本文關(guān)鍵詞：肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌的污染情況、耐藥性、耐藥基因及PFGE分型研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：沙門氏菌是引起人類食物中毒最常見的食源性病原菌,主要引起發(fā)熱、胃腸炎、腹瀉和敗血癥。近年來沙門氏菌對(duì)抗生素的耐藥性逐年增強(qiáng),且其耐藥性可通過食物鏈傳遞給人群。因此,研究沙門氏菌,特別是耐藥沙門氏菌在食品鏈的分布和傳播情況,對(duì)公共衛(wèi)生安全具有重要意義。本試驗(yàn)從四川省某一重點(diǎn)肉雞屠宰生產(chǎn)鏈分離鑒定出189株沙門氏菌的基礎(chǔ)上,進(jìn)行血清型、耐藥性分析,1類整合子／基因盒、gyrA和parC基因突變、磺胺類耐藥基因(sul1. sul2和sul3)、四環(huán)素類耐藥基因(tet(A)、tet(B)、tet(C)和tet(G))、β-內(nèi)酰胺類耐藥基因(blaTEM、blaCTX-M和blaSHV)、氨基糖苷類耐藥基因(aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅳ和ant(2')-Ⅰ)和氟苯尼考耐藥基因floR的PCR檢測(cè)及PFGE分型,主要結(jié)果如下。1肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌的分離鑒定 2012-2014年,從肉雞屠宰生產(chǎn)鏈采集肉雞盲腸樣(代表屠宰前)、屠宰環(huán)節(jié)胴體表面、分割雞肉和成品雞肉樣品共627份,按照GB 4789.4-2010的方法,并以沙門氏菌屬特異性基因invA和hut基因準(zhǔn)確鑒定沙門氏菌。結(jié)果顯示,從樣品中準(zhǔn)確鑒定出189株沙門氏菌,其中腸炎沙門氏菌132株,鼠傷寒沙門氏菌29株,其他沙門氏菌28株,沙門氏菌總分離率為30.1%,其中,腸炎沙門氏菌占總分離株的69.8%。屠宰前糞樣、屠宰環(huán)節(jié)胴體表面、分割雞肉、成品雞肉中沙門氏菌分離率分別為47.96%、18.78%、31.33%、14.00%。2肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌的耐藥性分析采用紙片擴(kuò)散法,測(cè)定了189株沙門氏菌對(duì)10種抗生素的敏感性,結(jié)果表明沙門氏菌對(duì)萘啶酸的耐藥率最高,為99.5%,對(duì)氨芐西林(87.8%),四環(huán)素(51.9%),環(huán)丙沙星(48.7%),甲氧芐啶／磺胺甲嗯唑(48.1%),大觀霉素(34.4%)耐藥率較高,對(duì)氟苯尼考、慶大霉素、阿莫西林／克拉維酸、頭孢曲松耐藥率較低。189株沙門氏菌共產(chǎn)生了49種耐藥譜,多重耐藥率為60.8%。沙門氏菌多重耐藥率沿屠宰生產(chǎn)鏈逐漸增加,從50.0%增加到78.6%。3耐藥沙門氏菌耐藥基因情況3.1多重耐藥沙門氏菌1類整合子及基因盒 115株多重耐藥沙門氏菌中1類整合子檢出率為37.4%(43/1 1 5)。其中,腸炎沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌1類整合子陽性率分別為32.9%和72.4%：成品雞肉、屠宰環(huán)節(jié)胴體表面、屠宰前糞樣和分割雞肉1類整合子檢測(cè)率分別為72.7%、38.9%、34.5%和29.0%。43株1類整合子陽性菌株中,有21株擴(kuò)增出不同片段大小的基因盒,測(cè)序結(jié)果表明1類整合子攜帶的基因盒為bla(OXA-30)-aadA1(β-內(nèi)酰胺類和氨基糖苷類耐藥耐藥基因)和drfA1-orfC(季胺鹽類耐藥基因)。3.2 gyrA和parC基因突變情況對(duì)188株喹諾酮耐藥的沙門氏菌gyrA基因Asp87、Ser83突變和parC基因Ser80、Glu84突變情況進(jìn)行MAMAPCR檢測(cè),結(jié)果gyrA基因Asp87和Ser83突變檢出率分別為80.5%和75.0%,parC基因Ser80和Glu84突變檢出率分別為72.9%和76.6%。3.3 p-內(nèi)酰胺類耐藥基因 對(duì)166株對(duì)氨芐西林耐藥的沙門氏菌進(jìn)行blaTEM、blaSHV、blaCTX-M基因的PCR檢測(cè),結(jié)果blaTEM檢出率最高為93.4%(155/166),其次blaCTX-M檢出率為12.7%(21/166),未檢測(cè)到blaSHV基因。3.4氨基糖苷類耐藥基因 對(duì)79株氨基糖苷類耐藥沙門氏菌進(jìn)行aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅳ和ant(2')-Ⅰ基因的PCR檢測(cè)。79株對(duì)氨基糖苷類抗生素耐藥的沙門氏菌中,aac(3)-Ⅱ和aac(3)-Ⅳ基因檢測(cè)率分別為35.4%和53.2%,未檢測(cè)到ant(2')-Ⅰ基因。3.5磺胺類耐藥基因?qū)?1株磺胺類耐藥沙門氏菌進(jìn)行sul1、sul2和sul3基因的PCR檢測(cè)。91株對(duì)甲氧芐啶/磺胺甲VA唑耐藥的沙門氏菌,sull、sul2和sul3基因檢出率分別為50.5%、97.8%和50.5%。3.6四環(huán)素類耐藥基因 對(duì)98株四環(huán)素耐藥的沙門氏菌進(jìn)行tet(A)、tet(B)、 tet(C)和tet(G)基因的PCR檢測(cè)。98株對(duì)四環(huán)素耐藥的沙門氏菌中,tet(A)、tet(B)和tet(C)基因檢測(cè)率分別為25.5%、50.0%和71.4%,未檢測(cè)到tet(G)基因。3.7氟苯尼考類耐藥基因 對(duì)45株氟苯尼考耐藥的沙門氏菌進(jìn)行floR基因的PCR檢測(cè)。45株對(duì)氟苯尼考耐藥的沙門氏菌中,44株檢測(cè)到floR基因,檢出率為97.8%。3.8肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌的PFGE分型采用X-bal內(nèi)切酶消化沙門氏菌DNA,利用PFGE分析189株肉雞屠宰生產(chǎn)鏈分離沙門氏菌的遺傳關(guān)系。通過PFGE電泳圖聚類分析,189株沙門氏菌PFGE條帶相似度在27.25%～100%,共產(chǎn)生了21種帶型。同一血清型沙門氏菌基本聚在一起。譜型分析結(jié)果表明,在屠宰過程中沙門氏菌有可能沿著屠宰鏈從上游環(huán)節(jié)到成品雞肉傳播的趨勢(shì),且在屠宰過程存在環(huán)境和人員操作的交叉污染。本文分析了肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌污染和耐藥性情況,為肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌污染和耐藥性提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)；對(duì)沙門氏菌耐藥基因進(jìn)行檢測(cè),為研究沙門氏菌耐藥性產(chǎn)生機(jī)制提供參考；對(duì)肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌進(jìn)行PFGE分型,為研究沙門氏菌在肉雞屠宰生產(chǎn)鏈的傳播提供現(xiàn)實(shí)和理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：沙門氏菌 耐藥性 耐藥基因 PFGE 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：TS251.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 縮略詞表11-15
• 1 前言15-28
• 1.1 沙門氏菌污染情況15-18
• 1.1.1 國(guó)外動(dòng)物源沙門氏菌污染情況15-16
• 1.1.2 國(guó)內(nèi)動(dòng)物源沙門氏菌污染情況16-18
• 1.2 沙門氏菌的檢測(cè)方法18
• 1.3 沙門氏菌表型耐藥現(xiàn)狀18-21
• 1.4 沙門氏菌對(duì)常見抗菌藥耐藥機(jī)制21-25
• 1.4.1 β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥機(jī)制21-22
• 1.4.2 氨基糖苷類抗生素耐藥機(jī)制22
• 1.4.3 磺胺類抗生素耐藥機(jī)制22-23
• 1.4.4 四環(huán)素類耐藥機(jī)制23
• 1.4.5 喹諾酮類耐藥機(jī)制23-24
• 1.4.6 氯霉素耐藥機(jī)制24
• 1.4.7 Ⅰ類整合子與多重耐藥性24-25
• 1.5 沙門氏菌的脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)分型25-26
• 1.6 研究的目的和意義26-27
• 1.7 研究的主要內(nèi)容和技術(shù)路線27-28
• 1.7.1 研究?jī)?nèi)容27
• 1.7.2 技術(shù)路線27-28
• 2 材料與方法28-38
• 2.1 材料28-30
• 2.1.1 樣品28-29
• 2.1.2 菌株29
• 2.1.3 培養(yǎng)基29
• 2.1.4 生化試劑29
• 2.1.5 抗生素29-30
• 2.1.6 主要儀器30
• 2.2 方法30-38
• 2.2.1 沙門氏菌的分離鑒定30-32
• 2.2.2 沙門氏菌的血清分型32
• 2.2.3 藥敏試驗(yàn)32-33
• 2.2.4 沙門氏菌耐藥基因檢測(cè)33-36
• 2.2.5 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌的PFGE基因分型36-38
• 3 結(jié)果與分析38-56
• 3.1 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌污染情況38-39
• 3.2 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌耐藥性情況39-42
• 3.3 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌多重耐藥情況42-45
• 3.4 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌1類整合子與基因盒檢測(cè)結(jié)果45-46
• 3.5 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌喹諾酮類gyrA和parC基因突變點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果46-47
• 3.6 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌耐藥基因擴(kuò)增結(jié)果47-51
• 3.6.1 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌β-內(nèi)酰胺類耐藥基因檢測(cè)結(jié)果47-48
• 3.6.2 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌氨基糖苷類耐藥基因檢測(cè)結(jié)果48-49
• 3.6.3 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌磺胺類耐藥基因檢測(cè)結(jié)果49-50
• 3.6.4 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌四環(huán)素耐藥基因檢測(cè)結(jié)果50-51
• 3.6.5 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌氟苯尼考耐藥基因檢測(cè)結(jié)果51
• 3.7 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌PFGE分析結(jié)果51-56
• 3.7.1 腸炎沙門氏菌PFGE分型結(jié)果52-55
• 3.7.2 鼠傷寒沙門氏菌PFGE分型結(jié)果55-56
• 4 討論56-63
• 4.1 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌污染情況分析56-57
• 4.2 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌的血清型分析57
• 4.3 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌耐藥性情況分析57-58
• 4.4 沙門氏菌耐藥基因分析58-62
• 4.4.1 1類整合子與多重耐藥性相關(guān)性分析58
• 4.4.2 喹諾酮類gyrA和parC基因與表型耐藥相關(guān)性分析58-59
• 4.4.3 β-內(nèi)酰胺類耐藥基因分析59-60
• 4.4.4 氨基糖苷類耐藥基因分析60
• 4.4.5 磺胺類耐藥基因分析60-61
• 4.4.6 四環(huán)素耐藥基因分析61
• 4.4.7 氟苯尼考耐藥基因分析61-62
• 4.5 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌PFGE分析62-63
• 5 結(jié)論與展望63-66
• 5.1 結(jié)論63-64
• 5.2 創(chuàng)新點(diǎn)64
• 5.3 展望64-66
• 參考文獻(xiàn)66-75
• 致謝75-76
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文76

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