發(fā)布時間：2020-12-12 03:48

　　背景和目的:造血干細胞（hematopoietic stem cells,HSCs）具有自我更新和多向分化的潛能,目前很多血液系統(tǒng)惡性疾病有效的治療方法是造血干細胞移植。臍帶血由于其免疫原性較弱的特點也成為造血干細胞移植的來源。雖然有很多擴增HSCs的方法,但是都難以滿足臨床治療的需要。因此如何大量擴增HSCs,特別是臍帶血干細胞是我們目前亟待解決的問題。有研究報道FGF1和FGF2可以在體外擴增HSCs,也有研究闡明了骨髓損傷修復過程中FGFR1促進HSCs增殖。FGF家族的四個受體中FGFR1和FGFR3都在HSCs中高表達,而前期本實驗室已經(jīng)通過體內(nèi)實驗證實FGFR3能負調(diào)控骨髓損傷條件下的HSCs增殖,那么FGFR3對HSCs的體外擴增有什么調(diào)控作用呢?本文以此為出發(fā)點,探討FGFR3對HSCs體外增殖的調(diào)控作用及其分子機制。方法:1.利用流式細胞儀,從已建立的Fgfr3敲除小鼠中,分離造血干細胞（Flk2-LSK）,運用RNA-seq技術(shù)進行了單細胞測序,對差異表達基因進行了系統(tǒng)的分析。2.通過細胞的體外培養(yǎng)實驗,利用流式細胞術(shù)分析了不同生長因子對WT和KO小鼠的HSCs體外... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞匯
第1章 緒論
    1.1 HSCs的概述
    1.2 HSCs的應用
    1.3 FGFs家族在造血中的作用
    1.4 FGFs家族在血液腫瘤中的作用
    1.5 FGFR3概述
        1.5.1 FGFR3與骨骼疾病
        1.5.2 FGFR3與癌癥
    1.6 本課題的研究思路
第2章 材料和方法
    2.1 儀器與試劑
        2.1.1 主要的試劑
        2.1.2 抗體
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 實驗試劑的配方
        2.1.5 實驗動物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠基因型鑒定
        2.2.2 蛋白水平驗證基因敲除小鼠FGFR3表達情況
        2.2.3 分離小鼠骨髓細胞
        2.2.4 免疫磁珠法分選小鼠CD117+造血干/祖細胞
        2.2.5 免疫磁珠法分選小鼠LK造血祖細胞
        2.2.6 流式細胞術(shù)分析HSCs胞內(nèi)蛋白的表達
        2.2.7 細胞體外培養(yǎng)并檢測HSCs的比例
        2.2.8 病毒侵染CD117+造血干/祖細胞
        2.2.9 AnnexinV檢測細胞凋亡
        2.2.10 BrdU檢測細胞增殖
第3章 實驗結(jié)果
    3.1 小鼠基因型鑒定結(jié)果
        3.1.1 通過PCR方法擴增Fgfr3基因片段的結(jié)果
        3.1.2 PCR產(chǎn)物測序結(jié)果
        3.1.3 蛋白水平驗證FGFR3在小鼠體內(nèi)的敲除情況
    3.2 單細胞測序檢測FGFR3對HSCs中基因表達的影響
    3.3 PDGFR的表達檢測結(jié)果
    3.4 FGF2/PDGF促進FGFR3敲除的HSCs增殖
    3.5 PDGF-BB通過激活STAT5和上調(diào)CyclinD1的表達促進HSCs擴增
    3.6 FGFR3通過激活STAT1負調(diào)控HSCs擴增
    3.7 si-Stat5a病毒侵染CD117+細胞
        3.7.1 RT-PCR法驗證Stat5基因表達情況
        3.7.2 si-Stat5a病毒侵染CD117+細胞的熒光變化情況
        3.7.3 AnnexinV檢測細胞凋亡情況
        3.7.4 BrdU檢測細胞的增殖能力
    3.8 FGFR3-K650E病毒侵染CD117+細胞
        3.8.1 蛋白水平驗證FGFR3-K650E的表達情況
        3.8.2 AnnexinV檢測細胞凋亡情況
        3.8.3 BrdU檢測細胞增殖能力
        3.8.4 CD117+細胞內(nèi)信號通路蛋白的表達及活化情況
第4章 實驗結(jié)論
第5章 實驗討論
參考文獻
致謝



本文編號：2911801