發(fā)布時間：2017-09-23 10:35

  本文關(guān)鍵詞：4個MiniSTR位點的遺傳學(xué)調(diào)查

  更多相關(guān)文章： MiniSTR 法醫(yī)物證 STR 復(fù)合擴(kuò)增

【摘要】：目的：DNA的短串聯(lián)重復(fù)序列（STR），由于其高度的遺傳多態(tài)性和方法的簡便性，在法醫(yī)學(xué)方面成為主流的研究技術(shù)，特別是親權(quán)鑒定和個人識別方面。正因為STR的廣泛應(yīng)用也暴露出缺陷，其中之一便是在微量物證及腐敗檢材方面的局限性。因為目前的CODIS系統(tǒng)中STR片段均大于200bp，在DNA含量很少的檢材內(nèi)很難有如此完整的大片段以供擴(kuò)增，所以減小目標(biāo)片段的大小，而又不影響其核心序列的擴(kuò)增，理論上便能增加微量物證的DNA擴(kuò)增效率，這就是設(shè)計MiniSTR位點的意義。MiniSTR即在STR擴(kuò)增時將引物的設(shè)計更靠近核心重復(fù)序列的側(cè)翼序列，使整個擴(kuò)增產(chǎn)物的大小僅在150kb左右，這樣就會降低DNA提取的難度，提高DNA的檢出率。因為其核心序列并未改變，所以MiniSTR位點依舊保持了STR片段的遺傳多態(tài)性，具有STR的全部優(yōu)點。在2001年911事故時，已有將MiniSTR位點引用于個人識別，突出了其小片段的優(yōu)勢。而MiniSTR基因座已被歐洲D(zhuǎn)NA分型工作組（EDNAP）定義為新一代的遺傳標(biāo)記物。而在06年，美國AB公司推出了商業(yè)的MiniSTR試劑盒minifiler，其中包括了性別基因在內(nèi)的9個CODIS系統(tǒng)內(nèi)位點，但因為CODIS系統(tǒng)位點有限，而且大部分不適宜重新設(shè)計引物，所以開發(fā)CODIS系統(tǒng)外的位點成為研究的重點。我國也有了CODIS系統(tǒng)外位點的相關(guān)研究，而在河北，湖南等地的研究表明地區(qū)差別明顯，所以不同地區(qū)的非CODIS系統(tǒng)調(diào)查有必要性，目前尚缺乏重慶地區(qū)的相關(guān)研究。為了給國產(chǎn)試劑盒的研究提供基礎(chǔ)，對D1S1627，D2S441，D10S1248，D22S1045的4個MiniSTR基因座進(jìn)行3色熒光標(biāo)記，并制作相應(yīng)的等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物，進(jìn)行本地區(qū)的遺傳學(xué)的相關(guān)調(diào)查。 方法：采用chelex100的方法提取170份重慶地區(qū)無關(guān)的健康個體全基因組DNA，將PCR的擴(kuò)增體系為10μL，將反應(yīng)體系中的引物濃度、Mg2+濃度，循環(huán)數(shù)，退火溫度，dNTP，DNA TAq酶都進(jìn)行優(yōu)化找出最適合的反應(yīng)條件，然后再用聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）分離擴(kuò)增產(chǎn)物后銀染，選擇適合的等位基因后將凝膠內(nèi)的DNA回收，將回收物純化后再次擴(kuò)增，進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳檢驗和測序，按照國際法庭血液遺傳學(xué)會（ISFH）推薦的命名方式將其命名，將通過調(diào)整其濃度使電泳圖上得峰高達(dá)到一致。將實驗室自制的等位基因標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行樣本的遺傳學(xué)研究。然后用TAMRA、6-FAM、HEX分別標(biāo)記引物D10S1248，D2S441和D1S1627, D22S1045的上游引物的5’端。將自制的等位基因標(biāo)準(zhǔn)物和引物一起在ABI公司的3130測序儀上面電泳，進(jìn)行基因分型分析。 結(jié)果：復(fù)合擴(kuò)增結(jié)果，10μL的復(fù)合擴(kuò)增：10×PCR緩沖液：1μl，1mmol／L；MgCl2：0.6μl，25mmol／L；dNTP：1μl，2.5mmol／L；D2S441，D1S1627上、下游引物各0．20μl，10μmol／L； D10S1248，D22S1045上、下游引物各0．30μl，10μmol／L，Taq DNA聚合酶0.15μl,L (5U／μl)，模板DNA1μl(1ng／μL)，滅菌雙蒸水2.55μl。PCR擴(kuò)增參數(shù)：熱循環(huán)參數(shù)為95℃：預(yù)變性3M，變性94℃:30S，退火59℃:30S，延伸72℃:60S，32個循環(huán)，72℃:15M。4個基因座分別檢出6,9,9,9個等位基因和107種基因型,其基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。其中D1S1627，D2S441，D10S1248，D22S1045基因座在重慶漢族群體的雜合度分別依次為0.816，0.764，0.741，0.70;多態(tài)信息含量分別依次為：0.816，0.764，0.741，0.70;累計非父排除率為0.9999802,累計個人識別機(jī)率為0.950167。 結(jié)論：制作的等位基因標(biāo)準(zhǔn)物可以用于作為MiniSTR基因座的分型，也可以用于法醫(yī)學(xué)的個人識別和親權(quán)鑒定的應(yīng)用，完善了非CODIS系統(tǒng)MiniSTR基因座的基因頻率的調(diào)查，為MiniSTR基因座商業(yè)化的試劑盒奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：MiniSTR 法醫(yī)物證 STR 復(fù)合擴(kuò)增
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：D919.2
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-16
• 1 材料與方法16-22
• 2 結(jié)果22-27
• 3 討論27-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-34
• 附錄34-35
• 文獻(xiàn)綜述35-50
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 致謝50-51

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 常云峰;蔡繼峰;楊立;文繼舫;;2個STR基因座變異親子鑒定1例[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2011年03期

2 歐雪玲;孫宏鈺;陸惠玲;張敏紅;吳鴻彬;;有父系血緣關(guān)系但排除同父異母半同胞鑒定1例[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2011年03期

3 齊漫龍;張媛媛;劉曉亮;何蓉;趙彥艷;;QF-PCR在染色體異常男性不育癥診斷中的應(yīng)用[J];遺傳;2011年08期

4 徐偉;;指甲擦拭物Y-STR檢驗在女性被殺案件中的應(yīng)用[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2011年04期

5 李素霞;朱宏麗;郭搏;達(dá)萬明;;熒光標(biāo)記短串聯(lián)重復(fù)序列復(fù)合擴(kuò)增監(jiān)測嵌合體的應(yīng)用研究[J];中國實驗血液學(xué)雜志;2011年03期

6 圖爾遜;張麗萍;古麗娜;陳慧錦;;新疆阿克蘇地區(qū)維吾爾族人群4個STR基因座的多態(tài)性[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2011年03期

7 張紅巖;萬加華;高自華;戚其瑋;趙晶;徐俐;王雪倩;;青島地區(qū)漢族群體15個STR基因座的遺傳多態(tài)性研究[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2011年07期

8 孫紅兵;楊鑫;張子龍;胡衛(wèi)星;盛清平;馬宏;楊佳;;蘭州地區(qū)漢族人群15個STR基因座多態(tài)性[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2011年03期

9 黃玉靜;王健康;陳燕祥;李景;李貌;何瑋;曾發(fā)明;程寶文;;云南白族群體Y-STR及Y-SNP關(guān)聯(lián)性探討[J];中國法醫(yī)學(xué)雜志;2011年04期

10 張建;姜成濤;趙興春;白雪;趙蕾;姜伯瑋;葉健;;DNATyper~(TM) 15試劑盒直接擴(kuò)增檢驗紙質(zhì)樣本的研究[J];刑事技術(shù);2011年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張丹妍;張丹媚;萬玲;呂靜;陳曉星;趙樂天;李練兵;;親子鑒定中Identifiler~(TM)系統(tǒng)15個STR基因座基因突變分析[A];經(jīng)濟(jì)發(fā)展方式轉(zhuǎn)變與自主創(chuàng)新——第十二屆中國科學(xué)技術(shù)協(xié)會年會（第三卷）[C];2010年

2 丁浩強(qiáng);葉欣;徐秀章;陳揚(yáng)凱;;廣東漢族人群2號染色體上2個STR位點的遺傳多態(tài)性分析[A];中國輸血協(xié)會第五屆輸血大會論文專集（摘要篇）[C];2010年

3 黃艷梅;楊保勝;;中國北方漢族群體9個STR基因座的遺傳多態(tài)性[A];中國的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動中國西部經(jīng)濟(jì)與社會發(fā)展——2011年中國遺傳學(xué)會大會論文摘要匯編[C];2011年

4 匡金枝;黎方;朱巍;孫睿;聶同鋼;劉孟男;;復(fù)合擴(kuò)增SRY-DXZ1-AMEL基因及其法醫(yī)學(xué)性別鑒定[A];加入WTO和中國科技與可持續(xù)發(fā)展——挑戰(zhàn)與機(jī)遇、責(zé)任和對策（下冊）[C];2002年

5 石美森;李英碧;吳謹(jǐn);應(yīng)斌武;顏靜;張霽;侯一平;;一組Y染色體STR多色熒光復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)的建立及應(yīng)用前景[A];全國第七次法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會論文摘要集[C];2004年

6 宋，

本文編號：904790