本文關(guān)鍵詞：基于酶促改性的抗氧化絲素膜的制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：絲素蛋白作為天然的高分子,具有良好的機械性能和生物相容性,在醫(yī)學(xué)和組織工程等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。兒茶素是具有抗氧化作用的天然多酚化合物,對多種自由基具有清除功效。本文擬借助于生物酶法,將兒茶素接枝到再生絲素蛋白表面,提高絲素蛋白的抗氧化性能,拓展其應(yīng)用領(lǐng)域。實驗中考察了酪氨酸酶對三種兒茶酚的催化氧化作用,探究了酶用量、氧氣濃度和反應(yīng)時間對氧化反應(yīng)的影響,借助于液相質(zhì)譜(LC-MS)研究了兒茶素的氧化機理；以紅外光譜法(FTIR)分析了酶催化兒茶素與氨基模型物(ε-聚賴氨酸,s-PLL)反應(yīng)的可行性；以凝膠電泳法(SDS-PAGE)、高效液相(HPLC)和核磁共振氫譜(1H-NMR)技術(shù)手段,探究了溶液中酶促絲素與兒茶素反應(yīng)后蛋白分子量分布及游離氨基數(shù)量的變化；結(jié)合DPPH和ABTS法測定了酶促絲素接枝兒茶素后膜材料的抗氧化性；通過計算NIH/3T3細胞在絲素膜樣品的存活率,評價了膜材料的生物相容性。研究結(jié)果表明,兒茶素在酪氨酸酶催化氧化過程中,不僅生成多巴、多巴醌類物質(zhì)氧化產(chǎn)物,還相互聚合生成部分二聚體；酶催化兒茶素與ε-PLL反應(yīng)后,產(chǎn)物結(jié)構(gòu)中具有兒茶素的苯環(huán)特征,表明兒茶素被催化氧化接枝到氨基化合物模型物中。SDS-PAGE和HPLC的分析結(jié)果表明,絲素蛋白接枝兒茶素后其分子量增加,1H-NMR也驗證了酪氨酸酶催化兒茶素與絲素反應(yīng)后,體系中伯胺基數(shù)量減少,上述方法與手段證實兒茶素與絲素蛋白分子間發(fā)生反應(yīng)。絲素膜經(jīng)1 U/mL酪氨酸酶、0.3 mM兒茶素在pH 7、20-30-C處理后,獲得了一定的抗氧化性,且延長反應(yīng)時間有利于增加膜材料的抗氧化性。酶促兒茶素接枝的絲素膜經(jīng)過8 h洗滌后,其抗氧化性略高于未經(jīng)酶處理的對照樣,驗證了酶法構(gòu)建的抗氧化絲素膜有一定的持久性。從TG-DTG曲線可以看出,改性后絲素?zé)崃W(xué)性能無明顯變化,NIH/3T3細胞在絲素膜樣品及對照樣上存活率均≥80%,表明改性絲素膜有良好的生物相容性,在醫(yī)學(xué)及組織材料領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：絲素蛋白 酪氨酸酶 兒茶素 抗氧化性
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：TS102.33
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 第一章 緒論8-15
• 1.1 絲素蛋白8-9
• 1.1.1 絲素的組成與結(jié)構(gòu)8
• 1.1.2 絲素蛋白的改性8-9
• 1.1.3 絲素蛋白的其他用途9
• 1.2 酪氨酸酶的結(jié)構(gòu)和生理功能9-10
• 1.3 兒茶素10-13
• 1.3.1 兒茶素的種類及其結(jié)構(gòu)特點10-11
• 1.3.2 兒茶素的抗氧化機理11-12
• 1.3.3 兒茶素的應(yīng)用12-13
• 1.4 本課題研究的目的、意義和內(nèi)容13-15
• 1.4.1 研究的目的和意義13
• 1.4.2 本課題研究內(nèi)容13-15
• 第二章 實驗材料、儀器和方法15-21
• 2.1 實驗材料與試劑15-16
• 2.1.1 實驗材料15
• 2.1.2 實驗試劑15-16
• 2.2 實驗儀器16
• 2.3 實驗方法16-18
• 2.3.1 酪氨酸酶用量和氧濃度對兒茶酚催化氧化的影響16-17
• 2.3.2 酶催化氧化兒茶素體系溶氧量變化17
• 2.3.3 絲素蛋白溶液的制備17
• 2.3.4 絲素溶液濃度標定方法17
• 2.3.5 絲素蛋白膜的制備與醇化17
• 2.3.6 酪氨酸酶催化氧化絲素蛋白溶液17
• 2.3.7 酪氨酸酶催化兒茶素與絲素蛋白膜接枝17-18
• 2.4 測試方法18-21
• 2.4.1 多巴與多巴醌含量分析18
• 2.4.2 游離氨基含量分析18
• 2.4.3 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS)18
• 2.4.4 SDS-PAGE18-19
• 2.4.5 HPLC19
• 2.4.6 ATR-FTIR19
• 2.4.7 核磁共振氫譜(~1H-NMR)19
• 2.4.8 絲素蛋白膜抗氧化性測定19-20
• 2.4.9 電鏡掃描(SEM)20
• 2.4.10 熱重法-微商熱重法(TG-DTG)20
• 2.4.11 生物相容性20-21
• 第三章 酪氨酸酶催化氧化兒茶素的研究21-30
• 3.1 不同條件下對兒茶酚的催化效果21-25
• 3.1.1 時間對酪氨酸酶催化氧化兒茶酚的影響21-22
• 3.1.2 酪氨酸酶用量對酶催化兒茶酚的影響22-24
• 3.1.3 氧氣的濃度酪氨酸酶酶活催化兒茶酚的變化24-25
• 3.2 酶催化氧化兒茶素產(chǎn)物組成及反應(yīng)機制25-29
• 3.2.1 酪氨酸酶催化兒茶素氧化產(chǎn)物25-26
• 3.2.2 兒茶素酶催化氧化反應(yīng)機理探究26-29
• 3.3 酶催化氧化兒茶素處理后反應(yīng)液抗氧化性29
• 3.4 本章小結(jié)29-30
• 第四章 酶催化氧化兒茶素與絲素蛋白的反應(yīng)機制30-40
• 4.1 酶促兒茶素與氨基模型物反應(yīng)可行性30-32
• 4.2 酶促兒茶素接枝絲素蛋白的反應(yīng)性32-34
• 4.2.1 SDS-PAGE與HPLC表征改性絲素分子量32-33
• 4.2.2 兒茶素與絲素反應(yīng)中游離氨基的變化33-34
• 4.3 酶促兒茶素接枝絲素膜工藝與抗氧化相關(guān)性34-38
• 4.3.1 反應(yīng)時間對抗氧化性的影響35
• 4.3.2 反應(yīng)溫度對改性絲素膜抗氧化性的影響35-37
• 4.3.3 DPPH法評價酶促兒茶素接枝絲素的持久性37
• 4.3.4 ABTS法評價酶促兒茶素氧化與絲素膜接枝后持久性37-38
• 4.4 本章小結(jié)38-40
• 第五章 絲素膜的微觀結(jié)構(gòu)及其生物相容性40-45
• 5.1 酶催化氧化兒茶素處理對絲素膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響(SEM)40
• 5.2 酶催化氧化兒茶素處理絲素膜熱性能變化(TG-DTG)40-41
• 5.3 生物相容性41-44
• 5.3.1 細胞毒理性41-43
• 5.3.2 熒光染色觀察43-44
• 5.4 本章小結(jié)44-45
• 第六章 結(jié)論與展望45-47
• 6.1 結(jié)論45
• 6.2 不足之處及未來展望45-47
• 6.2.1 不足45
• 6.2.2 展望45-47
• 致謝47-48
• 參考文獻48-51
• 附錄：作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文51

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 韓龍龍,張幼珠;稀土對絲素膜結(jié)構(gòu)及溶解性的作用研究[J];絲綢;2002年04期

2 盧神州,李明忠,王志青;絲素膜表面磺酸化研究[J];高分子材料科學(xué)與工程;2005年02期

3 羅桂蓮,楊雯,葉帆;成膜條件對絲素膜結(jié)構(gòu)及性能的影響[J];蘇州絲綢工學(xué)院學(xué)報;1992年04期

4 顧建華;再生絲素膜的β化作用[J];蘇州絲綢工學(xué)院學(xué)報;1993年01期

5 朱良均，，姚菊明，李幼祿;功能性絲素膜[J];絲綢;1996年11期

6 李明忠,盧神州,李叢新,李鋒,吳徵宇;復(fù)合絲素膜的制備[J];紡織學(xué)報;1998年06期

7 張幼珠,吳徵宇,霍錦_g,楊曉馬,徐幗英;中藥絲素膜的研制及其性能[J];絲綢;1999年08期

8 田保中,張幼珠,吳徵宇,徐幗英;藥物在絲素膜中釋放動力學(xué)參數(shù)的測定[J];蘇州絲綢工學(xué)院學(xué)報;2000年04期

9 盧神州,李明忠,高鴨坤,王建民,吳徵宇;應(yīng)力對絲素膜結(jié)構(gòu)與性能的影響[J];蘇州大學(xué)學(xué)報(工科版);2004年01期

10 李明忠,吳徵宇,盧神州,賈生賢,姚敏;多孔絲素膜的研制及性能研究[J];絲綢;2001年03期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李明忠;多孔絲素膜的制備及結(jié)構(gòu)、性能研究[D];東華大學(xué);2001年

2 尤仁傳;絲素材料表面微/納米形貌對細胞及脊髓修復(fù)的引導(dǎo)作用[D];蘇州大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 齊成龍;基于酶促改性的抗氧化絲素膜的制備[D];江南大學(xué);2015年

2 盧神州;絲素膜及其表面改性的研究[D];蘇州大學(xué);2003年

3 王玲爽;絲素材料對堿性成纖維細胞生長因子的吸附和控釋[D];蘇州大學(xué);2013年

4 孫啟龍;毛細血管中的氧擴散模型及其應(yīng)用研究[D];蘇州大學(xué);2007年

5 楊華;絲素膜的共混改性研究[D];蘇州大學(xué);2004年

6 霍群;蠶絲絲素膜AFP免疫傳感器的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2002年

7 劉向陽;絲素蛋白硬腦膜修復(fù)材料的生物相容性研究[D];蘇州大學(xué);2003年

8 劉雨;絲素材料裝載堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）后的促細胞生長作用[D];蘇州大學(xué);2010年

9 鄭忠厚;再生絲素蛋白材料的制備與性能研究[D];蘇州大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：基于酶促改性的抗氧化絲素膜的制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：324396