白蟻腸道細(xì)菌的多樣性和生物活性研究
本文關(guān)鍵詞:白蟻腸道細(xì)菌的多樣性和生物活性研究 出處:《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文 論文類型:學(xué)位論文
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【摘要】:白蟻腸道是一個比較封閉的微環(huán)境,白蟻腸道內(nèi)的共生微生物也具有其獨特的性質(zhì),它們可以幫助白蟻分解難消化的木質(zhì)纖維素,產(chǎn)生白蟻生長所必需的刺激代謝產(chǎn)物等。本研究從白蟻腸道內(nèi)微生物的多樣性出發(fā),利用免培養(yǎng)的高通量測序技術(shù)和純培養(yǎng)的方法研究白蟻腸道細(xì)菌的多樣性,篩選具有木質(zhì)纖維素分解能力和抗菌活性的菌株。為以后的研究提供一定的實驗依據(jù)。本研究通過高通量測序技術(shù),對白蟻腸道樣品中的細(xì)菌進行16SrDNA基因的V4區(qū)進行測序,最終獲得62404條有效的序列,總共630個OTUs。鑒定出厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、變形菌門(Proteobacteria)、放線菌門(Actinobacteria)、螺旋體門(Spirochaetes)等13個門的細(xì)菌,其中放線菌門占16.95%。本研究通過不同的培養(yǎng)基和分離方法分離白蟻腸道內(nèi)的微生物。一共挑取1458株菌,最后得到放線菌327株,其中包括一個放線菌目(Actinobacterales),放線菌目下的5個亞目,分別為:微球菌亞目(Micrococcineae)的4個科;鏈霉菌亞目(Streptomycineae)的1個科;棒桿菌亞目(Corynebacterineae)的2個科;丙酸桿菌亞目(Propionibacterineae)的1個科;小單孢菌亞目(Micromonosporineae)的1個科,總共有10個科,18個屬。并且分離到一株新分類單元,通過初步分析,鑒定YIM 110061為明串珠菌科(Leuconostocaceae)下的一個新屬。本研究對分離得到的菌株篩選長勢良好的菌株進行纖維素酶活和木質(zhì)素酶活的測定。最終測量四株菌株的纖維素酶活隨時間的變化曲線,比較發(fā)現(xiàn)YIM110167分解纖維素的活性整體最好,并在第五天酶活達(dá)到最大值為23.69/ml。本研究測量菌株的三種木質(zhì)素酶活,分別是:漆酶、過氧化物酶、猛過氧化物酶。其中發(fā)現(xiàn)YIM 110063的過氧化物酶活性最高,這株菌株還檢測到其他兩種酶的活性,后續(xù)對這株菌株進行濾紙片的篩選,發(fā)現(xiàn)五天后濾紙片斷裂,并且液體培養(yǎng)基變渾濁。本研究對分離到的327株放線菌進行抗菌活性和功能基因的篩選。最終得到11株抗大腸桿菌,22株抗枯草芽孢桿菌,30株抗金黃色葡萄球菌,32株抗白色鏈球菌,48株抗黑曲霉的菌株。并檢測327株放線菌的六種功能基因。白蟻腸道是一個非常特殊的環(huán)境,存在大量值得研究的菌株,利用好這類資源一定會為人類的發(fā)展做出很大貢獻(xiàn)。
[Abstract]:The intestinal tract of termites is a relatively closed microenvironment, and the symbiotic microorganisms in the intestinal tract of termites also have their unique properties, which can help termite to decompose the indigestible lignocellulose. This study based on the diversity of microbes in the intestinal tract of termites, using high-throughput sequencing technology and pure culture methods to study the diversity of termites intestinal bacteria. Screening the strains with lignocellulose decomposition ability and antimicrobial activity to provide a certain experimental basis for future research. This study through high-throughput sequencing technology. The V4 region of 16s rDNA gene was sequenced from the bacteria in the intestinal tract of termites and 62404 valid sequences were obtained. A total of 630 OTUs. were identified as Firmicutesus, Bacteroidetes. Proteobacteria, Actinobacteria, Spirochaetes. Actinomycetes accounted for 16.95. In this study, the bacteria in termites intestines were isolated by different culture medium and isolation methods. A total of 1458 strains of bacteria were selected, and 327 strains of actinomycetes were obtained. It includes an actinobacterium actinobacterium and five suborders of actinobacter, which are four families of Micrococcineaeae. A family of Streptomycineae; Two families of Corynebacterium Corynebacter. A family of Propionibacterium propioniae; A family of Micromonosporineae, consisting of 10 families and 18 genera, was isolated and a new taxonomic unit was isolated and analyzed preliminarily. YIM 110061 was identified as Leuconostocaceaeae. In this study, the cellulase activity and ligninase activity of the strains with good growth were determined. Finally, the cellulase activity curves of four strains were measured. It was found that the activity of cellulose decomposed by YIM110167 was the best on the whole and reached the maximum value of 23.69 / ml on 5th days. The three kinds of lignin enzyme activity of the strain were measured in this study. They were laccase, peroxidase and peroxidase. The highest peroxidase activity was found in YIM 110063, and the other two enzymes were also detected by this strain. The strain was screened for filter paper and found that the filter paper broke five days later. In this study, 327 strains of actinomycetes were screened for antimicrobial activity and functional genes. Finally, 11 strains resistant to Escherichia coli and 22 strains of Bacillus subtilis resistant to Bacillus subtilis were obtained. Thirty three strains of staphylococcus aureus were resistant to Streptococcus albicans and 48 strains were resistant to Aspergillus Niger. Six functional genes of 327 strains of actinomycetes were detected. The intestinal tract of termites is a very special environment. There are a lot of strains worth studying, and making good use of these resources will make a great contribution to human development.
【學(xué)位授予單位】:鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號】:Q93
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,本文編號:1385280
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