背景和目的:造血干細(xì)胞（hematopoietic stem cells,HSCs）具有自我更新和多向分化的潛能,目前很多血液系統(tǒng)惡性疾病有效的治療方法是造血干細(xì)胞移植。臍帶血由于其免疫原性較弱的特點(diǎn)也成為造血干細(xì)胞移植的來(lái)源。雖然有很多擴(kuò)增HSCs的方法,但是都難以滿(mǎn)足臨床治療的需要。因此如何大量擴(kuò)增HSCs,特別是臍帶血干細(xì)胞是我們目前亟待解決的問(wèn)題。有研究報(bào)道FGF1和FGF2可以在體外擴(kuò)增HSCs,也有研究闡明了骨髓損傷修復(fù)過(guò)程中FGFR1促進(jìn)HSCs增殖。FGF家族的四個(gè)受體中FGFR1和FGFR3都在HSCs中高表達(dá),而前期本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)FGFR3能負(fù)調(diào)控骨髓損傷條件下的HSCs增殖,那么FGFR3對(duì)HSCs的體外擴(kuò)增有什么調(diào)控作用呢?本文以此為出發(fā)點(diǎn),探討FGFR3對(duì)HSCs體外增殖的調(diào)控作用及其分子機(jī)制。方法:1.利用流式細(xì)胞儀,從已建立的Fgfr3敲除小鼠中,分離造血干細(xì)胞（Flk2-LSK）,運(yùn)用RNA-seq技術(shù)進(jìn)行了單細(xì)胞測(cè)序,對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行了系統(tǒng)的分析。2.通過(guò)細(xì)胞的體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),利用流式細(xì)胞術(shù)分析了不同生長(zhǎng)因子對(duì)WT和KO小鼠的HSCs體外... 

【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞匯
第1章 緒論
    1.1 HSCs的概述
    1.2 HSCs的應(yīng)用
    1.3 FGFs家族在造血中的作用
    1.4 FGFs家族在血液腫瘤中的作用
    1.5 FGFR3概述
        1.5.1 FGFR3與骨骼疾病
        1.5.2 FGFR3與癌癥
    1.6 本課題的研究思路
第2章 材料和方法
    2.1 儀器與試劑
        2.1.1 主要的試劑
        2.1.2 抗體
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑的配方
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小鼠基因型鑒定
        2.2.2 蛋白水平驗(yàn)證基因敲除小鼠FGFR3表達(dá)情況
        2.2.3 分離小鼠骨髓細(xì)胞
        2.2.4 免疫磁珠法分選小鼠CD117+造血干/祖細(xì)胞
        2.2.5 免疫磁珠法分選小鼠LK造血祖細(xì)胞
        2.2.6 流式細(xì)胞術(shù)分析HSCs胞內(nèi)蛋白的表達(dá)
        2.2.7 細(xì)胞體外培養(yǎng)并檢測(cè)HSCs的比例
        2.2.8 病毒侵染CD117+造血干/祖細(xì)胞
        2.2.9 AnnexinV檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.2.10 BrdU檢測(cè)細(xì)胞增殖
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 小鼠基因型鑒定結(jié)果
        3.1.1 通過(guò)PCR方法擴(kuò)增Fgfr3基因片段的結(jié)果
        3.1.2 PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果
        3.1.3 蛋白水平驗(yàn)證FGFR3在小鼠體內(nèi)的敲除情況
    3.2 單細(xì)胞測(cè)序檢測(cè)FGFR3對(duì)HSCs中基因表達(dá)的影響
    3.3 PDGFR的表達(dá)檢測(cè)結(jié)果
    3.4 FGF2/PDGF促進(jìn)FGFR3敲除的HSCs增殖
    3.5 PDGF-BB通過(guò)激活STAT5和上調(diào)CyclinD1的表達(dá)促進(jìn)HSCs擴(kuò)增
    3.6 FGFR3通過(guò)激活STAT1負(fù)調(diào)控HSCs擴(kuò)增
    3.7 si-Stat5a病毒侵染CD117+細(xì)胞
        3.7.1 RT-PCR法驗(yàn)證Stat5基因表達(dá)情況
        3.7.2 si-Stat5a病毒侵染CD117+細(xì)胞的熒光變化情況
        3.7.3 AnnexinV檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況
        3.7.4 BrdU檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力
    3.8 FGFR3-K650E病毒侵染CD117+細(xì)胞
        3.8.1 蛋白水平驗(yàn)證FGFR3-K650E的表達(dá)情況
        3.8.2 AnnexinV檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況
        3.8.3 BrdU檢測(cè)細(xì)胞增殖能力
        3.8.4 CD117+細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路蛋白的表達(dá)及活化情況
第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
第5章 實(shí)驗(yàn)討論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：2911801