脊椎動物的眼睛在發(fā)育過程中會形成透明的晶狀體結(jié)構(gòu),晶狀體能夠有效地折射光線來保證動物感知外界信息。晶狀體的透明化依賴于晶狀體纖維細胞中細胞器特別是細胞核的降解以及晶體蛋白（crystallin）的大量積累,該過程發(fā)生紊亂有可能導(dǎo)致晶狀體渾濁,即白內(nèi)障的發(fā)生,這是造成人類失明的主要原因。由于在晶狀體分化過程中細胞核的退化降解阻礙了 mRNA的持續(xù)轉(zhuǎn)錄,因此晶體蛋白的大量積累必然伴隨著其mRNA的高效翻譯以補償轉(zhuǎn)錄層面的損失,因此晶狀體終末分化過程中的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機制顯得尤其重要。然而調(diào)控晶狀體特異mRNA高效翻譯的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機制在這之前研究的尚不清楚。本研究發(fā)現(xiàn)一種RNA結(jié)合蛋白（RBP）,Rbm24a,其特異表達在正在分化的纖維細胞中,是晶體蛋白積累和晶狀體纖維細胞終末分化的關(guān)鍵因子。在斑馬魚系統(tǒng)中敲除該基因會導(dǎo)致嚴重的白內(nèi)障表型。在晶狀體形成的過程中,Rbm24a通過其N端的RNA識別基序（RRM）與多種晶狀體特異mRNA結(jié)合,并且通過其C端與胞質(zhì)多腺苷酸化元件結(jié)合蛋白Cpeblb和poly（A）結(jié)合蛋白Pabpc11相互作用。Rbm24a的缺失會降低熱休克蛋白（hsp）mRNA的穩(wěn)定... 

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文說明
第一部分 斑馬魚晶狀體的形成過程
    1.1 斑馬魚是一種重要的模式生物
    1.2 晶狀體的形成過程
    1.3 晶體蛋白crystallin是晶狀體特異蛋白的主要組分
    1.4 Rbm24a參與晶狀體的形成過程
第二部分 Rbm24a參與crystallin轉(zhuǎn)錄后調(diào)控參與晶狀體發(fā)育
    2.1 rbm24a在斑馬魚晶狀體正在分化的纖維細胞中表達
    2.2 rbm24a合子突變體表現(xiàn)出白內(nèi)障表型
    2.3 為突變體恢復(fù)血液循環(huán)不能拯救白內(nèi)障表型
    2.4 晶體蛋白mRNA總量在rbm24a突變體中受到不同程度的影響
    2.5 Rbm24a通過RRM與多種晶狀體表達的mRNA結(jié)合
    2.6 缺失Rbm24a降低crystallin mRNA的穩(wěn)定性
    2.7 Rbm24a是crystallin蛋白積累所必需的
    2.8 Rbm24a與胞質(zhì)多腺苷酸化復(fù)合物因子Pabpc11和Cpeb1b互作
第三部分 實驗總結(jié)與展望
第四部分 實驗方法與材料
    4.1 倫理聲明
    4.2 斑馬魚及幼魚的養(yǎng)殖
    4.3 轉(zhuǎn)基因品系的制備
    4.4 表達載體的構(gòu)建
    4.5 Gibson連接
    4.6 胚胎融合
    4.7 胚胎移植
    4.8 RIP-qPCR
    4.9 探針的獲取
    4.10 原位雜交
    4.11 WB
    4.12 co-IP
    4.13 JB4切片
    4.14 CRISPR/Cas9基因敲除
    4.15 Poly(A)尾長分析
    4.16 Phalloidin和Hoechst染色
    4.17 共聚焦反射模式拍攝
    4.18 放線菌素D處理
    4.19 qRT-PCR
參考文獻
致謝
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本文編號：3719370