性磷脂組成46-48
• 1.3.3 主成分分析(PCA)48-49
• 1.4 本章小結(jié)49-51
• 2 三種水產(chǎn)品磷脂在不同貯藏條件下的水解變化51-69
• 2.1 材料與儀器51-52
• 2.1.1 試劑與材料51-52
• 2.1.2 設備儀器52
• 2.2. 實驗方法52-55
• 2.2.1 原料預處理52
• 2.2.2 水分含量測定52
• 2.2.3 總脂提取及含量測定52
• 2.2.4 磷脂含量測定52-53
• 2.2.5 磷脂水解酶的提取53
• 2.2.6 磷脂水解酶相關(guān)酶活測定53-54
• 2.2.6.1 脂肪酶酶活測定53
• 2.2.6.2 磷脂酶A_1酶活測定53-54
• 2.2.6.3 磷脂酶A_2酶活測定54
• 2.2.6.4 磷脂酶C酶活測定54
• 2.2.6.5 磷脂酶D酶活測定54
• 2.2.7 數(shù)據(jù)分析54-55
• 2.3 結(jié)果與討論55-68
• 2.3.1 鱈魚中磷脂及磷脂酶在貯藏過程中的變化55-59
• 2.3.2 南美白對蝦中磷脂及磷脂酶在貯藏過程中的變化59-63
• 2.3.3 牡蠣中磷脂及磷脂酶在貯藏過程中的變化63-68
• 2.4. 本章小結(jié)68-69
• 3 水產(chǎn)品貯藏過程中磷脂的水解機理研究69-81
• 3.1 材料與儀器69-70
• 3.1.1 試劑與材料69
• 3.1.2 設備儀器69-70
• 3.2. 實驗方法70-72
• 3.2.1 原料預處理70
• 3.2.2 水分含量測定70
• 3.2.3 蛋白濃度測定70
• 3.2.4 磷脂酶提取及純化70
• 3.2.5 磷脂酶活力測定70
• 3.2.6 PC的提取純化70-71
• 3.2.7 磷脂水解機理探究71-72
• 3.2.7.1 底物制備及磷脂水解模型的建立71
• 3.2.7.2 游離脂肪酸種類及含量測定71
• 3.2.7.3 磷脂種類及含量測定71
• 3.2.7.4 磷脂酶酶活測定71-72
• 3.3 結(jié)果與討論72-80
• 3.3.1 磷脂酶提取方法優(yōu)化72
• 3.3.2 磷脂酶純化方法優(yōu)化72-73
• 3.3.3 磷脂酶水解模擬反應及機理初探73-80
• 3.3.3.1 磷脂酶水解模擬反應中磷脂的變化74-76
• 3.3.3.2 磷脂酶水解模擬反應中溶血性磷脂的變化76-77
• 3.3.3.3 磷脂酶水解模擬反應中游離脂肪酸的變化77-80
• 3.3.3.4 磷脂水解機理初探80
• 3.4 本章小結(jié)80-81
• 論文總結(jié)81-82
• 創(chuàng)新點82-83
• 參考文獻83-92
• 附錄92-94
• 致謝94-95
• 個人簡歷95-96
• 發(fā)表論文情況96

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本文編號：450275