發(fā)布時(shí)間：2018-03-23 02:34

  本文選題：神經(jīng)干細(xì)胞　切入點(diǎn)：轉(zhuǎn)分化　出處：《昆明理工大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：背景與目的:神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs)指具有分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞及少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力,能自我更新并足以提供大量腦組織細(xì)胞的細(xì)胞群。因神經(jīng)干細(xì)胞具備自我更新和多分化潛能的兩個(gè)基本特性,以及遷移功能、低免疫性和良好的組織融合性的優(yōu)點(diǎn),故而成為細(xì)胞移植治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病良好的移植材料,但是如何體外獲得并分選出高純度的神經(jīng)干細(xì)胞便成為其推向臨床治療關(guān)鍵。在前期的實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn):在成纖維細(xì)胞在轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)干細(xì)胞的過(guò)程中,CD133這一細(xì)胞表面膜蛋白的表達(dá)量在前5天呈現(xiàn)出顯著升高的趨勢(shì),其后維持高表達(dá)狀態(tài)。所以本課題旨在確定CD133這一蛋白能否作為成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)干細(xì)胞過(guò)程中的篩選標(biāo)記,從而為體外分選高純度神經(jīng)干細(xì)胞提供理論依據(jù),也為進(jìn)一步研究轉(zhuǎn)分化機(jī)制及神經(jīng)干細(xì)胞應(yīng)用奠定良好的基礎(chǔ)。材料與方法:取65天的獼猴耳部組織獲得成纖維細(xì)胞,在35mm的小皿中用包含Sox2、Oct4和Klf4三個(gè)轉(zhuǎn)錄因子的逆病毒感染3×104個(gè)新生猴成纖維細(xì)胞兩次。第三天用胰酶消化,往鋪過(guò)5 mg/mLlaminin的一個(gè)六孔板中接入l× 105個(gè)細(xì)胞,并加入3 mL誘導(dǎo)培養(yǎng)基。在誘導(dǎo)第5天和第七天,分別去掉Y27632和丙戊酸,在第11天時(shí)換為神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基。期間,對(duì)每一天的細(xì)胞進(jìn)行CD133的免疫熒光染色,觀察CD133的表達(dá)情況。在第七天時(shí),對(duì)細(xì)胞進(jìn)行CD133流式分選,分別收集陽(yáng)性細(xì)胞和陰性細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng),并進(jìn)行神經(jīng)鑒定。結(jié)果:(1)用Sox2、Oct4和Klf4的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染成纖維細(xì)胞后,每一種病毒的感染效率基本都達(dá)到了 80%。(2)雖然隨著天數(shù)的增加,由于細(xì)胞大量死亡,CD133的表達(dá)有一定增強(qiáng),但其表達(dá)量在宏觀上并沒(méi)有顯著增多。(3)經(jīng)鑒定,在轉(zhuǎn)分化第7天利用流式細(xì)胞術(shù)分選出的CD133陽(yáng)性細(xì)胞群可以成功轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)干細(xì)胞,而CD133陰性細(xì)胞不能轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)干細(xì)胞。結(jié)論:CD133可以作為成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)干細(xì)胞過(guò)程中的篩選標(biāo)記。
[Abstract]:Background & AIM: neural stem cells have the ability to differentiate into neurons, astrocytes and oligodendrocytes. A group of cells capable of self-renewal and sufficient to provide a large number of brain tissue cells. Because neural stem cells have two basic characteristics of self-renewal and multi-differentiation potential, as well as the advantages of migration, low immunity and good tissue fusion, So it has become a good transplantation material for the treatment of nervous system diseases, but how to obtain and select high purity neural stem cells in vitro is the key to clinical treatment. We found that the expression of CD133, a membrane protein on the surface of fibroblasts, increased significantly in the first five days during the process of transforming fibroblasts into neural stem cells. The aim of this study was to determine whether the CD133 protein can be used as a screening marker in the process of fibroblast transdifferentiation into neural stem cells, so as to provide a theoretical basis for the separation of high purity neural stem cells in vitro. It also laid a good foundation for further study on the mechanism of transdifferentiation and the application of neural stem cells. Materials and methods: the fibroblasts were obtained from the ear tissue of rhesus monkey after 65 days. The 3 脳 104 neonatal monkey fibroblasts were infected twice with antivirus containing three transcription factors of Sox2 Oct4 and Klf4 in a small dish of 35mm. On the third day, the cells were digested with trypsin, and 1 脳 105 cells were injected into a six-well plate spread over 5 mg/mLlaminin. On the 5th and 7th day of induction, Y27632 and valproic acid were removed and replaced into neural stem cell culture medium on the 11th day. During the induction, the cells were stained with CD133 immunofluorescence staining on each day. The expression of CD133 was observed. On the seventh day, CD133 flow sorting was carried out on the cells, positive and negative cells were collected and cultured, and the nerve was identified. Results: the fibroblasts were infected with the retrovirus of Sox2Oct4 and Klf4. The infection efficiency of each virus basically reached 80%.) although the expression of CD133 increased with the increase of days, the expression of CD133 was not significantly increased in macroscopically. On the 7th day of transdifferentiation, CD133 positive cells were successfully transformed into neural stem cells by flow cytometry. CD133 negative cells could not be transformed into neural stem cells. Conclusion: CD133 can be used as a screening marker in the process of fibroblast transdifferentiation into neural stem cells.
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：Q42

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃鎮(zhèn),金國(guó)華,徐慧君;神經(jīng)干細(xì)胞研究進(jìn)展[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2002年01期

2 張敬軍,夏作理,劉焯霖;神經(jīng)干細(xì)胞的研究[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年02期

3 季慶;神經(jīng)干細(xì)胞的研究近況[J];醫(yī)學(xué)綜述;2002年05期

4 劉岳文,杜永紅,王可,徐正順;神經(jīng)干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];河南科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年02期

5 劉佳梅,陳東,孟曉婷;一種獲得神經(jīng)干細(xì)胞單細(xì)胞的新方法[J];中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐;2004年01期

6 王忠誠(chéng),于春江;神經(jīng)干細(xì)胞研究進(jìn)展[J];心腦血管病防治;2004年03期

7 楊東波,李永利,蔣傳路,楊立莊;神經(jīng)干細(xì)胞分化調(diào)控機(jī)制研究進(jìn)展[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2004年05期

8 薛杉;張旺明;徐如祥;;神經(jīng)干細(xì)胞的遷移和網(wǎng)絡(luò)化(英文)[J];中國(guó)臨床康復(fù);2005年45期

9 張麗;顧振倫;秦正紅;;神經(jīng)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元的基因調(diào)控(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2006年05期

10 劉佳梅;;腦內(nèi)皮細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞共培養(yǎng)促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的遷移[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2009年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 王華;王文輝;林蕾;;神經(jīng)干細(xì)胞的研究進(jìn)展及前景展望[A];第六屆西部介入放射學(xué)術(shù)會(huì)議寧夏醫(yī)學(xué)會(huì)放射學(xué)分會(huì)第四屆年會(huì)介入放射學(xué)新技術(shù)繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

2 戴毅;韓忠朝;;神經(jīng)干細(xì)胞研究進(jìn)展及臨床前景展望[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第八屆組織學(xué)與胚胎學(xué)專(zhuān)業(yè)青年研討會(huì)論文集[C];2004年

3 孫一睿;胡錦;王爾松;奚才華;姚海軍;;單層黏附培養(yǎng)技術(shù)在哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞體外穩(wěn)定增殖和多向分化中的應(yīng)用[A];中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)神經(jīng)外科醫(yī)師分會(huì)第四屆全國(guó)代表大會(huì)論文匯編[C];2009年

4 劉佳梅;;腦內(nèi)皮細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞共培養(yǎng)促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的遷移[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

5 魏勇;應(yīng)大君;張偉;董世武;;幼齡家豬腦SVZ神經(jīng)干細(xì)胞的分離與鑒定[A];解剖學(xué)雜志——中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

6 司銀楚;朱培純;程龍;吳海霞;許紅;;去皮層血管對(duì)成年大鼠腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞的影響[A];解剖學(xué)雜志——中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

7 李學(xué)坤;郭安臣;左萍萍;;胎鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定及亞克隆[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)神經(jīng)學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省藥理學(xué)會(huì)2002年年會(huì)論文摘要集[C];2002年

8 李力;萬(wàn)琪;;小鼠神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)及缺血神經(jīng)元對(duì)其增殖、分化的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

9 李力;萬(wàn)琪;劉永紅;張巍;;小鼠神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)及缺血神經(jīng)元對(duì)其增殖、分化的影響[A];科技、工程與經(jīng)濟(jì)社會(huì)協(xié)調(diào)發(fā)展——中國(guó)科協(xié)第五屆青年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

10 徐群淵;;神經(jīng)干細(xì)胞的分離、純化和永生化[A];中國(guó)組織工程、干細(xì)胞與神經(jīng)再生學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 胡德榮;“抑制蛋白”可控制神經(jīng)干細(xì)胞提前分化[N];健康報(bào);2007年

2 孫國(guó)根　白毅;靈長(zhǎng)類(lèi)腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2011年

3 孫國(guó)根;阻礙卒中后神經(jīng)干細(xì)胞再生的“元兇”被發(fā)現(xiàn)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2013年

4 ;我國(guó)科學(xué)家成功地在體外培養(yǎng)出神經(jīng)干細(xì)胞[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

5 沈麗 付鈺;神奇的神經(jīng)干細(xì)胞[N];科技日?qǐng)?bào);2002年

6 時(shí)仲省 高思敏 劉春陽(yáng);河南醫(yī)大成功培養(yǎng)人胚神經(jīng)干細(xì)胞[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2001年

7 梓華;神經(jīng)干細(xì)胞可治惡性腦癌[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

8 許琦敏;腦損傷修復(fù)治療又有新希望[N];文匯報(bào);2007年

9 北京市神經(jīng)外科研究所 北京天壇醫(yī)院 王忠誠(chéng)邋院士;神經(jīng)修復(fù)的生力軍——神經(jīng)干細(xì)胞[N];健康報(bào);2008年

10 孫國(guó)根;神經(jīng)干細(xì)胞并非“全能制造者”[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張帆;Miranda磷酸化調(diào)控果蠅神經(jīng)干細(xì)胞不對(duì)稱(chēng)分裂的機(jī)制[D];浙江大學(xué);2014年

2 張坤;極化巨噬細(xì)胞與脊髓來(lái)源神經(jīng)干細(xì)胞聯(lián)合移植對(duì)脊髓損傷治療作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 褚天慈;血管生成素2對(duì)胎鼠腦皮層神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化作用及其分子機(jī)制的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

4 胡園園;AF1q在神經(jīng)發(fā)育中的功能及調(diào)控機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 張鳳云;神經(jīng)干細(xì)胞中PFK-1對(duì)神經(jīng)發(fā)生的負(fù)調(diào)控作用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

6 孫婧;神經(jīng)干細(xì)胞移植治療腦出血的抗炎作用及其機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2017年

7 于曉雯;神經(jīng)干細(xì)胞對(duì)缺血性卒中的保護(hù)機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

8 郭立云;獼猴胚胎源性神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)、腦內(nèi)移植及其在青光眼玻璃體內(nèi)的轉(zhuǎn)歸—探索性研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

9 任永娟;材料調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞的研究[D];清華大學(xué);2009年

10 曹翠麗;大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及向神經(jīng)元的誘導(dǎo)分化[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李武雄;MK-801在谷氨酸-Shh信號(hào)通路中的阻斷作用[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2014年

2 馮旭;NeuroD慢病毒載體構(gòu)建及在大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的過(guò)表達(dá)[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 閆姍姍;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞重編程為神經(jīng)干細(xì)胞的調(diào)控機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

4 魏維;松果菊苷對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞體外增殖的影響[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

5 周強(qiáng)意;轉(zhuǎn)TrkC神經(jīng)干細(xì)胞聯(lián)合膠原支架對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷大鼠模型治療作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

6 孫爽;孕酮對(duì)Aβ_(25-35)損傷的神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化的影響及機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 劉磊;神經(jīng)干細(xì)胞移植治療大鼠腦梗死的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2015年

8 張濤;降鈣素基因相關(guān)肽促進(jìn)體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化[D];蘇州大學(xué);2015年

9 楊明;谷氨酸/NMDA1、Shh介導(dǎo)的成體NSC增殖分化信號(hào)通路的研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

10 甘小鳳;弓形蟲(chóng)抑制Wnt/β-catenin通路干擾C17.2神經(jīng)干細(xì)胞的分化[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1651545