發(fā)布時間：2021-08-01 11:57

　　本文基于核酸外切酶循環(huán)放大技術(shù)，實現(xiàn)了對血小板衍生因子（PDGF）和DNA等腫瘤標志物高靈敏、高選擇性檢測檢測，并建立分子邏輯門體系。主要開展了以下兩方面的工作：一、核酸外切酶級聯(lián)循環(huán)放大技術(shù)檢測血小板衍生因子本文建立了一種核酸外切酶級聯(lián)循環(huán)放大技術(shù)，基于血小板衍生因子（PDGF-BB）與其適體的特異性識別作用，實現(xiàn)了對PDGF-BB的化學發(fā)光免標記高靈敏檢測。該體系由雙鏈DNA（核酸適體-受體）、兩種發(fā)卡結(jié)構(gòu)DNA分子，以及核酸外切酶組成。通過核酸適體與PDGF-BB的特異性識別并結(jié)合，運用ExoIII對雙鏈結(jié)構(gòu)的特異性剪切，實現(xiàn)核酸外切酶級聯(lián)循環(huán)放大。反應(yīng)后釋放出大量的DNA酶，其與hemin結(jié)合形成辣根過氧化物DNA模擬酶（DNAzyme），采用luminol-H2O2化學發(fā)光反應(yīng)體系檢測，對PDGF-BB的檢測限可達6.8×10-13M。本方法設(shè)計簡單，實驗條件溫和且為均相反應(yīng)，免標記成本低，效率高。對于具有適體序列的生物分子具有廣泛適用性。二、核酸外切酶循環(huán)放大技術(shù)檢測DNA及其在分子邏輯門體系中的應(yīng)用研究基于核酸外切酶循環(huán)放大技術(shù)實現(xiàn)了對DNA的高靈敏檢測，并用于分子邏輯門... 

【文章來源】：青島科技大學山東省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Exo-CARA法（循環(huán)IIIIIIII）免標記化學發(fā)光檢測PDGF-BB的原理圖

進而激活Recycle II。即， locker DNA與MB1的3'端互Exo III識別雙鏈結(jié)構(gòu)，進而發(fā)生剪切作用。當剪切完兩條鏈，其中一條鏈就是blocker DNA，其繼續(xù)與MNA的循環(huán)，稱這個循環(huán)過程稱為Recycle II，blocker這個循環(huán)中釋放的另一條鏈命名它為鏈A，其作為，當鏈A與MB2的3'端互補結(jié)合，進而發(fā)生ExoIII的剪先前的結(jié)構(gòu)分裂成兩條鏈，其中一條鏈就是鏈A，其，稱這個循環(huán)為Recycle III。這個循環(huán)中釋放的另一blocker DNA序列，從而引發(fā)Recycle II。如此，三個B不斷的積累。當反應(yīng)完畢后，鏈A和鏈B中的DNAz合，形成HRP模擬酶，采用Luminol-H2O2化學發(fā)光體發(fā)光信號。量對實驗體系影響的研究

后分別檢測各用量下的化學發(fā)光強度，以此確定Exo如圖2-2所示，在Exo III的用量在0~100U之間變化，度隨著Exo III用量的增加而增加，當酶用量大于50U著酶用量而增加。因此，選擇50 U作為最佳Exo III用時間對實驗體系影響的研究時間是影響Luminol-H2O2-DNAzyme化學發(fā)光體系的Exo III反應(yīng)時間為 10 min，20 min，30 min，45 m別檢測不同時間下的化學發(fā)光強度，以此來確定Ex影響。如圖2-3所示，體系的反應(yīng)時間在0~90 min之時，化學發(fā)光強度隨著時間的增強而增強，而當時間強度的變化就很不明顯，因此，選擇30 min作為體系

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：3315483