本文關(guān)鍵詞：龍膽紫染色法在顯微捕獲單細(xì)胞分離技術(shù)中的應(yīng)用

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【摘要】：目的建立用于顯微捕獲單細(xì)胞技術(shù)的龍膽紫染色法并評價其應(yīng)用效果。方法制作20枚口腔拭子脫落細(xì)胞懸液,配制0.05g/mL龍膽紫染液。取100μL口腔細(xì)胞懸液加入0.15、0.25、0.5、1.0、2.0μL染色液,考察最佳染色濃度;分別染色5、10、30、60min,考察最佳染色時間;用最佳條件染色后抓捕3個細(xì)胞,采用聯(lián)合LV-PCR技術(shù)擴(kuò)增并進(jìn)行DNA分型檢測,進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)20次,并對同一檢材未經(jīng)染色的抓捕細(xì)胞進(jìn)行檢測,用于比對STR分型成功率。將龍膽紫染色法用于案例檢材的口腔上皮細(xì)胞分離檢驗(yàn)。結(jié)果 100μL細(xì)胞懸液加入0.5μL 0.05g/mL龍膽紫染液,染色5min,胞核呈紫紅色,與胞漿對比明顯;染色時間延長不影響染色效果及細(xì)胞分離檢驗(yàn)結(jié)果。優(yōu)化后的龍膽紫染色法對低體積擴(kuò)增無明顯抑制(P0.05)。應(yīng)用此染色法于案例檢材,胞核標(biāo)識清晰,STR分型結(jié)果達(dá)同一認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論龍膽紫染色法利于細(xì)胞核的發(fā)現(xiàn),有助于提高顯微捕獲單細(xì)胞技術(shù)的檢測效能。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)教研室;公安部物證鑒定中心法醫(yī)遺傳學(xué)公安部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國人民公安大學(xué);
【關(guān)鍵詞】： 法醫(yī)物證學(xué) 龍膽紫染色法 顯微捕獲聯(lián)合低體積擴(kuò)增 口腔上皮細(xì)胞
【基金】：“十一五”國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2006BAK07B01)
【分類號】：D919
【正文快照】： 顯微捕獲分離單細(xì)胞聯(lián)合低體積擴(kuò)增(LV-PCR)技術(shù),為法醫(yī)混合微量生物檢材提供了新的檢驗(yàn)方法,現(xiàn)已逐步推廣應(yīng)用[1-3]。由于各種因素的影響,在顯微捕獲單細(xì)胞時,可能遇到細(xì)胞核降解和雜質(zhì)干擾,顯微鏡下難于辨認(rèn)和捕獲。采用染色法標(biāo)識細(xì)胞核,有助于鏡下辨識目標(biāo)細(xì)胞。常規(guī)組織

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李鑫;胡蘭;郭紅玲;劉志芳;Q謎，

本文編號：898867