NAC轉(zhuǎn)錄因子,植物特有的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,對(duì)植物的器官建成、生長(zhǎng)發(fā)育以及抵御脅迫等方面都發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。對(duì)NAC轉(zhuǎn)錄因子的研究,有助于理解植物的抗逆機(jī)制,并為抗逆作物培育奠定基礎(chǔ)。本文從遼寧堿蓬轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)中選擇兩個(gè)帶有NAC結(jié)構(gòu)域的EST序列,命名SlNAC4、SlNAC10,克隆cDNA全長(zhǎng)序列并進(jìn)行功能分析,主要結(jié)果及結(jié)論如下:根據(jù)已知EST序列,RACE技術(shù)獲得了SlNAC4/10 cDNA全長(zhǎng)。SlNAC4（GenBank登錄號(hào):KJ933531）全長(zhǎng)1450 bp,編碼331個(gè)氨基酸;SlNAC10（GenBank登錄號(hào):KJ933532）全長(zhǎng)1584 bp,編碼369個(gè)氨基酸。生物信息分析顯示,兩基因N端都有NAC結(jié)構(gòu)域,C端差異較大。NCBI在線Blast比對(duì)及構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)顯示,SlNAC4與Th NAC1相似度較高,SlNAC10與AtNAC19、AtNAM和AtATAF具有較高相似性,查閱文獻(xiàn),推測(cè)SlNAC4、SlNAC10與非生物脅迫應(yīng)答有關(guān),SlNAC4為NAP亞家族,SlNAC10為NAM亞家族。qRT-PCR方法分析了SlNAC4和SlNAC10基因在遼... 

【文章來(lái)源】：遼寧師范大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 脅迫
    1.2 轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.1 轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 轉(zhuǎn)錄因子的分類(lèi)
        1.2.3 轉(zhuǎn)錄因子的研究方法
    1.3 NAC轉(zhuǎn)錄因子
        1.3.1 NAC轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 NAC轉(zhuǎn)錄因子的功能
        1.3.3 NAC轉(zhuǎn)錄因子的研究現(xiàn)狀及展望
    1.4 遼寧堿蓬
    1.5 研究目的及意義
    1.6 本研究的技術(shù)路線
2 SlNAC4、SlNAC10基因克隆及生物信息學(xué)分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和質(zhì)粒
        2.1.3 試劑
        2.1.4 培養(yǎng)基
        2.1.5 引物
        2.1.6 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 SlNAC4、SlNAC10基因cDNA全長(zhǎng)的獲得
        2.2.2 SlNAC4、SlNAC10基因生物信息學(xué)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 SlNAC4、SlNAC10基因全長(zhǎng)的獲得
        2.3.2 SlNAC4、SlNAC10基因生物信息學(xué)分析
    2.4 討論
3 SlNAC4、SlNAC10基因表達(dá)特性分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 儀器設(shè)備
        3.1.4 引物
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 遼寧堿蓬幼苗培養(yǎng)及非生物脅迫處理
        3.2.2 總RNA的提取及檢測(cè)
        3.2.3 反轉(zhuǎn)錄成cDNA
        3.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 遼寧堿蓬總RNA的提取
        3.3.2 SlNAC4、SlNAC10基因在遼寧堿蓬中的表達(dá)特異性
    3.4 討論
4 SlNAC4、SlNAC10亞細(xì)胞定位分析
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 儀器設(shè)備
        4.1.4 引物
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 亞細(xì)胞定位載體的構(gòu)建
        4.2.2 洋蔥表皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化
        4.2.3 洋蔥表皮細(xì)胞鏡檢
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 亞細(xì)胞定位載體的構(gòu)建
        4.3.2 亞細(xì)胞定位
    4.4 討論
5 SlNAC4、SlNAC10轉(zhuǎn)錄激活作用分析
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 菌株
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.1.3 相關(guān)溶液的配制
        5.1.4 設(shè)備儀器
        5.1.5 引物
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 酵母表達(dá)載體構(gòu)建
        5.2.2 制備酵母菌感受態(tài)細(xì)胞
        5.2.3 陽(yáng)性質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母菌
        5.2.4 β-半乳糖苷酶活性檢測(cè)
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 酵母表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.3.2 轉(zhuǎn)錄激活作用分析
    5.4 討論
6 SlNAC4、SlNAC10基因轉(zhuǎn)化擬南芥及轉(zhuǎn)基因擬南芥抗逆性分析
    6.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.1.1 植物材料
        6.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        6.1.3 儀器設(shè)備
        6.1.4 引物
    6.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.1 植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        6.2.2 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化擬南芥
        6.2.3 陽(yáng)性擬南芥的篩選
        6.2.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥半定量RT-PCR分析
        6.2.5 轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗性分析
    6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.3.1 植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        6.3.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥的篩選
        6.3.3 外源基因在轉(zhuǎn)基因擬南芥半中的表達(dá)
        6.3.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥的脅迫分析
    6.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A 培養(yǎng)基
附錄B 載體
附錄C Marker
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物非生物脅迫相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子研究方法[J]. 宿明星,孫穎顥,施鶴,李秋莉.  生物技術(shù)通報(bào). 2015(01)
[2]植物NAC轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展[J]. 康桂娟,曾日中,聶智毅,黎瑜,代龍軍,段翠芳.  生物技術(shù)通報(bào). 2012(11)
[3]NAC轉(zhuǎn)錄因子在植物抗病和抗非生物脅迫反應(yīng)中的作用[J]. 孫利軍,李大勇,張慧娟,宋鳳鳴.  遺傳. 2012(08)
[4]植物NAC轉(zhuǎn)錄因子家族研究概況[J]. 彭輝,于興旺,成慧穎,張樺,石慶華,李建貴,麻浩.  植物學(xué)報(bào). 2010(02)
[5]植物NAC轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展[J]. 冶曉芳,唐益苗,高世慶,楊穎,劉美英,王永波,趙昌平.  生物技術(shù)通報(bào). 2009(10)
[6]植物轉(zhuǎn)錄因子與基因調(diào)控[J]. 李潔.  生物學(xué)通報(bào). 2004(03)
[7]植物轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)與調(diào)控作用[J]. 劉強(qiáng),張貴友,陳受宜.  科學(xué)通報(bào). 2000(14)
[8]植物轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)與功能[J]. 陳麗.  植物生理學(xué)通訊. 1997(06)



本文編號(hào)：3324190