本文關(guān)鍵詞：土霉素降解菌的篩選、鑒定及其在污染土壤中的修復(fù)模擬，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：土霉素是畜禽養(yǎng)殖業(yè)中使用最廣泛的一種廣譜抗生素之一。由于價(jià)格低廉被大量用于畜禽飼料中預(yù)防疾病或促生長(zhǎng)劑,導(dǎo)致其在環(huán)境中大量的殘留,引起耐藥菌及抗性基因的產(chǎn)生,對(duì)人類的健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。目前生物降解因其具有成本低廉、降解徹底等優(yōu)點(diǎn),成為了國(guó)內(nèi)外研究去除抗生素殘留的熱點(diǎn)之一。為去除土霉素在環(huán)境中的殘留,本論文采用富集篩選法從長(zhǎng)期受土霉素污染的土壤中獲得土霉素降解菌,通過(guò)形態(tài)觀察以及ITS測(cè)序?qū)到庑Ч詈玫木赀M(jìn)行鑒定,并對(duì)降解菌在培養(yǎng)基中的降解特性及其在人工污染土壤中的降解行為進(jìn)行研究,得到的結(jié)果如下:(1)通過(guò)富集馴化法篩選到9株能夠以土霉素為唯一碳源生長(zhǎng)的菌株。在流動(dòng)相為草酸(0.01 mol·L-1)-乙腈-甲醇(76:16:8,V/V/V),土霉素回收率范圍為78.07%~94.63%以及平均變異系數(shù)范圍為2.48%~6.67%的條件下,采用高效液相色譜法對(duì)菌株進(jìn)行土霉素降解能力的檢測(cè),表明菌株Y-1、菌株Y-3和菌株Y-7對(duì)土霉素有明顯的降解效果,降解率分別為7.79%、10.42%和31.86%,其中降解土霉素效果最好的是菌株Y-7。根據(jù)菌株Y-7在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況和鏡檢孢子情況,初步鑒定該菌為真菌。利用PCR擴(kuò)增病原菌核糖體ITS基因區(qū),測(cè)序獲得一段長(zhǎng)度為522bp的ITS序列,通過(guò)BLAST序列比對(duì),確定菌株Y-7為曲霉屬(Aspergillus sp.)真菌,同源性達(dá)到100%。(2)菌株Y-7在液體培養(yǎng)基中降解土霉素的最佳培養(yǎng)條件是:溫度40℃,pH值為6,培養(yǎng)時(shí)間7d,裝液量2%,底物濃度200 mg·L-1。土霉素降解菌Y-7表現(xiàn)了較高的耐溫性,且pH值范圍在中性的條件下對(duì)土霉素的降解效果較好。其中,隨著溫度的升高和底物濃度的增大,土霉素在菌株Y-7的作用下降解速率均加快,而菌株Y-7對(duì)土霉素的降解率隨著pH值增大、培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)及接種量增加均表現(xiàn)出先增大后降低的趨勢(shì)。(3)利用HLB固相萃取小柱提取土壤中土霉素,測(cè)得的回收率范圍為63.16%~80.20%,變異系數(shù)范圍為2.01%~9.53%(15%),因此該方法對(duì)土壤中土霉素的提取有一定的準(zhǔn)確性。在土霉素初始濃度為50 mg·kg-1的土壤中,接種菌株Y-7的土霉素含量較不接菌的空白對(duì)照明顯降低,降解率達(dá)30.63%,表明降解菌Y-7在土壤中對(duì)土霉素有一定的降解效果。
【關(guān)鍵詞】：土霉素 真菌 降解特性 土壤修復(fù)模擬
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：X172;X53
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-11
• 第一章 文獻(xiàn)綜述11-21
• 1.1 研究背景11-12
• 1.2 研究目的和意義12
• 1.3 國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展12-21
• 1.3.1 抗生素的使用現(xiàn)狀12-13
• 1.3.2 土霉素的殘留現(xiàn)狀13-14
• 1.3.3 土霉素的危害14-16
• 1.3.3.1 土霉素對(duì)植物的影響14-15
• 1.3.3.2 土霉素對(duì)生物的影響15
• 1.3.3.3 耐藥菌的產(chǎn)生和傳播15-16
• 1.3.4 土霉素在環(huán)境中的降解16-17
• 1.3.4.1 非生物降解16-17
• 1.3.4.2 生物降解17
• 1.3.5 生物降解的研究進(jìn)展17-21
• 1.3.5.1 堆肥17-18
• 1.3.5.2 體外酶的降解18-19
• 1.3.5.3 降解菌的篩選19-21
• 第二章 研究方法21-23
• 2.1 試驗(yàn)材料21-22
• 2.1.1 土壤來(lái)源21
• 2.1.2 主要儀器及試劑21-22
• 2.1.3 土霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液22
• 2.1.4 主要培養(yǎng)基22
• 2.2 試驗(yàn)方法22-23
• 第三章 土霉素降解菌的篩選及鑒定23-32
• 3.1 土霉素降解菌的篩選步驟23-24
• 3.1.1 富集培養(yǎng)23
• 3.1.2 分離純化23
• 3.1.3 馴化23-24
• 3.2 菌株的鑒定24-25
• 3.2.1 菌株的電鏡觀察24
• 3.2.2 菌株的分子生物學(xué)鑒定24-25
• 3.3 土霉素的檢測(cè)25
• 3.3.1 土霉素回收率的測(cè)定25
• 3.3.2 土霉素降解率的測(cè)定25
• 3.4 結(jié)果與分析25-30
• 3.4.1 菌株的篩選結(jié)果25-27
• 3.4.2 菌株Y-7 的形態(tài)特征27
• 3.4.3 菌株Y-7 的遺傳學(xué)分析27-28
• 3.4.4 高效液相色譜檢測(cè)結(jié)果28-29
• 3.4.5 土霉素的回收率29-30
• 3.5 討論30-32
• 3.5.1 土霉素降解菌的篩選及鑒定30-31
• 3.5.2 土霉素的高效液相色譜測(cè)定31-32
• 第四章 土霉素降解菌的降解特性研究32-37
• 4.1 試驗(yàn)材料32
• 4.1.1 供試菌株32
• 4.1.2 接種液的制備32
• 4.2 試驗(yàn)內(nèi)容32-33
• 4.3 結(jié)果與分析33-35
• 4.3.1 溫度對(duì)菌株Y-7 降解土霉素的影響33
• 4.3.2 pH對(duì)菌株Y-7 降解土霉素的影響33-34
• 4.3.3 時(shí)間對(duì)菌株Y-7 降解土霉素的影響34
• 4.3.4 接種量對(duì)菌株Y-7 降解土霉素的影響34-35
• 4.3.5 底物濃度對(duì)菌株Y-7 降解土霉素的影響35
• 4.4 討論35-37
• 第五章 土霉素降解菌在污染土壤中的修復(fù)模擬37-41
• 5.1 試驗(yàn)材料37
• 5.1.1 供試土壤37
• 5.1.2 提取液37
• 5.1.3 洗脫液37
• 5.2 試驗(yàn)內(nèi)容37-38
• 5.2.1 土壤中土霉素的提取37-38
• 5.2.2 土培試驗(yàn)38
• 5.3 結(jié)果與分析38-39
• 5.3.1 土霉素回收率的測(cè)定38
• 5.3.2 土壤中土霉素的降解38-39
• 5.4 討論39-41
• 第六章 結(jié)論與展望41-43
• 6.1 結(jié)論41
• 6.2 展望41-43
• 參考文獻(xiàn)43-50
• 致謝50-51
• 作者簡(jiǎn)介51

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