本文關(guān)鍵詞：銀耳多糖酶法提取及生物活性研究　出處：《福建農(nóng)林大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：銀耳(Tremellla fuciforms),別名白木耳、雪耳、菊花耳,是一種具有研究開發(fā)價(jià)值的珍貴食用菌。而銀耳多糖是銀耳中的主要活性成分,它具有提高機(jī)體免疫力、抗病毒、抗腫瘤、降血糖血脂等保健功能逐漸成為人們的研究熱點(diǎn)。但與歐美發(fā)達(dá)國(guó)家相比,我國(guó)銀耳以食用為主,對(duì)銀耳多糖的研究起步甚晚。銀耳多糖的提取存在過(guò)程復(fù)雜、提取率低、純度不高、提取成本高等問(wèn)題,而國(guó)內(nèi)外對(duì)于高純度銀耳多糖的需求較大。福建省銀耳資源豐富,因此對(duì)銀耳多糖提取、分離純化展開研究,開發(fā)出一條簡(jiǎn)單高效、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的銀耳多糖提取純化工藝具有重要的現(xiàn)實(shí)意義和應(yīng)用價(jià)值。本文以銀耳子實(shí)體為原料,對(duì)其多糖的提取、分離純化及生物活性進(jìn)行研究。本課題研究的主要內(nèi)容和結(jié)果:(1)酶法結(jié)合高壓蒸煮提取銀耳多糖干銀耳子實(shí)體經(jīng)過(guò)浸泡、修剪、瀝干、高壓、勻漿、酶解、離心、蒸發(fā)濃縮、醇沉、離心、凍干等工藝流程得到銀耳粗多糖。首先通過(guò)單因素試驗(yàn)研究高壓過(guò)程中的溫度、時(shí)間、料液比等單因素對(duì)銀耳多糖提取率的影響,并采用Box-Behnken設(shè)計(jì)對(duì)高壓此工藝進(jìn)行優(yōu)化,得出最佳的提取工藝:高壓時(shí)料液比1:90、時(shí)間120min、溫度110℃。經(jīng)過(guò)高壓、勻漿等工藝流程,酶解階段中研究纖維素酶、果膠酶、酶解時(shí)間、酶解溫度等單因素對(duì)銀耳多糖提取率的影響,采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)此工藝進(jìn)行優(yōu)化,得到最佳工藝參數(shù)為:纖維素酶1.0%、果膠酶0.8%、酶解時(shí)間120min、酶解溫度是55℃,此時(shí)粗多糖的提取率高達(dá)39.28%。(2)銀耳多糖的分離純化將銀耳粗多糖進(jìn)行分離純化是研究其生物活性的前提和基礎(chǔ)。銀耳多糖的純化主要包括脫除蛋白質(zhì)、DEAE52-纖維素離子交換柱層析、SephadexG-200凝膠柱層析、透析等步驟,得到兩種組分單一的銀耳多糖組分TFP1-1和TFP2-2。本課題以銀耳多糖中的蛋白質(zhì)脫除率和多糖損失率作為綜合評(píng)價(jià)參數(shù),通過(guò)比較TCA法、sevage法、鹽酸法、酶法+sevage法這四種脫蛋白的效果,結(jié)果表明酶+sevage法效果最佳。在溫度65℃、pH6.5、120min、木瓜蛋白酶為1%的條件下脫蛋白,再用sevage法在此基礎(chǔ)上三次去除蛋白質(zhì)三次,蛋白質(zhì)脫除率85.1%,多糖損失率為14.2%。(3)銀耳多糖的生物活性研究未脫蛋白的和脫蛋白的銀耳多糖均對(duì)·OH有一定的清除效果(p0.01),且未脫蛋白的銀耳多糖對(duì)清除·OH能力優(yōu)于脫蛋白的銀耳多糖(p0.01);在清除ABTS+體系中,銀耳多糖同樣表現(xiàn)出良好的清除效果,未脫蛋白的銀耳多糖和脫蛋白的銀耳多糖對(duì)清除ABTS+的IC50分別為2.32、3.94mg/mL;而在DPPH ·體系中,未脫蛋白的銀耳多糖在清除DPPH·自由基能力方面卻不及脫蛋白的銀耳多糖(p0.01)。接著探討銀耳多糖的抗腫瘤性,發(fā)現(xiàn)不同處理的銀耳多糖聯(lián)合順鉑均對(duì)HepG2肝癌細(xì)胞具有極顯著的抑制其生長(zhǎng)作用(p0.01),其中未脫蛋白的銀耳多糖聯(lián)合順鉑抑制率達(dá)71.8%,脫蛋白的銀耳多糖聯(lián)合順鉑時(shí)抑制率達(dá)63.2%,這兩個(gè)處理間的差異也是極顯著的(p0.01),得出脫蛋白的銀耳多糖聯(lián)合順鉑抑制細(xì)胞增長(zhǎng)效果優(yōu)于脫蛋白的銀耳多糖聯(lián)合順鉑這一結(jié)論。
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：TQ464.1

【參考文獻(xiàn)】

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