針對(duì)水環(huán)境中重金屬生物毒性的檢測(cè)需求,本論文研究開發(fā)了基于重組發(fā)光細(xì)菌的重金屬毒性自動(dòng)在線檢測(cè)技術(shù)。重組發(fā)光細(xì)菌能夠?qū)⒖缮锢弥亟饘俳M分的濃度信息轉(zhuǎn)化成易于檢測(cè)且能夠量化的生物熒光指標(biāo),從而能夠用于檢測(cè)重金屬污染的生物毒性風(fēng)險(xiǎn)。本研究自主構(gòu)建了5株具有不同重金屬響應(yīng)特性的重組發(fā)光細(xì)菌。通過PCR擴(kuò)增方法,從Klebsiella pneumoniae、Pseudomonas putida SP1、Pseudomonas sp.ND6、Rahnella aquatilis HX2和Klebsiella oxytoca M5al中,將cad、mer、pbr、cue、和cop基因中的重金屬功能識(shí)別基因提取出來,插入含有l(wèi)ux CDABE發(fā)光基因的p UCD615質(zhì)粒中,以使發(fā)光基因的表達(dá)受到功能識(shí)別基因調(diào)控,然后將重組的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到E.Coli DH5α感受態(tài)細(xì)胞,從而得到對(duì)汞、鎘、鉛、銅、銀5種重金屬具有響應(yīng)特性的重組發(fā)光細(xì)菌p THE14-E.Coli、p THE30-E.Coli、p THE57-E.Coli、p THE10-E.Coli和p THE11-E.Coli。研究中建立了重組發(fā)...

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 重金屬污染及檢測(cè)
        1.1.1 重金屬污染
        1.1.2 重金屬污染檢測(cè)技術(shù)
    1.2 重組發(fā)光細(xì)菌技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀
        1.2.1 重組發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)原理
        1.2.2 重組發(fā)光細(xì)菌的研究現(xiàn)狀
    1.3 重組發(fā)光細(xì)菌在環(huán)境領(lǐng)域中應(yīng)用研究進(jìn)展
    1.4 研究目的和研究?jī)?nèi)容
        1.3.1 研究目的
        1.3.2 研究?jī)?nèi)容
    1.5 技術(shù)路線圖
第2章 重金屬響應(yīng)的重組發(fā)光細(xì)菌的構(gòu)建
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 試驗(yàn)方法
    2.3 p THE14-E. coli JM109重組發(fā)光細(xì)菌的構(gòu)建方法
        2.3.1 試驗(yàn)方法
        2.3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
    2.4 其他重組發(fā)光細(xì)菌的構(gòu)建
        2.4.1 試驗(yàn)方法
        2.4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
    2.5 本章小結(jié)
第3章 重組發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)條件優(yōu)化及重金屬響應(yīng)特性研究
    3.1 前言
    3.2 重組發(fā)光細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線及重金屬響應(yīng)特性研究
        3.2.1 重組發(fā)光細(xì)菌的基本生長(zhǎng)特性
        3.2.2 單位菌對(duì)重金屬檢測(cè)靈敏程度分析
    3.3 其他檢測(cè)條件的優(yōu)化研究
        3.2.1 測(cè)試溫度的影響
        3.2.2 重組發(fā)光細(xì)菌的冷凍干燥保存方法研究
    3.4 重組發(fā)光細(xì)菌的重金屬響應(yīng)特性
        3.4.1 p THE14-E. coli的重金屬響應(yīng)特性
        3.4.2 p THE30-E. coli的重金屬響應(yīng)特性
        3.4.3 p THE57-E. coli的重金屬響應(yīng)特性
        3.4.4 p THE10-E. coli的重金屬響應(yīng)特性
        3.4.5 p THE11-E. coli的重金屬響應(yīng)特性
    3.5 重組發(fā)光細(xì)菌在環(huán)境水樣檢測(cè)中的應(yīng)用
        3.5.1 重組發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)中的假陰性問題
        3.5.2 采用內(nèi)標(biāo)檢測(cè)法避免實(shí)際水樣測(cè)試中的假陰性問題
    3.6 本章小結(jié)
第4章 基于重組發(fā)光細(xì)菌重金屬毒性自動(dòng)在線監(jiān)測(cè)儀研究
    4.1 前言
    4.2 重金屬生物毒性自動(dòng)在線監(jiān)測(cè)儀的搭建
        4.2.1 重金屬生物毒性自動(dòng)在線監(jiān)測(cè)儀系統(tǒng)結(jié)構(gòu)
        4.2.2 系統(tǒng)運(yùn)行及控制軟件
    4.3 儀器運(yùn)行與反應(yīng)條件優(yōu)化研究
        4.3.1 運(yùn)行條件
        4.3.2 菌液復(fù)蘇池中菌液混合對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響
        4.3.3 連續(xù)測(cè)定中的交叉污染問題
        4.3.4 儀器連續(xù)運(yùn)行期間重組發(fā)光細(xì)菌活性的變化
    4.4 環(huán)境水樣連續(xù)檢測(cè)分析
    4.5 本章小結(jié)
第5章 二維生物毒性自動(dòng)在線監(jiān)測(cè)儀的研制
    5.1 前言
    5.2 二維生物毒性自動(dòng)在線監(jiān)測(cè)儀的設(shè)計(jì)
        5.2.1 二維生物毒性自動(dòng)在線監(jiān)測(cè)儀的結(jié)構(gòu)
        5.2.2 二維生物毒性自動(dòng)在線監(jiān)測(cè)儀的檢測(cè)流程
        5.2.3 儀器運(yùn)行工作流程
        5.2.4 二維生物毒性自動(dòng)在線監(jiān)測(cè)儀的毒性計(jì)算方法
    5.3 儀器運(yùn)行及數(shù)據(jù)分析
        5.3.1 運(yùn)行條件
        5.3.2 水樣測(cè)試結(jié)果與分析
    5.4 本章小結(jié)
第6章 結(jié)論和建議
    6.1 結(jié)論
    6.2 建議
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果



本文編號(hào)：3759726