本文關(guān)鍵詞：生物檢材DNA堿性裂解提取法的優(yōu)化與改良

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【摘要】：目的通過對(duì)DNA堿性裂解提取法進(jìn)行優(yōu)化和改進(jìn),建立一種操作更簡(jiǎn)便、檢驗(yàn)快速、結(jié)果更可靠的生物檢材DNA提取方法。方法以抗凝血作為檢驗(yàn)樣本,通過改變提取試劑的濃度、pH值、保存時(shí)間及孵化樣本的溫度、時(shí)間等條件,觀測(cè)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果峰值的影響,以確定提取試劑最佳條件,DNA提取物最佳保存條件。通過用改良后的堿性裂解法及Chelex100法同時(shí)提取不同量的抗凝血樣本、各類法醫(yī)生物檢材,用不同廠家的DNA試劑盒擴(kuò)增,對(duì)堿性裂解法的靈敏度、適應(yīng)性和適用性進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果改良后的堿性裂解法只需將生物檢材用NaOH(0.25mol/L)99℃孵化8min,振蕩后加入TrisHCl(0.05mol/L,pH=6.5)中和液,離心后直接擴(kuò)增檢測(cè)。DNA提取物于-20℃冰箱可長(zhǎng)期保存。對(duì)于毛發(fā)及精斑類檢材優(yōu)于Chelex100法。DNA提取物適用于現(xiàn)有各種DNA試劑盒擴(kuò)增檢測(cè),其靈敏度與Chelex100法相似。結(jié)論改良后的堿性裂解法,操作簡(jiǎn)便、檢驗(yàn)快速、結(jié)果可靠,可適合于法庭科學(xué)的檢案與建庫(kù)。
【作者單位】： 河北省公安廳;公安部物證鑒定中心;寧夏自治區(qū)公安廳;
【關(guān)鍵詞】： 法醫(yī)物證學(xué) 堿性裂解法 DNA提取 Chelex
【分類號(hào)】：D919
【正文快照】： 1996年Dissing博士首次將廣泛應(yīng)用于細(xì)菌提取中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志CHIN J FORENSIC MED 2011年第26卷第4期士[2]、劉翠蘭[3]及鄭秀芬[4]等對(duì)上述堿性裂解法進(jìn)行了改進(jìn)及補(bǔ)充。但上述報(bào)導(dǎo)的方法針對(duì)不同類型的法醫(yī)生物檢材,其相對(duì)應(yīng)的提取方法(孵化的溫度及時(shí)間)各不相同,不能使不同

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本文編號(hào)：648436