本文關(guān)鍵詞：草魚骨乳酸菌發(fā)酵液的制備及鈣生物利用率的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：一直以來,我國水產(chǎn)加工業(yè)快速發(fā)展所產(chǎn)生的大量下腳料沒有得到有效利用,約50-0%的魚廢物被丟棄,造成了蛋白源的浪費和環(huán)境的污染。魚骨中含有豐富的鈣資源,它的大量廢棄也造成了鈣源的浪費。多項研究證明乳酸菌可以對魚骨中的鈣進行轉(zhuǎn)化,增加可溶性鈣含量；且對于微生物來說,氮源一般是培養(yǎng)基中最昂貴的資源,魚廢物能夠為乳酸菌的生長提供氮源。因此,乳酸菌對魚骨進行發(fā)酵并研究其生理活性是研究補鈣產(chǎn)品的新途徑。本文通過菌株篩選,最終選擇腸膜明串珠菌為實驗菌株。采用軟化、勻漿、酶解的方式處理草魚骨用于培養(yǎng)基的配制并對酶解條件進行簡單的優(yōu)化,響應(yīng)面實驗優(yōu)化腸膜明串珠菌發(fā)酵草魚骨酶解液的工藝條件,綜合分析發(fā)酵液的鈣組成,研究該發(fā)酵液對大鼠鈣吸收和骨密度的影響,分析發(fā)酵液在體內(nèi)利用的有效性。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：1.菌株篩選和草魚骨處理條件優(yōu)化考察軟化、酶解處理對草魚骨發(fā)酵液菌落總數(shù)和可溶性鈣含量的影響,確定草魚骨的處理方式為軟化、勻漿、酶解。接著考察了加酶種類、酶解時間對發(fā)酵液菌落總數(shù)和可溶性鈣含量的影響。確定草魚骨用于培養(yǎng)基配制的最佳處理條件為：軟化(121℃,20 min),勻漿(中速,1 min),風(fēng)味蛋白酶酶解(溫度50℃、pH 6.0、加酶量2.5%、酶解時間2.5 h)。在最佳條件下,菌落總數(shù)達到3.27x 1010,可溶性鈣含量達到85.28 mg/L。較優(yōu)化前的菌落總數(shù)1.04×1 09,可溶性鈣含量20.61 mg/L,有了顯著提高,證明了腸膜明串珠菌發(fā)酵草魚骨液及利用其蛋白和鈣資源的可行性。2.發(fā)酵工藝的響應(yīng)面實驗優(yōu)化及發(fā)酵液鈣組成分析分別以發(fā)酵液的可溶性鈣含量和鈣轉(zhuǎn)化率為指標(biāo),對骨液濃度、碳源種類、碳源濃度、發(fā)酵起始pH、不同無機鹽種類進行單因素實驗,在骨液濃度、碳源濃度、發(fā)酵起始pH的單因素結(jié)果為零水平的基礎(chǔ)上,進行三因素三水平響應(yīng)面實驗。確定腸膜明串珠菌發(fā)酵草魚骨酶解液的最優(yōu)工藝條件為骨液濃度89.58g/L,碳源濃度15.62 g/L,發(fā)酵初始pH 5.25,此時鈣轉(zhuǎn)化率為5.56%。通過高效液相色譜分析、固相微萃取氣質(zhì)聯(lián)用分析的方法對發(fā)酵液的鈣組成進行了分析,確定發(fā)酵液中的可溶性鈣(45175mg/L,11.29 mmol/L)是以乳酸鈣(389 mmol/L)乙酸鈣(621 mmol/L)、氨基酸鈣、小分子肽鈣等形式共同存在的。3.草魚骨發(fā)酵液的鈣生物利用率研究通過連續(xù)喂養(yǎng)3周低鈣飼料的方式建立大鼠缺鈣模型,然后喂養(yǎng)不同的實驗飼料4周的大鼠正常生長實驗和鈣代謝實驗,測定了大鼠的體重增重率、鈣代謝指標(biāo)、血清指標(biāo)、股骨指標(biāo),探討草魚骨發(fā)酵液的生理活性。實驗結(jié)果表明草魚骨發(fā)酵液能夠促進大鼠的生長發(fā)育,大鼠體重增重率達到了41%,顯著高于低鈣組的31.88%(P0.05);通過鈣代謝實驗發(fā)現(xiàn)了魚骨液發(fā)酵液中復(fù)合態(tài)的有機鈣能夠在大鼠體內(nèi)得到良好的吸收,該組的鈣表觀吸收率達到了73.92%,顯著高于其他組；同時證明了發(fā)酵液的復(fù)合態(tài)鈣在大鼠體內(nèi)得到有效利用,使缺鈣大鼠的血清鈣、堿性磷酸酶水平、股骨重量、骨密度、股骨鈣含量恢復(fù)到正常水平,維持生物內(nèi)環(huán)境和骨骼質(zhì)量的穩(wěn)定。結(jié)果表明草魚骨發(fā)酵液具有較高的生理活性,有望成為新型補鈣制劑。
【關(guān)鍵詞】：草魚骨 腸膜明串珠菌 發(fā)酵 可溶性鈣含量 鈣生物利用率
【學(xué)位授予單位】：中國海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：TS254.9
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-14
• 0 前言14-27
• 0.1 草魚的研究現(xiàn)狀14-15
• 0.1.1 草魚的生物學(xué)特性14
• 0.1.2 草魚的開發(fā)利用14
• 0.1.3 草魚下腳料的開發(fā)利用14-15
• 0.2 骨源制品的研究現(xiàn)狀15-18
• 0.2.1 草魚骨的營養(yǎng)特性15-16
• 0.2.2 魚骨綜合利用的研究現(xiàn)狀16
• 0.2.3 骨鈣的可吸收性16-17
• 0.2.4 提高鮮骨綜合利用率的方法17-18
• 0.3 乳酸菌18-22
• 0.3.1 乳酸菌的生理功能18
• 0.3.2 乳酸菌的發(fā)酵類型及產(chǎn)物18-22
• 0.4 鈣及補鈣制品研究現(xiàn)狀22-25
• 0.4.1 鈣22
• 0.4.2 缺鈣現(xiàn)狀22
• 0.4.3 鈣吸收22-23
• 0.4.4 影響鈣吸收的因素23-24
• 0.4.5 補鈣制劑24
• 0.4.6 鮮骨發(fā)酵液生理活性的研究現(xiàn)狀24-25
• 0.5 本課題的立題背景、意義及研究內(nèi)容25-27
• 0.5.1 本課題的立題背景、意義25-26
• 0.5.2 本課題的研究內(nèi)容26-27
• 1 菌株篩選和草魚骨處理條件優(yōu)化27-41
• 引言27
• 1.1 材料與儀器27-28
• 1.1.1 實驗材料27
• 1.1.2 實驗試劑27
• 1.1.3 實驗儀器27-28
• 1.2 實驗方法28-33
• 1.2.1 實驗菌株的篩選28
• 1.2.2 不同處理方式的篩選28-29
• 1.2.3 不同草魚骨酶解液的制備29
• 1.2.4 乳酸含量的測定29-30
• 1.2.5 16SrRNA菌種鑒定30
• 1.2.6 可溶性鈣含量的測定30-32
• 1.2.7 魚骨液培養(yǎng)基中氨基酸態(tài)氮含量的測定32-33
• 1.2.8 統(tǒng)計學(xué)分析33
• 1.3 結(jié)果與討論33-39
• 1.3.1 實驗菌株的篩選33-34
• 1.3.2 草魚骨處理方式的篩選34-36
• 1.3.3 酶解條件的篩選36-39
• 1.4 結(jié)論39
• 1.5 本章小結(jié)39-41
• 2 發(fā)酵工藝的響應(yīng)面實驗優(yōu)化及發(fā)酵液鈣組成分析41-60
• 引言41
• 2.1 材料與儀器41-42
• 2.1.1 實驗材料41-42
• 2.1.2 實驗試劑42
• 2.1.3 實驗儀器42
• 2.2 實驗方法42-46
• 2.2.1 單因素實驗42-44
• 2.2.2 響應(yīng)面實驗44
• 2.2.3 可溶性鈣含量的測定44
• 2.2.4 相對分子量分布的測定44-45
• 2.2.5 有機酸含量的測定45
• 2.2.6 揮發(fā)性成分測定45-46
• 2.2.7 數(shù)據(jù)分析46
• 2.3 結(jié)果與討論46-58
• 2.3.1 單因素實驗結(jié)果46-50
• 2.3.2 響應(yīng)面實驗結(jié)果50-54
• 2.3.3 相對分子量分布的測定54-55
• 2.3.4 有機酸含量的測定55-57
• 2.3.5 揮發(fā)性成分測定57-58
• 2.4 結(jié)論58-59
• 2.5 本章小結(jié)59-60
• 3 魚骨發(fā)酵液的鈣生物利用率研究60-73
• 引言60
• 3.1 實驗材料與儀器60-61
• 3.1.1 實驗材料60
• 3.1.2 實驗試劑60
• 3.1.3 實驗儀器60-61
• 3.2 實驗方法61-66
• 3.2.1 魚骨酶解液和發(fā)酵液的制備61
• 3.2.2 實驗飼料的分組61-62
• 3.2.3 動物分組及飼喂方式62
• 3.2.4 攝食量和體重增重率的測定62-63
• 3.2.5 鈣表觀吸收率的測定63
• 3.2.6 液生化指標(biāo)的測定63-65
• 3.2.7 骨長、骨重、骨密度的測定65-66
• 3.2.8 骨鈣含量的測定66
• 3.2.9 數(shù)據(jù)分析66
• 3.3 結(jié)果與討論66-71
• 3.3.1 魚骨發(fā)酵液對大鼠體重增重率的影響66
• 3.3.2 魚骨發(fā)酵液對鈣表觀吸收率的影響66-67
• 3.3.3 魚骨發(fā)酵液對血清鈣、磷、堿性磷酸酶的影響67-69
• 3.3.4 魚骨發(fā)酵液對股骨長度、股骨重量、骨密度的影響69-70
• 3.3.5 魚骨發(fā)酵液對股骨鈣含量的影響70-71
• 3.4 結(jié)論71-72
• 3.5 本章小結(jié)72-73
• 4 全文總結(jié)、研究特色與不足73-75
• 4.1 全文總結(jié)73-74
• 4.2 研究特色與不足74-75
• 4.2.1 研究特色74
• 4.2.2 不足74-75
• 參考文獻75-82
• 致謝82-83
• 個人簡歷83
• 發(fā)表的學(xué)術(shù)論文83

【參考文獻】

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本文編號：313828