本文關鍵詞：基于凝膠多糖的兼性高分子的合成及其核酸遞送活性的研究　出處：《內(nèi)蒙古大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：RNA干擾(RNAi)是由雙鏈RNA引起的一種高效的轉錄后水平基因沉默,在多種疾病的臨床治療上有巨大的應用潛力,其臨床應用的關鍵之一是構建安全有效的核酸遞送載體。本文以凝膠多糖(Curdlan)為原料,首先對其結構單元的C5位進行氧化及酸化,制備完全氧化的β-1,3-polyglucuronic acid,隨后與四乙烯五胺(TEPA)通過酰胺反應制備凝膠多糖兼性高分子TEPAC-m(m=1,-2,-3)。經(jīng)核磁共振波譜確定結構,通過激光粒度儀測定其粒徑分布、Zeta電動電勢,酸堿滴定法測定其對H+的緩沖能力。隨后通過MTT法細胞毒性實驗、體外細胞質(zhì)粒和siRNA轉染試驗對其作為核酸載體的安全性及遞送效率等做了研究。研究結果表明,此新型的兼性高分子具有良好的水溶性和質(zhì)子海綿效應;對于A549和HeLa細胞株顯示了低于6AC-100和PEI的細胞毒性;對于HeLa、HepG2和293T細胞株能夠有效地遞送質(zhì)粒進入細胞內(nèi);對于HeLa和HepG2細胞株能較高效率地遞送siRNA使內(nèi)源靶mRNA表達水平顯著下調(diào)。可見,此新型基于凝膠多糖的兼性高分子作為核酸載體具有潛在的進一步研發(fā)的價值。綜合而言,本論文成功合成了水溶性凝膠多糖兼性高分子TEPAC-m(m=1,-2,-3),應用于核酸的體外遞送,并較系統(tǒng)地研究了其作為核酸載體的安全性和遞送效率。所得研究結果不但為RNAi提供了一種新型兼性高分子多糖載體,而且為后續(xù)核酸載體研發(fā)提供了基礎與研究依據(jù)。
[Abstract]:RNA interference RNAi is a highly efficient post-transcriptional gene silencing induced by double-stranded RNA. It has great potential in clinical treatment of many diseases. One of the key clinical applications is to construct a safe and effective nucleic acid delivery vector. In this paper, the C5 site of its structural unit was oxidized and acidified with Curdlan-gel as the raw material. The completely oxidized 尾 -1C 3-polyglucuronic acid was prepared. Subsequently, a facultative polymer, TEPAC-mGMN, was prepared by reaction with tetraethylenepentylamine (TEPA). The structure was determined by nuclear magnetic resonance spectroscopy (NMR). The particle size distribution of Zeta electromotive force was measured by laser particle size analyzer, the buffer capacity to H was measured by acid-base titration, and the cytotoxicity test was carried out by MTT method. The cell plasmid and siRNA transfection test in vitro were used to study the safety and delivery efficiency of nucleic acid vector. The new facultative polymer has good water-solubility and proton sponge effect. The cytotoxicity of A549 and HeLa cells was lower than that of 6AC-100 and PEI. For HeLaG-2 and 293T cell lines, the plasmids were effectively delivered into the cells. For HeLa and HepG2 cell lines, the expression of endogenous target mRNA was significantly down-regulated by delivering siRNA efficiently. This new type of facultative polymer based on gel polysaccharides as a carrier of nucleic acid has potential value for further development. In this paper, a facultative polymer, TEPAC-mGN, was successfully synthesized, which was used to deliver nucleic acid in vitro. The safety and delivery efficiency of RNAi as nucleic acid carrier were systematically studied. The results not only provided a new facultative polymer polysaccharide carrier for RNAi. It also provides the basis and research basis for the research and development of nucleic acid carriers.
【學位授予單位】：內(nèi)蒙古大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：Q78;O631

【參考文獻】

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4 徐俊;毛穎;苗荻;郝佳;;RNA干擾技術的研究進展[J];生物技術世界;2012年03期

5 張花美;朱勝男;張麗莎;施曼玲;;病毒誘導的基因沉默[J];杭州師范大學學報(自然科學版);2011年02期

6 安立峰,董震;RNA干擾——腫瘤研究的新工具[J];中華腫瘤雜志;2005年07期

7 劉大慶,司徒鎮(zhèn)強;基因治療研究發(fā)展歷程的回顧與啟示[J];醫(yī)學與社會;2003年03期

8 馬鵬鵬,薛社普,韓代書;RNA干擾技術的原理與應用[J];中國組織化學與細胞化學雜志;2003年02期

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