NAC轉錄因子,植物特有的轉錄調控因子,對植物的器官建成、生長發(fā)育以及抵御脅迫等方面都發(fā)揮著至關重要的作用。對NAC轉錄因子的研究,有助于理解植物的抗逆機制,并為抗逆作物培育奠定基礎。本文從遼寧堿蓬轉錄組數據庫中選擇兩個帶有NAC結構域的EST序列,命名SlNAC4、SlNAC10,克隆cDNA全長序列并進行功能分析,主要結果及結論如下:根據已知EST序列,RACE技術獲得了SlNAC4/10 cDNA全長。SlNAC4（GenBank登錄號:KJ933531）全長1450 bp,編碼331個氨基酸;SlNAC10（GenBank登錄號:KJ933532）全長1584 bp,編碼369個氨基酸。生物信息分析顯示,兩基因N端都有NAC結構域,C端差異較大。NCBI在線Blast比對及構建進化樹顯示,SlNAC4與Th NAC1相似度較高,SlNAC10與AtNAC19、AtNAM和AtATAF具有較高相似性,查閱文獻,推測SlNAC4、SlNAC10與非生物脅迫應答有關,SlNAC4為NAP亞家族,SlNAC10為NAM亞家族。qRT-PCR方法分析了SlNAC4和SlNAC10基因在遼... 

【文章來源】：遼寧師范大學遼寧省

【文章頁數】：79 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻綜述
    1.1 脅迫
    1.2 轉錄因子
        1.2.1 轉錄因子的結構
        1.2.2 轉錄因子的分類
        1.2.3 轉錄因子的研究方法
    1.3 NAC轉錄因子
        1.3.1 NAC轉錄因子的結構
        1.3.2 NAC轉錄因子的功能
        1.3.3 NAC轉錄因子的研究現(xiàn)狀及展望
    1.4 遼寧堿蓬
    1.5 研究目的及意義
    1.6 本研究的技術路線
2 SlNAC4、SlNAC10基因克隆及生物信息學分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和質粒
        2.1.3 試劑
        2.1.4 培養(yǎng)基
        2.1.5 引物
        2.1.6 主要儀器設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 SlNAC4、SlNAC10基因cDNA全長的獲得
        2.2.2 SlNAC4、SlNAC10基因生物信息學分析
    2.3 實驗結果與分析
        2.3.1 SlNAC4、SlNAC10基因全長的獲得
        2.3.2 SlNAC4、SlNAC10基因生物信息學分析
    2.4 討論
3 SlNAC4、SlNAC10基因表達特性分析
    3.1 實驗材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 儀器設備
        3.1.4 引物
    3.2 實驗方法
        3.2.1 遼寧堿蓬幼苗培養(yǎng)及非生物脅迫處理
        3.2.2 總RNA的提取及檢測
        3.2.3 反轉錄成cDNA
        3.2.4 實時熒光定量PCR
    3.3 實驗結果
        3.3.1 遼寧堿蓬總RNA的提取
        3.3.2 SlNAC4、SlNAC10基因在遼寧堿蓬中的表達特異性
    3.4 討論
4 SlNAC4、SlNAC10亞細胞定位分析
    4.1 實驗材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 儀器設備
        4.1.4 引物
    4.2 實驗方法
        4.2.1 亞細胞定位載體的構建
        4.2.2 洋蔥表皮細胞轉化
        4.2.3 洋蔥表皮細胞鏡檢
    4.3 實驗結果
        4.3.1 亞細胞定位載體的構建
        4.3.2 亞細胞定位
    4.4 討論
5 SlNAC4、SlNAC10轉錄激活作用分析
    5.1 實驗材料
        5.1.1 菌株
        5.1.2 實驗試劑
        5.1.3 相關溶液的配制
        5.1.4 設備儀器
        5.1.5 引物
    5.2 實驗方法
        5.2.1 酵母表達載體構建
        5.2.2 制備酵母菌感受態(tài)細胞
        5.2.3 陽性質粒轉化酵母菌
        5.2.4 β-半乳糖苷酶活性檢測
    5.3 實驗結果
        5.3.1 酵母表達載體的構建
        5.3.2 轉錄激活作用分析
    5.4 討論
6 SlNAC4、SlNAC10基因轉化擬南芥及轉基因擬南芥抗逆性分析
    6.1 實驗材料
        6.1.1 植物材料
        6.1.2 實驗試劑
        6.1.3 儀器設備
        6.1.4 引物
    6.2 實驗方法
        6.2.1 植物表達載體的構建
        6.2.2 農桿菌轉化擬南芥
        6.2.3 陽性擬南芥的篩選
        6.2.4 轉基因擬南芥半定量RT-PCR分析
        6.2.5 轉基因擬南芥的抗性分析
    6.3 實驗結果
        6.3.1 植物表達載體的構建
        6.3.2 轉基因擬南芥的篩選
        6.3.3 外源基因在轉基因擬南芥半中的表達
        6.3.4 轉基因擬南芥的脅迫分析
    6.4 討論
結論
參考文獻
附錄A 培養(yǎng)基
附錄B 載體
附錄C Marker
攻讀碩士學位期間發(fā)表學術論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]植物非生物脅迫相關轉錄因子研究方法[J]. 宿明星,孫穎顥,施鶴,李秋莉.  生物技術通報. 2015(01)
[2]植物NAC轉錄因子的研究進展[J]. 康桂娟,曾日中,聶智毅,黎瑜,代龍軍,段翠芳.  生物技術通報. 2012(11)
[3]NAC轉錄因子在植物抗病和抗非生物脅迫反應中的作用[J]. 孫利軍,李大勇,張慧娟,宋鳳鳴.  遺傳. 2012(08)
[4]植物NAC轉錄因子家族研究概況[J]. 彭輝,于興旺,成慧穎,張樺,石慶華,李建貴,麻浩.  植物學報. 2010(02)
[5]植物NAC轉錄因子的研究進展[J]. 冶曉芳,唐益苗,高世慶,楊穎,劉美英,王永波,趙昌平.  生物技術通報. 2009(10)
[6]植物轉錄因子與基因調控[J]. 李潔.  生物學通報. 2004(03)
[7]植物轉錄因子的結構與調控作用[J]. 劉強,張貴友,陳受宜.  科學通報. 2000(14)
[8]植物轉錄因子的結構與功能[J]. 陳麗.  植物生理學通訊. 1997(06)



本文編號：3324190