【摘要】：荔枝螺為福建海域常見的食用螺類,可入藥,由于自然分布的地域性,國內(nèi)外對其生物活性物質(zhì)的研究還較少,本論文以海洋荔枝螺為研究材料,對其活性物質(zhì)的提取分離以及抗癌活性的研究進(jìn)行了探討,試圖解釋其抗癌活性機(jī)制及物質(zhì)基礎(chǔ),為海洋天然產(chǎn)物的提取分離純化方法以及其抗癌活性篩選及機(jī)制研究提供參考,對海洋來源的天然藥物研究具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)以荔枝螺為研究材料,用有機(jī)溶劑浸提法對其活性成分進(jìn)行提取,并用薄層色譜、硅膠柱層析以及制備型液相色譜進(jìn)行分離純化,通過細(xì)胞增殖檢測、細(xì)胞凋亡壞死檢測、線粒體膜電位檢測以及PARP蛋白的剪切等手段分析細(xì)胞水平的抗癌活性,解釋其抗癌機(jī)制。經(jīng)過硅膠柱層析對荔枝螺提取物進(jìn)行初步分離得到的組分EA-2用CCK-8溶液檢測證明其對乳腺癌細(xì)胞MCF-7、肝癌細(xì)胞QGY-7703的增殖具有顯著抑制作用,當(dāng)藥物濃度高于40μg/ml時(shí),兩種癌細(xì)胞存活率顯著下降(56%),EA-2對MCF-7和QGY-7703的IC50分別為28 μg/ml和46 μg/ml。EA-2使乳腺癌細(xì)胞MCF-7線粒體膜電位顯著下降,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生凋亡式變化,凋亡細(xì)胞的數(shù)量顯著增加,同時(shí)能夠使肝癌細(xì)胞QGY-7703發(fā)生PARP蛋白剪切,加入泛Caspase抑制劑后細(xì)胞存活率增加,說明其對癌細(xì)胞的抑制作用主要是通過致凋亡的方式實(shí)現(xiàn)的。最后通過硅膠柱層析以及制備型高效液相色譜等方法對活性組分進(jìn)一步分離純化,得到高純度化合物(98%),通過核磁共振、質(zhì)譜等對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,證明其為 6-溴靛紅(6-bromoisatin)。大多數(shù)的天然藥物來源于陸生植物,因其安全、毒副作用小的特性受到人們廣泛關(guān)注,本實(shí)驗(yàn)對21種植物來源的化合物進(jìn)行了抗腫瘤活性篩選,并用同樣方法對其抗癌活性機(jī)制進(jìn)行了初步探討。21種化合物作用于人膀胱癌細(xì)胞T24和KU-19-19,篩選出能夠抑制細(xì)胞增殖的藥物,然后通過細(xì)胞增殖、凋亡壞死、線粒體膜電位等檢測手段對其抗腫瘤活性進(jìn)行進(jìn)一步的分析。篩選結(jié)果顯示葫蘆素B對T24細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用,通過進(jìn)一步的分析,葫蘆素B能夠使癌細(xì)胞形態(tài)明顯改變,經(jīng)Hoechst33342以及PI染色后可觀察到凋亡細(xì)胞數(shù)量隨藥物濃度增加。線粒體膜電位的下降也證明了葫蘆素B以致凋亡的方式實(shí)現(xiàn)了抗腫瘤作用。葫蘆素B的抗癌活性于荔枝螺抗癌活性同樣是由誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡實(shí)現(xiàn)的,可為海洋及陸地來源的天然產(chǎn)物抗癌活性機(jī)制研究提供一個(gè)初步的參考。
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：TQ464

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2582067