昆蟲是動(dòng)物界中最大的類群,現(xiàn)存種類已超過(guò)100萬(wàn)種。我國(guó)昆蟲資源相當(dāng)豐富,約占世界昆蟲總數(shù)的10%。昆蟲共生菌可能是新型天然產(chǎn)物的廣泛來(lái)源和新活性天然產(chǎn)物的重要來(lái)源,但是昆蟲腸道微生物的研究尚欠系統(tǒng)和深入,所涵蓋的昆蟲種類僅零星見(jiàn)于少數(shù),如蝎子、蜜蜂等。較為詳細(xì)的研究主要集中在白蟻,還有松毛蟲等農(nóng)作物害蟲,而美洲大蠊腸道微生物的研究鮮有報(bào)道。本研究主要運(yùn)用數(shù)值分類,BOX-PCR, PCR-RFLP和16S rRNA基因序列的系統(tǒng)發(fā)育分析以及免培養(yǎng)方法對(duì)樣品中內(nèi)生細(xì)菌多樣性進(jìn)行研究,結(jié)果表明,美洲大蠊成蟲腸道內(nèi)有較為豐富的細(xì)菌多樣性。主要結(jié)果如下：數(shù)值分類的分析結(jié)果表明,32株代表菌株在82%相似水平上可分為12個(gè)表觀群,群11是最大的類群,包含14株細(xì)菌；而代表菌株SCAU13, SCAU78, SCAU23, SCAU75, SCAU9, SCAU92分別單獨(dú)成群。在PCR-RFLP分析中,用四種限制性內(nèi)切酶(HaeⅢ, HinfⅠ, TaqⅠ, MspⅠ)處理后,HaeⅢ有8種酶切圖譜類型,HinfI有7種酶切圖譜類型,TaqI有3種酶切圖譜類型,MspⅠ有2種酶切圖譜類型,酶H...

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1. 文獻(xiàn)綜述
    1.1 昆蟲腸道微生物的研究進(jìn)展
    1.2 蟑螂腸道微生物
        1.2.1 蟑螂簡(jiǎn)介
        1.2.2 蟑螂腸道微生物研究進(jìn)展
    1.3 腸道微生物對(duì)昆蟲的作用
        1.3.1 參與代謝,提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)
        1.3.2 定殖抗力
        1.3.3 參與多重營(yíng)養(yǎng)關(guān)系
        1.3.4 腸道微生物激起昆蟲的免疫反應(yīng)
        1.3.5 抗捕食作用
    1.4 微生物多樣性研究方法
        1.4.1 表型多樣性研究
        1.4.2 遺傳多樣性研究
    1.5 立題依據(jù)及研究意義
2 技術(shù)路線
3 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    3.1 樣品采集及分離純化
    3.2 蟑螂腸道細(xì)菌表型多樣性的鑒定
        3.2.1 菌落特征
        3.2.2 菌體形態(tài)特征
        3.2.3 數(shù)值分類
    3.3 內(nèi)生細(xì)菌16S RRNA PCR擴(kuò)增
        3.3.1 細(xì)菌DNA提取
        3.3.2 細(xì)菌16S rRNA PCR擴(kuò)增
    3.4 16S RRNA PCR-RFLP指紋圖譜分析
    3.5 BOX-PCR指紋圖譜
    3.6 16S RRNA基因的系統(tǒng)發(fā)育分析
    3.7 物種多樣性分析
    3.8 免培養(yǎng)方法對(duì)美洲大蠊腸道細(xì)菌多樣性的研究
        3.8.1 細(xì)菌總DNA的提取
        3.8.2 16S rRNA PCR擴(kuò)增
        3.8.3 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的純化
        3.8.4 克隆子的篩選
        3.8.5 對(duì)陽(yáng)性克隆子進(jìn)行RFLP分析
        3.8.6 16S rRNA基因的系統(tǒng)發(fā)育分析
    3.9 實(shí)驗(yàn)結(jié)果處理
        3.9.1 數(shù)值分類
        3.9.2 BOX-PCR和16S rRNA PCR-RFLP酶切圖譜分析
4 結(jié)果與分析
    4.1 內(nèi)生菌的分離純化
    4.2 表型多樣性分析
    4.3 遺傳多樣性分析
        4.3.1 16S rRNA PCR-RFLP指紋圖譜分析
        4.3.2 BOX-PCR指紋圖譜及聚類分析
    4.4 純培養(yǎng)細(xì)菌16S RRNA基因序列類群多樣性
    4.5 菌株遺傳多樣性
    4.6 免培養(yǎng)方法研究美洲大蠊腸道細(xì)菌多樣性
        4.6.1 美洲大蠊腸道微生物基因組16S rRNA PCR擴(kuò)增
        4.6.3 陽(yáng)性克隆子鑒定
        4.6.4 陽(yáng)性克隆子RFLP分析
        4.6.5 16S rRNA序列分析
5 討論
6 結(jié)論
7 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3800273