本文關(guān)鍵詞：云南高寒山區(qū)苦蕎黃酮抗氧化和降血糖活性研究

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【摘要】：苦蕎營養(yǎng)價(jià)值高,籽粒中含有蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)和氨基酸等營養(yǎng)成分,且富含黃酮類化合物。為了更加準(zhǔn)確、科學(xué)的評(píng)價(jià)苦蕎黃酮的抗氧化和降血糖活性,本研究首先構(gòu)建體外模擬消化模型,研究體外消化對(duì)苦蕎黃酮組成及含量的影響,評(píng)價(jià)其體外抗氧化和降血糖活性;進(jìn)一步構(gòu)建肝臟細(xì)胞模型,在細(xì)胞水平研究苦蕎黃酮的自由基清除能力和降血糖能力;最后采用db/db糖尿病小鼠模型,在動(dòng)物水平研究苦蕎黃酮的抗氧化能力和降血糖功效。主要結(jié)果如下:(1)苦蕎品種篩選和提取工藝優(yōu)化通過測定云南、山東、山西、貴州和陜西五個(gè)省份的苦蕎品種中黃酮類物質(zhì)的含量,發(fā)現(xiàn)云南高寒山區(qū)苦蕎的黃酮含量最高,其主要黃酮類物質(zhì)為蘆丁和槲皮苷,含量分別為1.76%和0.17%。根據(jù)單因素結(jié)果選取乙醇體積分?jǐn)?shù)(40%、50%、60%),料液比(1:20、1:25、1:30g/mL),溫度(60℃、70℃、800℃,提取時(shí)間(50min、60 min、70min)4個(gè)因素進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化,得到苦蕎黃酮最佳提取條件為:乙醇體積分?jǐn)?shù)54%;料液比1:24g/mL;提取時(shí)間62min;提取溫度71℃。在此最佳提取條件下,理論黃酮得率為2.21%。以響應(yīng)面優(yōu)化所得的最優(yōu)提取條件進(jìn)行3次平行試驗(yàn),苦蕎黃酮的實(shí)際得率為2.20%,與理論得率相比,相對(duì)誤差為0.45%。因此采用響應(yīng)面法優(yōu)化得到的苦蕎黃酮提取條件參數(shù)準(zhǔn)確可靠,具有實(shí)用價(jià)值。(2)體外模擬消化對(duì)苦蕎黃酮抗氧化和降血糖活性的影響經(jīng)模擬胃腸消化后,苦蕎黃酮含量略有降低�？寡趸钚詫�(shí)驗(yàn)表明,苦蕎黃酮消化前清除ABTS和DPPH自由基的IC50分別是0.81 mg/mL和0.18 mg/mL,消化后的IC50分別是1.30mg/mL和0.61mg/mL;采用FRAP法測定的苦蕎黃酮消化前抗氧化能力為19.37 mg Vc/g,消化后為7.00 mg Vc/g,綜合以上三種評(píng)價(jià)方法,苦蕎黃酮消化前后均具有較好的體外抗氧化能力。淀粉等碳水化合物被攝入后,經(jīng)一系列消化,最終通過α-葡萄糖苷酶水解生成葡萄糖,因此抑制α-葡萄糖苷酶活性,可以減緩餐后血糖的上升。α-葡萄糖苷酶活性試驗(yàn)表明,與陽性對(duì)照阿卡波糖相比(IC50,0.25 mg/mL),苦蕎黃酮消化前(IC50,0.31mg/mL)和消化后(IC50,0.42mg/mL)具有較好的酶活性抑制能力�？嗍w黃酮因其來源于食物,具有開發(fā)成天然α-葡萄糖苷酶抑制劑的潛力。在細(xì)胞水平的研究發(fā)現(xiàn),苦蕎黃酮和苦蕎黃酮消化物,可以顯著降低由H2O2誘導(dǎo)產(chǎn)生的ROS。與對(duì)照組相比,H2O2組熒光強(qiáng)度增加到202%,苦蕎黃酮及其消化物(100μg/mL)分別可以顯著降低熒光強(qiáng)度到134%和129%,表明苦蕎黃酮可以有效抑制細(xì)胞內(nèi)氧自由基爆發(fā)。此外,苦蕎黃酮可以提高肝臟細(xì)胞的葡萄糖消耗能力,與對(duì)照組相比,苦蕎黃酮(10 μg/mL)和苦蕎黃酮消化物(10 μg/mL)分別顯著提高細(xì)胞45.43%和58.36%的葡萄糖消耗量。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),苦蕎黃酮顯著促進(jìn)細(xì)胞糖原的合成,與對(duì)照組相比,苦蕎黃酮(10μg/mL)及其消化物(10μg/mL)顯著提高173%和190%的糖原合成量。因此,苦蕎黃酮可能通過促進(jìn)肝臟細(xì)胞糖原的合成從而提升細(xì)胞對(duì)葡萄糖的消耗能力。(3)苦養(yǎng)黃酮db/db小鼠降血糖動(dòng)物實(shí)驗(yàn)采用db/db糖尿病小鼠模型研究苦蕎黃酮的抗氧化活性和降血糖功效。正常對(duì)照組小鼠(db/m)血糖為7.5mmol/L,糖尿病模型組(db/db)為21.2mmol/L�？嗍w黃酮可以顯著降低db/db小鼠血糖濃度,苦蕎黃酮低劑量組(200mg/kg/天)血糖降低到18.8 mmol/L;高劑量組(400mg/kg/天)血糖降到15.3mmol/L�？嗍w黃酮對(duì)db/db小鼠的糖耐量和胰島素耐量也有顯著改善。此外苦蕎黃酮顯著降低db/db小鼠血清中與肝功能相關(guān)的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和堿性磷酸酶(ALP)指標(biāo),與血脂相關(guān)的總甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)指標(biāo),肝臟組織中TC、TG和丙二醛(MDA)含量,提高肝臟組織的總抗氧化能力(TAOC)和AST活性。因此,苦蕎黃酮具有較好的降血糖活性,同時(shí)可以改善伴隨肥胖的高脂血癥和高膽固醇血癥狀。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：TS210.1

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本文編號(hào)：1277651