本文選題：N2型禽流感病毒　切入點：神經(jīng)氨酸酶　出處：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：禽流感(avian influenza,AI)是由A型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)引起以禽類發(fā)病為主的一種急性、高度接觸性、致死性的人畜共患傳染病。神經(jīng)氨酸酶(neuraminidase)是禽流感病毒表面的主要蛋白之一,對禽流感病毒的復(fù)制和傳播發(fā)揮著重要的作用,因此以神經(jīng)氨酸酶為靶點設(shè)計抗禽流感病毒抑制劑成為目前抗禽流感病毒藥物研究的熱點方向之一。到目前為止,上市的神經(jīng)氨酸酶抑制劑主要有扎那米韋、奧司他韋、帕拉米韋。有研究顯示,禽流感病毒對現(xiàn)有藥物都陸續(xù)出現(xiàn)不同程度的耐藥性。因此,開發(fā)基于新靶點和新結(jié)構(gòu)的抗禽流感藥物迫在眉睫。2013年,高福院士課題組在解析N2型神經(jīng)氨酸酶的結(jié)構(gòu)時,發(fā)現(xiàn)高濃度奧司他韋羧酸能誘導(dǎo)剛性關(guān)閉的N2型150-loop打開。本課題試圖利用配體與N2的相互作用,誘導(dǎo)150-loop打開,從而為設(shè)計開發(fā)高活性NA抑制劑指明方向。本論文主要包括三部分內(nèi)容。第一,根據(jù)神經(jīng)氨酸酶的蛋白結(jié)構(gòu),在奧司他韋羧酸C-5氨基上引入芳甲基、噻吩甲基、�；突酋；然鶊F,設(shè)計了19種目標(biāo)化合物:Lu17A1~Lu17A19。第二,進行目標(biāo)化合物在CEF細胞上抗H5N2的活性檢測。根據(jù)每一化合物的IC_(50)值,比較目標(biāo)化合物的抑制活性。實驗結(jié)果顯示,Lu17A16、Lu17A17、Lu17A18、Lu17A19抑制活性較差,Lu17A7、Lu17A9、Lu17A10、Lu17A11、Lu17A13抑制活性較好,其它化合物表現(xiàn)出了中等強度的抑制活性。為證實目標(biāo)化合物確實是作用于N2型神經(jīng)氨酸酶,本論文選取了活性最佳的目標(biāo)化合物(Lu17A9)進行了神經(jīng)氨酸酶活性評價。結(jié)果顯示,以Lu17A9為代表的目標(biāo)化合物確實作用于N2,可以作為N2型神經(jīng)氨酸酶抑制劑。第三,篩選出5種抑制活性較好的化合物(Lu17A7、Lu17A9、Lu17A10、Lu17A11、Lu17A13),檢測其在雞胚上抗H9N2的活性。收取雞胚尿囊液,進行血凝檢測及熒光定量PCR檢測,分別得出HA和CP值。結(jié)果顯示,HA及CP值所對應(yīng)的化合物所表現(xiàn)出的抑制活性一致,這與其在細胞上抗H5N2所表現(xiàn)的抑制活性也是一致的。通過上述實驗結(jié)果分析得出化合物結(jié)構(gòu)特點對其抑制活性具有一定的影響。結(jié)論如下:第一,奧司他韋羧酸分子上C-5氨基堿性的保持及疏水性取代基的引入有利于提高化合物的抑制活性。芳甲基及噻吩甲基的引入有利于提高化合物抑制活性,酰基和磺�；囊雱t不利于提高化合物抑制活性。第二,芳基上取代基的相對位置、取代基的數(shù)目、大小以及雜原子的存在對化合物的抑制活性也有一定的影響。取代基的芳甲基上存在對位取代基時抑制活性好于間位取代基;芳基上有較大體積取代基或多余兩個取代基時活性較低;芳甲基芳基中存在雜原子時活性相對較好。
[Abstract]:Avian influenza virus (Avian Influenza) is an acute, highly contact and fatal zoonotic disease caused by avian influenza virus A (AIV). Neuraminidase is one of the main proteins on the surface of avian influenza virus. It plays an important role in the replication and transmission of avian influenza virus. Therefore, the design of anti-avian influenza virus inhibitors using neuraminidase as a target has become one of the hot research directions of anti-avian influenza virus drugs. The main inhibitors of neuraminidase on the market are zanamivir, oseltamivir and paramivir. Studies have shown that the avian influenza virus has shown varying degrees of resistance to existing drugs. It is urgent to develop anti-avian influenza drugs based on new targets and structures. In 2013, the research group of Gaofu studied the structure of N2 neuraminidase. It was found that high concentration of oseltamivir carboxylic acid could induce the opening of rigid closed N2 150-loop. This paper mainly includes three parts. Firstly, according to the protein structure of neuraminidase, aryl methyl and thiophene methyl were introduced into the C-5 amino group of oseltamivir carboxylic acid. Acyl group and sulfonyl group were used to design 19 target compounds:: Lu17A1, Lu17A19. second, the activity of the target compounds in CEF cells was determined. According to the ICSP 50 value of each compound, The results showed that Lu17A16, Lu17A18, Lu17A18, Lu17A19, Lu17A7, Lu17A9, Lu17A10, Lu17A11, Lu17A13, and other compounds showed moderate inhibitory activity. In this paper, the target compound Lu17A9 was selected to evaluate the activity of neuraminidase. The results showed that the target compound represented by Lu17A9 acted on N _ 2 and could be used as N _ 2 type neuraminidase inhibitor. Five compounds, Lu17A7, Lu17A9, Lu17A10, Lu17A11, Lu17A13, were screened for their anti-H9N2 activity on chicken embryo. Chicken embryo allantoic fluid was collected for hemagglutination detection and fluorescence quantitative PCR assay. Ha and CP values were obtained respectively. The results showed that the compounds corresponding to HA and CP values showed the same inhibitory activity. Through the analysis of the above experimental results, it is concluded that the structural characteristics of the compounds have a certain effect on the inhibitory activity. The conclusions are as follows: first, The retention of C-5 amino base and the introduction of hydrophobic substituents on oseltamivir carboxylic acid molecules can improve the inhibitory activity of the compounds, and the introduction of aryl methyl and thiophene methyl can improve the inhibitory activity of the compounds. The introduction of acyl and sulfonyl groups is not conducive to improving the inhibitory activity of the compounds. Second, the relative position of the substituents on the aryl group, the number of substituents, The size and the existence of heteratomic atoms also have a certain influence on the inhibitory activity of the compounds. The suppressive activity of the substituted aromatic methyl group is better than that of the meso-substituted group in the presence of the p-substituent group. The activity of aryl group is lower when there are larger volume substituents or superfluous substituents, and the activity of aryl methyl aryl group is better when there are hetero atoms in the aryl group.
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.65

【參考文獻】

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本文編號：1611272