發(fā)布時間：2023-03-11 14:55

　　針對水環(huán)境中重金屬生物毒性的檢測需求,本論文研究開發(fā)了基于重組發(fā)光細菌的重金屬毒性自動在線檢測技術(shù)。重組發(fā)光細菌能夠?qū)⒖缮锢弥亟饘俳M分的濃度信息轉(zhuǎn)化成易于檢測且能夠量化的生物熒光指標(biāo),從而能夠用于檢測重金屬污染的生物毒性風(fēng)險。本研究自主構(gòu)建了5株具有不同重金屬響應(yīng)特性的重組發(fā)光細菌。通過PCR擴增方法,從Klebsiella pneumoniae、Pseudomonas putida SP1、Pseudomonas sp.ND6、Rahnella aquatilis HX2和Klebsiella oxytoca M5al中,將cad、mer、pbr、cue、和cop基因中的重金屬功能識別基因提取出來,插入含有l(wèi)ux CDABE發(fā)光基因的p UCD615質(zhì)粒中,以使發(fā)光基因的表達受到功能識別基因調(diào)控,然后將重組的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到E.Coli DH5α感受態(tài)細胞,從而得到對汞、鎘、鉛、銅、銀5種重金屬具有響應(yīng)特性的重組發(fā)光細菌p THE14-E.Coli、p THE30-E.Coli、p THE57-E.Coli、p THE10-E.Coli和p THE11-E.Coli。研究中建立了重組發(fā)...

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 重金屬污染及檢測
        1.1.1 重金屬污染
        1.1.2 重金屬污染檢測技術(shù)
    1.2 重組發(fā)光細菌技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀
        1.2.1 重組發(fā)光細菌檢測原理
        1.2.2 重組發(fā)光細菌的研究現(xiàn)狀
    1.3 重組發(fā)光細菌在環(huán)境領(lǐng)域中應(yīng)用研究進展
    1.4 研究目的和研究內(nèi)容
        1.3.1 研究目的
        1.3.2 研究內(nèi)容
    1.5 技術(shù)路線圖
第2章 重金屬響應(yīng)的重組發(fā)光細菌的構(gòu)建
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 試驗方法
    2.3 p THE14-E. coli JM109重組發(fā)光細菌的構(gòu)建方法
        2.3.1 試驗方法
        2.3.2 實驗結(jié)果與討論
    2.4 其他重組發(fā)光細菌的構(gòu)建
        2.4.1 試驗方法
        2.4.2 實驗結(jié)果與討論
    2.5 本章小結(jié)
第3章 重組發(fā)光細菌檢測條件優(yōu)化及重金屬響應(yīng)特性研究
    3.1 前言
    3.2 重組發(fā)光細菌的生長曲線及重金屬響應(yīng)特性研究
        3.2.1 重組發(fā)光細菌的基本生長特性
        3.2.2 單位菌對重金屬檢測靈敏程度分析
    3.3 其他檢測條件的優(yōu)化研究
        3.2.1 測試溫度的影響
        3.2.2 重組發(fā)光細菌的冷凍干燥保存方法研究
    3.4 重組發(fā)光細菌的重金屬響應(yīng)特性
        3.4.1 p THE14-E. coli的重金屬響應(yīng)特性
        3.4.2 p THE30-E. coli的重金屬響應(yīng)特性
        3.4.3 p THE57-E. coli的重金屬響應(yīng)特性
        3.4.4 p THE10-E. coli的重金屬響應(yīng)特性
        3.4.5 p THE11-E. coli的重金屬響應(yīng)特性
    3.5 重組發(fā)光細菌在環(huán)境水樣檢測中的應(yīng)用
        3.5.1 重組發(fā)光細菌檢測中的假陰性問題
        3.5.2 采用內(nèi)標(biāo)檢測法避免實際水樣測試中的假陰性問題
    3.6 本章小結(jié)
第4章 基于重組發(fā)光細菌重金屬毒性自動在線監(jiān)測儀研究
    4.1 前言
    4.2 重金屬生物毒性自動在線監(jiān)測儀的搭建
        4.2.1 重金屬生物毒性自動在線監(jiān)測儀系統(tǒng)結(jié)構(gòu)
        4.2.2 系統(tǒng)運行及控制軟件
    4.3 儀器運行與反應(yīng)條件優(yōu)化研究
        4.3.1 運行條件
        4.3.2 菌液復(fù)蘇池中菌液混合對檢測結(jié)果的影響
        4.3.3 連續(xù)測定中的交叉污染問題
        4.3.4 儀器連續(xù)運行期間重組發(fā)光細菌活性的變化
    4.4 環(huán)境水樣連續(xù)檢測分析
    4.5 本章小結(jié)
第5章 二維生物毒性自動在線監(jiān)測儀的研制
    5.1 前言
    5.2 二維生物毒性自動在線監(jiān)測儀的設(shè)計
        5.2.1 二維生物毒性自動在線監(jiān)測儀的結(jié)構(gòu)
        5.2.2 二維生物毒性自動在線監(jiān)測儀的檢測流程
        5.2.3 儀器運行工作流程
        5.2.4 二維生物毒性自動在線監(jiān)測儀的毒性計算方法
    5.3 儀器運行及數(shù)據(jù)分析
        5.3.1 運行條件
        5.3.2 水樣測試結(jié)果與分析
    5.4 本章小結(jié)
第6章 結(jié)論和建議
    6.1 結(jié)論
    6.2 建議
參考文獻
致謝
個人簡歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果



本文編號：3759726