發(fā)布時(shí)間：2023-06-04 04:08

　　以水生動(dòng)物作為受試動(dòng)物來(lái)評(píng)價(jià)藥物的毒性效應(yīng)近年來(lái)已逐步成為國(guó)際上環(huán)境科學(xué)與水域生態(tài)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。輪蟲(chóng)是浮游動(dòng)物的主要類(lèi)群之一,以其繁殖速度快、生活周期短和對(duì)毒物敏感性高的優(yōu)點(diǎn)而經(jīng)常應(yīng)用于生態(tài)毒理學(xué)研究中。百草枯(Paraquat)是一種有機(jī)雜環(huán)類(lèi)除草劑,胡桃醌(Juglone)是一種從核桃楸(Juglans mandshurica Maxim)或者核桃(Juglans regia L)中提取出的萘醌類(lèi)物質(zhì),這兩種藥物都能誘導(dǎo)機(jī)體形成過(guò)量的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS),從而產(chǎn)生氧化毒性效應(yīng)。本文選用兩種不同特性的輪蟲(chóng)作為試驗(yàn)材料——一種是目前研究已相對(duì)比較廣泛的萼花臂尾輪蟲(chóng)(Brachionus calyciflorus),另一種是具有特殊生活史和表型多態(tài)性的卜氏晶囊輪蟲(chóng)(Asplachna brightwelli)考察兩者對(duì)百草枯和胡桃醌的敏感程度,并探究?jī)煞N藥物的作用機(jī)理。在此基礎(chǔ)上,本文還通過(guò)cDNA末端快速克隆(RACE,rapid-amplification of cDNA ends)技術(shù)克隆出卜氏晶囊輪蟲(chóng)的hsp70基因全長(zhǎng),并在此基...

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 生態(tài)毒理學(xué)與水生態(tài)毒理學(xué)
        1.1.1 概念簡(jiǎn)述
        1.1.2 水生態(tài)毒理學(xué)的國(guó)內(nèi)外研究概況
    1.2 輪蟲(chóng)在生態(tài)毒理學(xué)研究中的應(yīng)用
        1.2.1 輪蟲(chóng)簡(jiǎn)述
        1.2.2 萼花臂尾輪蟲(chóng)與卜氏晶囊輪蟲(chóng)基本特征的比較
        1.2.3 輪蟲(chóng)作為毒理學(xué)受試動(dòng)物的優(yōu)勢(shì)
        1.2.4 輪蟲(chóng)作為毒理學(xué)受試動(dòng)物的研究歷史
        1.2.5 輪蟲(chóng)應(yīng)用于生態(tài)毒理學(xué)的指標(biāo)參數(shù)
    1.3 輪蟲(chóng)相關(guān)分子生物學(xué)研究進(jìn)展
        1.3.1 HSP70的特點(diǎn)和抗氧化作用研究
        1.3.2 輪蟲(chóng)分子生物學(xué)研究概況
    1.4 百草枯與胡桃醌的毒理學(xué)研究基礎(chǔ)
    1.5 本文的研究目的與意義
        1.5.1 研究目的
        1.5.2 研究意義
        1.5.3 技術(shù)路線
第2章 百草枯、胡桃醌對(duì)萼花臂尾輪蟲(chóng)和卜氏晶囊輪蟲(chóng)的急性毒理效應(yīng)研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 輪蟲(chóng)的采集、培養(yǎng)方法
        2.1.2 主要試驗(yàn)儀器
        2.1.3 試驗(yàn)藥品的配置
        2.1.4 輪蟲(chóng)的試驗(yàn)培養(yǎng)
        2.1.5 數(shù)據(jù)分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 百草枯對(duì)萼花臂尾輪蟲(chóng)的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果
        2.2.2 百草枯對(duì)卜氏晶囊輪蟲(chóng)的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果
        2.2.3 胡桃醌對(duì)萼花臂尾輪蟲(chóng)的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果
        2.2.4 胡桃醌對(duì)卜氏晶囊輪蟲(chóng)的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果
    2.3 討論
第3章 百草枯、胡桃醌對(duì)萼花臂尾輪蟲(chóng)和卜氏晶囊輪蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育各階段歷時(shí)的影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 輪蟲(chóng)的采集與培養(yǎng)
        3.1.2 主要試驗(yàn)儀器
        3.1.3 試驗(yàn)藥品的配置
        3.1.4 單“克隆”培養(yǎng)試驗(yàn)
        3.1.5 試驗(yàn)各終點(diǎn)的計(jì)算方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 百草枯和胡桃醌對(duì)萼花臂尾輪蟲(chóng)和卜氏晶囊輪蟲(chóng)壽命和繁殖的影響
        3.2.2 百草枯對(duì)萼花臂尾輪蟲(chóng)生命周期各主要發(fā)育階段歷時(shí)的影響
        3.2.3 百草枯對(duì)卜氏晶囊輪蟲(chóng)生命周期各主要發(fā)育階段歷時(shí)的影響
        3.2.4 胡桃醌對(duì)萼花臂尾輪蟲(chóng)生命周期各主要發(fā)育階段歷時(shí)的影響
        3.2.5 胡桃醌對(duì)卜氏晶囊輪蟲(chóng)生命周期各主要發(fā)育階段歷時(shí)的影響
    3.3 討論
第4章 卜氏晶囊輪蟲(chóng)hsp70基因克隆和功能分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 主要試驗(yàn)儀器
        4.1.2 輪蟲(chóng)總RNA的提取(Trizol法)
        4.1.3 RNA質(zhì)量測(cè)定
        4.1.4 RNA逆轉(zhuǎn)錄
        4.1.5 目的基因兼并引物設(shè)計(jì)
        4.1.6 目的基因PCR擴(kuò)增
        4.1.7 目的基因PCR產(chǎn)物的割膠回收
        4.1.8 連接PMDTM-19T載體
        4.1.9 菌液PCR驗(yàn)證
        4.1.10 測(cè)序比對(duì)
        4.1.11 cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)(RACE)擴(kuò)增基因全長(zhǎng)
        4.1.12 目的基因生物信息學(xué)分析
        4.1.13 構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 Asphsp70核苷酸序列分析
        4.2.2 HSP70多重序列比對(duì)
        4.2.3 Asphsp70系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)
    4.3 討論
第5章 百草枯、胡桃醌對(duì)萼花臂尾輪蟲(chóng)和卜氏晶囊輪蟲(chóng)hsp70表達(dá)的影響研究
    5.1 材料與方法
        5.1.1 主要試驗(yàn)儀器
        5.1.2 熒光定量PCR
        5.1.3 數(shù)據(jù)分析
    5.2 結(jié)果與分析
    5.3 討論
小結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果
致謝



本文編號(hào)：3830659