本文選題：菜籽多糖　切入點(diǎn)：化學(xué)修飾　出處：《合肥工業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：本研究以菜籽為原料,經(jīng)預(yù)處理、提取、分離和純化得到均一菜籽多糖RPM1-a,采用單糖組成分析、甲基化分析和核磁共振技術(shù)對其一級結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析,并研究了RPM1-a的流變性質(zhì);對RPM1-a分別進(jìn)行硫酸化修飾、乙�；揎椇汪燃谆揎�,評價(jià)了RPM1-a及其修飾產(chǎn)物的體外抗氧化活性以及對腸道益生菌體外增殖活性的影響。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1.菜籽多糖的提取、分離和純化。菜籽經(jīng)過脫殼、粉碎、去油脂、除色素等預(yù)處理后,用氫氧化鈉溶液浸提,然后通過脫蛋白、濃縮、醇沉、離心、冷凍干燥得到菜籽粗多糖。分別以去離子水和0.10 mol/L NaCl溶液為洗脫液,將粗多糖通過DEAE-Bestarose柱層析分離,收集由去離子水洗脫的組分,經(jīng)過透析和冷凍干燥后,再用Chromdex-200層析柱進(jìn)一步純化,最后得到多糖組分RPM1-a。2.菜籽多糖一級結(jié)構(gòu)的解析。紅外光譜分析表明,RPM1-a具有多糖的特征吸收峰,為多糖類物質(zhì);高效液相色譜分析表明,RPM1-a為相對均一的多糖組分,相對分子量約為15.96 kDa。由氣相色譜分析的結(jié)果可知,RPM1-a由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖組成,各單糖的摩爾比為3.70:47.00:21.30:27.90。綜合甲基化分析和核磁共振波譜分析的結(jié)果可以推斷,RPM1-a的主鏈由→6)-β-Galp-(1→、→3,4)-α-Rhap-(1→和→4)-α-Glcp-(1→構(gòu)成,其O-3、O-4位被支鏈取代;主要支鏈和次要支鏈分別由β-Araf-(1→(5-β-Araf-1)16→(3-β-Araf-1)13→3)-β-Galp-(1→和β-Galp-(1→4)-β-Galp-(1→構(gòu)成。其中,主要支鏈取代在O-3位,次要支鏈取代在O-4位。3.菜籽多糖的流變性質(zhì)。采用流變儀研究了外界條件的改變對菜籽多糖黏度的影響。結(jié)果顯示,菜籽多糖RPM1-a溶液黏度隨其濃度的增加而增大,隨溫度和剪切速率的增大而減小;濃度對溶液黏度的影響較顯著,穩(wěn)態(tài)剪切條件下高濃度RPM1-a溶液(10%,m:v)為典型的假塑性非牛頓流體。pH對RPM1-a溶液的黏度影響較顯著,在pH 5~9,溶液黏度隨pH增大而增大;但當(dāng)pH大于9時(shí),溶液黏度呈降低趨勢。Ca~(2+)對RPM1-a黏度的變化的影響較為顯著,且隨著Ca~(2+)濃度的增大,溶液黏度呈上升趨勢。4.菜籽多糖的化學(xué)修飾。菜籽多糖RPM1-a經(jīng)硫酸化、乙�；汪燃谆揎�,分別得到相應(yīng)產(chǎn)物:SRPM1-a、Ac RPM1-a和CRPM1-a。紅外光譜分析顯示,SRPM1-a在1250 cm-1附近有不對稱S=O鍵伸縮振動(dòng)引起的吸收峰,830cm-1左右有C-O-S拉伸振動(dòng)引起的吸收峰,588 cm-1附近有硫酸根基團(tuán)O-S-O的對稱變形引起的吸收峰;Ac RPM1-a 1735 cm-1附近的吸收峰由-COCR中的C=O不對稱伸縮振動(dòng)引起,1373 cm-1左右有H-C=O引起的吸收峰,1247 cm-1附近有C-O引起的吸收峰;CRPM1-a 1635 cm-1處吸收峰消失,而在1596、1421和1324 cm-1處出現(xiàn)由C=O、C-O和COO-引起的吸收峰。以上結(jié)果表明,硫酸化、乙�；汪燃谆揎棾晒�。5.構(gòu)建超氧陰離子自由基、羥基自由基、DPPH·自由基和Fe2+誘發(fā)的油脂過氧化等抗氧化體系,探索硫酸化修飾產(chǎn)物(SRPM1-a)、乙�；揎棶a(chǎn)物(Ac RPM1-a)和羧甲基化修飾產(chǎn)物(CRPM1-a)的抗氧化性,并與未經(jīng)修飾的菜籽多糖(RPM1-a)的抗氧化性進(jìn)行比較。結(jié)果表明,RPM1-a經(jīng)硫酸化修飾后,體外抗氧化活性得到一定的增強(qiáng);硫酸化產(chǎn)物SRPM1-a對超氧陰離子自由基和DPPH·自由基的清除作用,以及Fe2+誘發(fā)的油脂過氧化抑制作用均優(yōu)于其他三種多糖。在乙�；汪燃谆揎棶a(chǎn)物中,體外抗氧化活性未見顯著增強(qiáng);乙�；a(chǎn)物的抗氧化活性低于未經(jīng)修飾的菜籽多糖。這說明化學(xué)基團(tuán)的引入可能會(huì)改變多糖的抗氧化活性,但不同的化學(xué)基團(tuán)產(chǎn)生的影響有所不同。6.菜籽多糖化學(xué)修飾前后對腸道益生菌的體外增殖作用研究。通過體外培養(yǎng)的方法,以培養(yǎng)基的OD值和p H值為評價(jià)指標(biāo),研究了菜籽多糖RPM1-a及其化學(xué)修飾產(chǎn)物SRPM1-a、Ac RPM1-a和CRPM1-a對嗜酸乳桿菌、嬰兒雙歧桿菌、青春雙歧桿菌和兩歧雙歧桿菌的增殖作用。結(jié)果表明,菜籽多糖RPM1-a及其修飾產(chǎn)物SRPM1-a、Ac RPM1-a和CRPM1-a對四種菌株均有一定的增殖促進(jìn)作用,其中,SRPM1-a較RPM1-a的增殖效果更為明顯。四種多糖對益生菌增殖作用的最佳濃度為1.5%~2.0%;超過此范圍,益生菌數(shù)量不再增加,或呈下降趨勢。在體外培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)基的p H值隨益生菌數(shù)目的增加而相應(yīng)降低,說明RPM1-a、SRPM1-a、Ac RPM1-a和CRPM1-a均可被益生菌利用,產(chǎn)生有機(jī)酸類物質(zhì)。其中,添加SRPM1-a和Ac RPM1-a的培養(yǎng)基p H降低更加明顯。益生菌生長速率的研究表明,益生菌在添加菜籽多糖RPM1-a的培養(yǎng)基中培養(yǎng)32 h達(dá)到穩(wěn)定期,而在添加SRPM1-a和Ac RPM1-a的培養(yǎng)基中24 h即可達(dá)到穩(wěn)定期。菜籽多糖RPM1-a的硫酸化和乙�；揎棶a(chǎn)物比未經(jīng)修飾的菜籽多糖更容易被益生菌所利用,對益生菌的增殖效果更為明顯,益生元效應(yīng)得到提升。
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【學(xué)位授予單位】：合肥工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：TS201.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 唐天悅;周海s，

本文編號：1567049