本文關鍵詞：新型納米材料在沙丁胺醇試紙條中的應用研究

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【摘要】：論文選擇沙丁胺醇(SAL)作為目標物,研究了膠體金、納米金-聚苯胺-納米金微球(GPG)、膠體碳三種標記抗體方法,分別建立了沙丁胺醇免疫層析分析方法,并應用于動物源性食品中沙丁胺醇殘留的可視化檢測。建立了沙丁胺醇膠體金標記免疫層析分析方法,在最優(yōu)條件下組裝試紙條,將金標抗體鋪在結合釋放墊上的組裝方式其方法檢出限為2嵋L-1；將金標抗體凍干在微孔板中的組裝方式其方法檢出限為1鵬L-1。選擇豬肉、牛肉、羊肉和豬肝四種實際樣品進行添加回收實驗,樣品檢出限為5μg L-1。合成新材料GPG,建立了沙丁胺醇GPG標記免疫層析分析方法,在最優(yōu)條件下組裝試紙條,將GPG標記抗體鋪在結合釋放墊上的組裝方式方法檢出限為5μgL-1；將GPG標記抗體凍干在微孔板中的組裝方式其方法檢出限為2 μg L-1。選擇豬肉、牛肉、羊肉和豬肝四種實際樣品進行添加回收實驗,樣品檢出限為10μgL-1。SB4型號炭黑平均粒徑約為50 nm。建立了沙丁胺醇膠體碳標記免疫層析分析方法,在最優(yōu)條件下組裝試紙條。將碳標抗體鋪在結合釋放墊上不可行；將碳標抗體凍干在微孔板中以及在溶液狀態(tài)下與標準品混合上樣兩種方式靈敏度基本一致,方法檢出限為2μgL-1。選擇豬肉、牛肉、羊肉和豬肝四種實際樣品進行添加回收實驗,樣品檢出限為10μgL-1。三種標記材料所建立的免疫層析分析方法靈敏度基本一致,采用膠體金作為標記物靈敏度略高；對于納米材料GPG和膠體碳,其批間差異小,穩(wěn)定性優(yōu)于膠體金；炭黑作為工業(yè)材料,成本遠遠低于氯金酸,采用膠體碳作為標記物可以節(jié)約成本,同時,膠體碳標記抗體,平均每根試紙條抗體用量約為使用膠體金作為標記材料的1/12,可以節(jié)約大量抗體,有利于實現(xiàn)試紙條產品的市場化。
【關鍵詞】：沙丁胺醇 免疫層析試紙條 膠體金 GPG 膠體碳
【學位授予單位】：天津科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：TB383.1;TS207.3
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 1 前言9-24
• 1.1 獸藥殘留現(xiàn)狀及其危害9-10
• 1.2 β-腎上腺素受體激動劑簡介10-11
• 1.2.1 常見β-興奮劑簡介10-11
• 1.2.2 β-興奮劑的使用以及殘留現(xiàn)狀11
• 1.3 沙丁胺醇簡介11-15
• 1.3.1 沙丁胺醇理化性質11-13
• 1.3.2 沙丁胺醇殘留限量13
• 1.3.3 沙丁胺醇檢測研究進展13-15
• 1.4 膠體金免疫層析技術(GICA)15-20
• 1.4.1 膠體金免疫層析技術檢測原理15-17
• 1.4.2 膠體金免疫層析技術的發(fā)展與應用17
• 1.4.3 增強型膠體金的發(fā)展與應用17-19
• 1.4.4 納米金-聚苯胺-納米金微球(GPG)簡介19-20
• 1.5 炭黑(carbon black)簡介20-22
• 1.5.1 炭黑的理化性質及分類20
• 1.5.2 炭黑的應用現(xiàn)狀20-21
• 1.5.3 SB4(Special Black 4)型號炭黑簡介21-22
• 1.5.4 膠體碳標記免疫層析試紙條的優(yōu)勢22
• 1.6 研究目的及意義22-23
• 1.7 研究內容23-24
• 2 材料與方法24-41
• 2.1 實驗材料24-29
• 2.1.1 主要實驗藥品及試劑24-25
• 2.1.2 主要實驗儀器與設備25-26
• 2.1.3 常用溶液的配制26-28
• 2.1.4 實際樣品28-29
• 2.2 實驗方法29-41
• 2.2.1 沙丁胺醇包被抗原的制備29
• 2.2.2 沙丁胺醇多克隆抗體預處理29-30
• 2.2.3 試紙條的組裝30-32
• 2.2.4 膠體金標記免疫層析分析方法的建立32-35
• 2.2.5 GPG標記免疫層析分析方法的建立35-37
• 2.2.6 膠體碳標記免疫層析分析方法的建立37-40
• 2.2.7 基于三種標記材料的試紙條檢測方法有效性的驗證40-41
• 3 結果與討論41-75
• 3.1 沙丁胺醇半抗原的表征41
• 3.2 沙丁胺醇多克隆抗體的純化41
• 3.3 膠體金標記免疫層析分析方法的建立41-51
• 3.3.1 膠體金的制備及質量鑒定41-42
• 3.3.2 膠體金標記抗體的制備及鑒定42-44
• 3.3.3 層析條件的優(yōu)化44-46
• 3.3.4 膠體金標記免疫層析分析方法檢出限的確定46-48
• 3.3.5 膠體金免疫層析分析方法的特異性48-49
• 3.3.6 膠體金標記免疫層析分析方法實際樣品檢測49-50
• 3.3.7 試紙條穩(wěn)定性實驗50-51
• 3.4 GPG標記免疫層析分析方法的建立51-60
• 3.4.1 GPG的制備及質量鑒定51-52
• 3.4.2 GPG標記抗體最適pH值以及最佳抗體量的確定52-54
• 3.4.3 層析條件的優(yōu)化54-57
• 3.4.4 GPG標記免疫層析試紙條檢出限的確定57-58
• 3.4.5 GPG標記免疫層析分析方法用于實際樣品檢測58-59
• 3.4.6 GPG標記免疫層析試紙條穩(wěn)定性實驗59-60
• 3.5 膠體碳標記免疫層析分析方法的建立60-73
• 3.5.1 膠體碳的表征60
• 3.5.2 膠體碳分散緩沖液的選擇60-61
• 3.5.3 膠體碳標記抗體的制備61-63
• 3.5.4 層析條件的優(yōu)化63-68
• 3.5.5 膠體碳標記免疫層析試紙條檢出限的確定68-70
• 3.5.6 膠體碳標記免疫層析分析方法用于實際樣品檢測70-71
• 3.5.7 膠體碳標記免疫層析試紙條穩(wěn)定性實驗71-73
• 3.6 ELISA法驗證試紙條檢測方法的有效性73-75
• 4 結論75-77
• 5 展望77-78
• 6 參考文獻78-85
• 7 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文情況85-86
• 8 致謝86

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本文編號：1001856