發(fā)布時間：2020-04-05 12:18

【摘要】： 諾如病毒污染和抗生素殘留超標是海產(chǎn)食品中兩大新的安全問題。(1)諾如病毒(norovirus，NV)是世界范圍內(nèi)的急性病毒性胃腸炎的主要病因，海產(chǎn)環(huán)境中的水和貝類是其主要傳播載體。由于環(huán)境中病毒含量很低，因此迫切需要建立一種靈敏的標準化檢測方法。(2)抗生素殘留超標源自為了控制由水質(zhì)惡化導(dǎo)致的疾病而過量使用抗生素，生物修復(fù)是解決這一問題的關(guān)鍵。本論文針對這些問題進行了持續(xù)研究，，取得了良好進展。 1、研究了從水體中濃縮病毒的鈣離子絮凝法。首先利用CaCl_2和Na_2HPO_4絮凝病毒，然后用檸檬酸緩沖液洗溶，之后進行RT-PCR。該方法可檢出1個RT-PCRU的NV，其靈敏度較傳統(tǒng)的吸附-洗脫-濃縮三步法要高至少5倍， 2、建立了一項貝類中諾如病毒(norovirus，NV)檢測的標準化方法SN／T1635-2005。該方法是用GPTT程序提取病毒和純化病毒RNA，用引物JV12／JV13進行普通RT-PCR，用COG1F，COG1R，RING1(a)-TP，RING1(b)-TP和COG2F，COG2R，RING2-TP分別檢測GⅠ和GⅡ型NV。 3、海產(chǎn)諾如病毒污染調(diào)查結(jié)果表明，在采集的海水樣品中檢出了NV(陽性率1／15)，同時還在貝類(文蛤)樣品中也檢出了NV(陽性率1／20)，說明海水污染與貝類污染之間有一定的聯(lián)系，人類糞便排放不當會造成貝類中NV污染。 4、研制了一種生物修復(fù)菌的富集新方法，即直接向海水樣品中添加1g／LNaHCO_3和3g／L CH_3COONa的方法，分離得到了一株高效生物修復(fù)菌-光合細菌W1。該菌經(jīng)形態(tài)學(xué)和生理特性研究，被鑒定為沼澤紅假單胞菌(Rhodopuesdomonas pulstris)。 5、采用正交法試驗優(yōu)化得到了光合細菌的計數(shù)培養(yǎng)基—R培養(yǎng)基，在此基礎(chǔ)上建立了一種光合細菌活菌計數(shù)方法—半固體試管法。用此法檢測W1菌的培養(yǎng)物，發(fā)現(xiàn)其活菌密度為2.8×10~9cfu／mL。 6、W1菌的生物修復(fù)作用是通過其活菌體來實現(xiàn)的。通過菌體合成和脫氮作用，W1促進了養(yǎng)殖環(huán)境中碳、氮的良性循環(huán)。W1對其它微生物如普通需氧菌、弧菌、噬菌體等沒有抑制作用。微生物抑制法試驗也證實了W1不產(chǎn)生抗生物質(zhì)。通過對蝦池水質(zhì)凈化試驗對W1的生物修復(fù)作用進行研究，發(fā)現(xiàn)施用W1后，實驗期間氨氮全程在0.6 mg幾以下，CODcr降低了29％，DO增加了27％，pH值穩(wěn)定在7.7-7.8之間，水質(zhì)得到了較好的改善，對蝦的收獲量也增加了6.25％。固定化W1菌劑對文蛤養(yǎng)殖場水質(zhì)有較好的調(diào)控作用，并能促進文蛤的生長。 對諾如病毒造成的急性胃腸炎目前尚無特效藥治療，而抗生素在海產(chǎn)養(yǎng)殖中的泛濫使用帶來了嚴重的食品安全問題。本項研究通過建立快速、簡便、靈敏的檢測方法和標準，可用于快速檢測海產(chǎn)食品的污染狀況，對于阻斷病毒傳播和預(yù)防及控制由諾如病毒引起的急性胃腸炎暴發(fā)具有十分重要的意義，并對其它食源性病毒的檢測與控制也有較大的參考價值。另外，通過揭示W(wǎng)1菌生物修復(fù)作用的機理，建立起可用于海水養(yǎng)殖的生物修復(fù)方法，為解決海產(chǎn)食品抗生素殘留超標的問題提供了可行的途徑，對于保障食品安全和促進海產(chǎn)養(yǎng)殖的可持續(xù)發(fā)展有重要作用。
【圖文】：

的RT一PCR檢測結(jié)果添加回收的直接檢測法;4一6:鈣離子絮凝法;7一9:濾膜法記.1，4，7:100匹l:1000Pv，;2，5，8:50匹l:1000Pv，:3，6，9Fig.1.RT-pCRanalysisresultsofpoliovirus

貝類中諾如病毒檢測方法研究引物 JV12/JV13、MR4a/MRgb在NVI一NV4樣品中均出現(xiàn)擴增(圖3、圖4)，而在SV樣品中未出現(xiàn)擴增。但引物MR4a/MRgb在NVI樣品中有時出現(xiàn)非特異擴增。結(jié)果表明 JV12/JV13特異性強和靈敏度高。因此將引物JV12/JV13用于Gll型病毒的檢測引物比較理想。州 1234SB327bP圖3引物JV12/尹13檢測NV和Sv的電泳結(jié)果 M:DNAmarker;1:樣品NVI;2:樣品NVZ;3:樣品NV3;4:樣品5:樣品SV;6:空白對照 Fig.3AgarosegeleleetroPhoresisresultsofNVandSVdeteetion withPrimerJV12/尹13 M:DNAmaker;l:SampleNVI:2:SampleNVZ:3:SampleNV3:4:SampleNV4:5: SamPleSV:6:Negativeeontrol328bP圖4引物MR4a/MRgb檢測檢測NV和SV的電泳結(jié)果 M:DNAmarker;1:樣品NVI;2:樣品NVZ;3:樣品NV3;4:樣品6:空白對照 F19.4AgarosegeleleetroPhoresisresultsofNVandSVdetectionNV4;
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)院研究生院（武漢病毒研究所）
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：X55;TS254.7

【引證文獻】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 王欣梅;大腸桿菌f2噬菌體分子印跡膜的制備、評價和應(yīng)用[D];華中科技大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 梁莎;環(huán)境水體中腸道病毒（Enterovirus）的濃縮與檢測[D];南華大學(xué);2011年

本文編號：2615007