本文關(guān)鍵詞：關(guān)于過敏性休克死者蛋白酶激活受體-2和SC5b-9的實驗研究

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【摘要】：過敏性休克死亡在法醫(yī)學(xué)鑒定中比較常見，近幾年來涉及過敏性休克死亡的醫(yī)療糾紛逐年攀升。過敏性休克死亡尸檢時僅見一般尸體征象，沒有特殊的病理形態(tài)學(xué)改變，因此給法醫(yī)學(xué)鑒定帶來很大的障礙。在鑒定中要診斷過敏性休克死亡首先要排除暴力性死亡、疾病、中毒的基礎(chǔ)上，，然后結(jié)合接觸過敏原史、臨床表現(xiàn)等，并檢測血清中IgE、肥大細(xì)胞類胰蛋白酶、胃促胰酶、組胺、P物質(zhì)等的含量，試圖為過敏性休克死亡的法醫(yī)學(xué)鑒定提供詳實的診斷標(biāo)準(zhǔn)和形態(tài)學(xué)依據(jù)。本實驗在此基礎(chǔ)上又進(jìn)行了，蛋白酶激活受體-2和SC5b-9在過敏性休克死者檢材的實驗研究。 （1）蛋白酶激活受體（proteinase activated receptors，PARs）是G蛋白偶聯(lián)受體（GPCRs）家族中的成員。目前在小鼠和人的體內(nèi)共發(fā)現(xiàn)4種PARs,分別為PAR-1、PAR-2、PAR-3、PAR-4，在1991、1994、1997、1998年它們的基因序列被先后克隆出來。研究顯示，在過敏反應(yīng)所涉及的細(xì)胞上幾乎都有PARs的表達(dá)，其中蛋白酶激活受體-2在人體內(nèi)的表達(dá)部位比其他三個受體多，所以我們檢測蛋白酶激活受體-2在過敏性休克死亡中的表達(dá)情況，為進(jìn)一步研究過敏性休克死亡提供診斷依據(jù)。 實驗組：法醫(yī)病理診斷為過敏性休克死亡46例。對照組：非過敏性休克死亡12例。用免疫組化染色的方法特染蛋白酶激活受體-2。結(jié)果在病理診斷為過敏性休克死亡案例中，鏡下腎組織內(nèi)見大量蛋白酶激活受體-2染色陽性細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)有大量棕色顆粒，染色陽性的細(xì)胞主要位于腎近曲小管和遠(yuǎn)曲小管的單層立方上皮內(nèi)。在其他臟器組織內(nèi)沒有見到染色陽性的細(xì)胞。非過敏性休克死亡案例中，肺、腎、腸等組織內(nèi)也沒有見到染色陽性的細(xì)胞。實驗組與對照組比較有顯著差異（p0.05）,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 （2）SC5b-9存在于血液中，為非溶解性的，是補體系統(tǒng)激活后的最終產(chǎn)物,因此測定其血清含量可以直接反映補體系統(tǒng)激活的情況。補體系統(tǒng)是人體內(nèi)一種復(fù)雜的固有免疫系統(tǒng)，可以通過旁路途徑、經(jīng)典途徑和甘露糖結(jié)合凝集素途徑被激活，產(chǎn)生一系列級聯(lián)放大效應(yīng)。無論通過何種途徑激活補體系統(tǒng)，當(dāng)補體系統(tǒng)被活化后，會釋放各種生物學(xué)活性物質(zhì)，其中就包括C3a和C5a。C3a和C5a具有過敏毒素的作用，能激活肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞使其脫顆粒，從而釋放組胺等介質(zhì)，產(chǎn)生過敏反應(yīng)癥狀。而關(guān)于SC5b-9在人體內(nèi)的表達(dá)情況，尚缺乏深入的研究，所以我們檢測SC5b-9在過敏性休克死亡中的表達(dá)情況，為進(jìn)一步研究過敏性休克死亡提供診斷依據(jù)。 實驗組：法醫(yī)病理診斷為過敏性休克死亡46例，其中血液（由于受溶血等因素的影響）可用于檢測的血清樣品只有12例。對照組：非過敏性休克死亡12例，血液樣品8例。用Western Blot檢測血清中SC5b-9的表達(dá)水平。結(jié)果過敏性休克死亡案例血清樣品中SC5b-9的表達(dá)水平明顯高于非過敏性休克死亡案例血清樣品中SC5b-9的表達(dá)水平。實驗組與對照組比較有顯著差異（p0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 綜上所述： （1）在過敏性休克死亡案例中，蛋白酶激活受體-2在腎臟組織中的表達(dá)異常增高，初步認(rèn)定蛋白酶激活受體-2參與了過敏性休克的發(fā)生過程。 （2）在過敏性休克死亡案例中，血清中的SC5b-9的含量明顯增高，說明SC5b-9的前身補體被大量激活，初步認(rèn)定補體參與了過敏性休克發(fā)生的某些環(huán)節(jié)。
【關(guān)鍵詞】：過敏性休克死亡 蛋白酶激活受體-2 SC5b-9
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：D919.6
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 引言12-19
• 1.0 文獻(xiàn)綜述12
• 1.1 與蛋白酶激活受體激活相關(guān)的過敏反應(yīng)12-14
• 1.2 與補體激活相關(guān)的過敏反應(yīng)14-15
• 1.3 血液中的 IGE15-16
• 1.4 血液中的組胺16
• 1.5 肥大細(xì)胞16-17
• 1.6 白三烯17-18
• 1.7 嗜酸性粒細(xì)胞18-19
• 第2章 蛋白酶激活受體-2 在過敏性休克死者體內(nèi)的實驗研究19-30
• 2.1 立題依據(jù)19
• 2.2 實驗材料與方法19-21
• 2.2.1 材料19
• 2.2.2 主要試劑19
• 2.2.3 蛋白酶激活受體-2（PAR-2）的免疫組織化學(xué)染色 S-P 法19-20
• 2.2.4 結(jié)果判定及統(tǒng)計計數(shù)方法20
• 2.2.5 常規(guī) HE 染色20-21
• 2.3 實驗結(jié)果21-22
• 2.3.1 HE 染色21
• 2.3.2 蛋白酶激活受體-2（PAR-2）免疫組化染色21-22
• 附圖22-27
• 2.4 討論27-30
• 第3章 SC5B-9 在過敏性休克死者體內(nèi)的實驗研究30-45
• 3.1 立題依據(jù)30
• 3.2 實驗材料30
• 3.3 主要試劑和試劑盒30-31
• 3.3.1 試劑30-31
• 3.3.2 試劑盒31
• 3.4 主要試劑配制31-33
• 3.4.1 TBS 緩沖液31
• 3.4.2 TBST 緩沖液31-32
• 3.4.3 封閉液32
• 3.4.4 30%丙烯酰胺儲存液32
• 3.4.5 5×SDS-PAGE 電泳緩沖液32
• 3.4.6 5×轉(zhuǎn)膜緩沖液32
• 3.4.7 1.5mol/L Tris·HCl（pH8.8）32
• 3.4.8 1.0mol/L Tris·HCl（pH6.8）32
• 3.4.9 10％SDS32
• 3.4.10 10％過硫酸胺（AP）32
• 3.4.11 6％的分離膠的配制（15ml）32-33
• 3.4.12 4％的濃縮膠的配制33
• 3.4.13 考馬斯亮藍(lán)染色液( 0.25%考馬斯亮蘭 R250，45%甲醇，10%乙酸)：33
• 3.4.14 脫色液：45%乙醇，7％冰醋酸33
• 3.5 主要儀器33-34
• 3.6 實驗方法34-38
• 3.6.1 分離血液34
• 3.6.2 血清蛋白定量34-35
• 3.6.3 蛋白樣品的稀釋35
• 3.6.4 Western Blot 檢測35
• 3.6.5 SDS-PAGE35-36
• 3.6.6 轉(zhuǎn)膜36
• 3.6.7 免疫反應(yīng)36-37
• 3.6.8 檢測37
• 3.6.9 考馬斯亮藍(lán)染色37
• 3.6.10 染色37
• 3.6.11 脫色37
• 3.6.12 統(tǒng)計學(xué)方法37-38
• 3.7 實驗結(jié)果38-42
• 3.7.1 血液蛋白定量結(jié)果38
• 3.7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖：38
• 3.7.3 計算出 20 個樣品的蛋白濃度38-39
• 3.7.4 考馬斯亮藍(lán)染色結(jié)果39-40
• 3.7.5 Western Blot 結(jié)果40-42
• 3.8 討論42-45
• 第4章 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果49-50
• 致謝50

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：896926