本文選題：菜籽多糖　切入點：化學修飾　出處：《合肥工業(yè)大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：本研究以菜籽為原料,經預處理、提取、分離和純化得到均一菜籽多糖RPM1-a,采用單糖組成分析、甲基化分析和核磁共振技術對其一級結構進行解析,并研究了RPM1-a的流變性質;對RPM1-a分別進行硫酸化修飾、乙�；揎椇汪燃谆揎�,評價了RPM1-a及其修飾產物的體外抗氧化活性以及對腸道益生菌體外增殖活性的影響。主要研究內容及結果如下:1.菜籽多糖的提取、分離和純化。菜籽經過脫殼、粉碎、去油脂、除色素等預處理后,用氫氧化鈉溶液浸提,然后通過脫蛋白、濃縮、醇沉、離心、冷凍干燥得到菜籽粗多糖。分別以去離子水和0.10 mol/L NaCl溶液為洗脫液,將粗多糖通過DEAE-Bestarose柱層析分離,收集由去離子水洗脫的組分,經過透析和冷凍干燥后,再用Chromdex-200層析柱進一步純化,最后得到多糖組分RPM1-a。2.菜籽多糖一級結構的解析。紅外光譜分析表明,RPM1-a具有多糖的特征吸收峰,為多糖類物質;高效液相色譜分析表明,RPM1-a為相對均一的多糖組分,相對分子量約為15.96 kDa。由氣相色譜分析的結果可知,RPM1-a由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖組成,各單糖的摩爾比為3.70:47.00:21.30:27.90。綜合甲基化分析和核磁共振波譜分析的結果可以推斷,RPM1-a的主鏈由→6)-β-Galp-(1→、→3,4)-α-Rhap-(1→和→4)-α-Glcp-(1→構成,其O-3、O-4位被支鏈取代;主要支鏈和次要支鏈分別由β-Araf-(1→(5-β-Araf-1)16→(3-β-Araf-1)13→3)-β-Galp-(1→和β-Galp-(1→4)-β-Galp-(1→構成。其中,主要支鏈取代在O-3位,次要支鏈取代在O-4位。3.菜籽多糖的流變性質。采用流變儀研究了外界條件的改變對菜籽多糖黏度的影響。結果顯示,菜籽多糖RPM1-a溶液黏度隨其濃度的增加而增大,隨溫度和剪切速率的增大而減小;濃度對溶液黏度的影響較顯著,穩(wěn)態(tài)剪切條件下高濃度RPM1-a溶液(10%,m:v)為典型的假塑性非牛頓流體。pH對RPM1-a溶液的黏度影響較顯著,在pH 5~9,溶液黏度隨pH增大而增大;但當pH大于9時,溶液黏度呈降低趨勢。Ca~(2+)對RPM1-a黏度的變化的影響較為顯著,且隨著Ca~(2+)濃度的增大,溶液黏度呈上升趨勢。4.菜籽多糖的化學修飾。菜籽多糖RPM1-a經硫酸化、乙酰化和羧甲基化修飾,分別得到相應產物:SRPM1-a、Ac RPM1-a和CRPM1-a。紅外光譜分析顯示,SRPM1-a在1250 cm-1附近有不對稱S=O鍵伸縮振動引起的吸收峰,830cm-1左右有C-O-S拉伸振動引起的吸收峰,588 cm-1附近有硫酸根基團O-S-O的對稱變形引起的吸收峰;Ac RPM1-a 1735 cm-1附近的吸收峰由-COCR中的C=O不對稱伸縮振動引起,1373 cm-1左右有H-C=O引起的吸收峰,1247 cm-1附近有C-O引起的吸收峰;CRPM1-a 1635 cm-1處吸收峰消失,而在1596、1421和1324 cm-1處出現由C=O、C-O和COO-引起的吸收峰。以上結果表明,硫酸化、乙�；汪燃谆揎棾晒�。5.構建超氧陰離子自由基、羥基自由基、DPPH·自由基和Fe2+誘發(fā)的油脂過氧化等抗氧化體系,探索硫酸化修飾產物(SRPM1-a)、乙�；揎棶a物(Ac RPM1-a)和羧甲基化修飾產物(CRPM1-a)的抗氧化性,并與未經修飾的菜籽多糖(RPM1-a)的抗氧化性進行比較。結果表明,RPM1-a經硫酸化修飾后,體外抗氧化活性得到一定的增強;硫酸化產物SRPM1-a對超氧陰離子自由基和DPPH·自由基的清除作用,以及Fe2+誘發(fā)的油脂過氧化抑制作用均優(yōu)于其他三種多糖。在乙�；汪燃谆揎棶a物中,體外抗氧化活性未見顯著增強;乙�；a物的抗氧化活性低于未經修飾的菜籽多糖。這說明化學基團的引入可能會改變多糖的抗氧化活性,但不同的化學基團產生的影響有所不同。6.菜籽多糖化學修飾前后對腸道益生菌的體外增殖作用研究。通過體外培養(yǎng)的方法,以培養(yǎng)基的OD值和p H值為評價指標,研究了菜籽多糖RPM1-a及其化學修飾產物SRPM1-a、Ac RPM1-a和CRPM1-a對嗜酸乳桿菌、嬰兒雙歧桿菌、青春雙歧桿菌和兩歧雙歧桿菌的增殖作用。結果表明,菜籽多糖RPM1-a及其修飾產物SRPM1-a、Ac RPM1-a和CRPM1-a對四種菌株均有一定的增殖促進作用,其中,SRPM1-a較RPM1-a的增殖效果更為明顯。四種多糖對益生菌增殖作用的最佳濃度為1.5%~2.0%;超過此范圍,益生菌數量不再增加,或呈下降趨勢。在體外培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)基的p H值隨益生菌數目的增加而相應降低,說明RPM1-a、SRPM1-a、Ac RPM1-a和CRPM1-a均可被益生菌利用,產生有機酸類物質。其中,添加SRPM1-a和Ac RPM1-a的培養(yǎng)基p H降低更加明顯。益生菌生長速率的研究表明,益生菌在添加菜籽多糖RPM1-a的培養(yǎng)基中培養(yǎng)32 h達到穩(wěn)定期,而在添加SRPM1-a和Ac RPM1-a的培養(yǎng)基中24 h即可達到穩(wěn)定期。菜籽多糖RPM1-a的硫酸化和乙�；揎棶a物比未經修飾的菜籽多糖更容易被益生菌所利用,對益生菌的增殖效果更為明顯,益生元效應得到提升。
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【學位授予單位】：合肥工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：TS201.2

【參考文獻】

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1 唐天悅;周海s，

本文編號：1567049