本文關鍵詞：CX43、PKC及HSP70在心源性猝死者心臟中的表達及其法醫(yī)學意義

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【摘要】：目的:心源性猝死(Sudden Cardiac Death,SCD)在法醫(yī)學檢案中很常見,其中心臟傳導系統(tǒng)(Cardiac conduction system,CCS)的異常占到2.6%。部分心源性猝死者死后經(jīng)系統(tǒng)尸檢和組織學檢驗沒有發(fā)現(xiàn)明顯的的形態(tài)學改變,將其歸屬于原因不明的猝死范疇�，F(xiàn)有文獻表明心源性猝死過程中會有PKC的過量活化,因此過量活化的PKC有可能作為診斷心源性猝死案例中心臟形態(tài)學改變的參考指標。熱休克蛋白70(Heat shock protein70,HSP70)也被應用在器官損傷程度的判斷指標中,其在心源性猝死早期診斷上的應用,國內(nèi)外的學者已經(jīng)進行過許多研究。最近研究表明心肌連接蛋白43(connexin43,CX43)在心肌細胞中表達的改變對于心源性猝死的法醫(yī)學診斷也具有十分重要的意義。 CX43是心臟的縫隙連接(Gap junction,GJ)通道中連接小體的最重要的蛋白組成,研究顯示Cx43在成人心肌細胞中的含量最為豐富,且主要存在于工作心肌細胞內(nèi)。心臟的GJ通道則是實現(xiàn)心肌細胞間電耦聯(lián)的結構基礎,心肌細胞間電耦聯(lián)的改變是心律失常發(fā)生的重要原因。Yanada KA等研究表明CX43的低表達和CX45的高表達可導致異常的沖動節(jié)律和室性心律失常,進而誘發(fā)心源性猝死。 蛋白激酶C(PKC)是由ca2+激活的磷脂依賴性蛋白激酶,其發(fā)揮作用的途徑主要是通過對蛋白的磷酸化。激活的PKC可通過介導絲氨酸磷酸化引起CX43構象的改變,導致連接子的滲透率降低,減少有害物質(zhì)的傳遞從而對心肌細胞起到保護作用。心源性猝死過程中會有PKC的過量活化,因此過量活化的PKC有可能作為診斷心源性猝死心臟形態(tài)學改變的參考指標。 熱休克蛋白(heat shock protein,HSP)在生理刺激或病理狀態(tài)等環(huán)境因素的刺激下在細胞內(nèi)誘導合成,分為誘導型HSP和同有型HSP。誘導型HSP在基礎狀態(tài)下不表達,同有型HSP參與維護細胞內(nèi)的蛋白自穩(wěn)系統(tǒng),在細胞的信息傳遞、分化過程中具有重要的調(diào)控作用。其中HSP70已被作為組織器官損害程度的判斷指標之一,且已被應用在心源性猝死的診斷上。HSP70的表達可導致長QT綜合征,易引起鉀離子通道運輸能力不足而導致心源性猝死。Laing JG研究認為HSP70可以保護CX43,防止CX43的降解,對心肌起到保護作用。 方法: 1、選取大連醫(yī)科大學中日病理研究中心2007—2011年尸檢案例標本70例,其中實驗組標本為死于青壯年猝死綜合癥44例,按年齡、性別等分組。對照組為排除心臟疾病死因的標本的26例(溺水、交通事故、農(nóng)藥中毒等)。按宋一璇、姚青松介紹的方法檢查CCS,常規(guī)脫水、石蠟包埋,連續(xù)切片,間斷取片。 2、采用免疫組化的方法,分別檢測CX43和PKC、HSP70在心肌和心臟傳導系統(tǒng)中的表達, 3、采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件對各個年齡組、性別組以及對照組與實驗組之間的差別進行比較,并對各組之間的差異及相關性進行分析。 結果: 1、CX43在不同心肌及心臟傳導組織中的表達 CX43在對照組心肌中大量表達,而在實驗組即SCD組心肌細胞少量表達,僅在部分心肌細胞內(nèi)可見散在顆粒狀的陽性表達產(chǎn)物,心肌細胞染色減弱,陽性面積縮小,條帶顏色變淺。CX43在心臟傳導組織中的表達是從竇房結到房室結再到希氏束表達依次增強,符合心臟電生理傳導的結構基礎。統(tǒng)計結果顯示CX43的陽性率在對照組和SCD組的心肌存在顯著性差異(P0.01),CX43在心臟傳導組織的各個結構間的陽性表達率存在有統(tǒng)計學意義的差異(P0.05)。 2、PKC在不同心肌及傳導組織中的表達 結果顯示對照組PKC僅少量存在于心肌細胞胞漿;而SCD組心肌細胞胞漿、胞膜均可見較多的陽性表達。SCD組取材各部位的PKC免疫組化陽性染色平均光密度值、面積代數(shù)和與對照組相比均有增加,且結果均有統(tǒng)計學意義(P0.05);SCD組內(nèi)不同部位心肌組織間采用多組方差分析法進行比較,結果顯示SAN較其它3個部位陽性染色的平均光密度值增高,但僅與AVN比較有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 3、HSP70在不同心肌及心臟傳導組織中的表達 結果顯示HSP70在對照組心肌組織中僅少量散在分布于細胞胞漿;而SCD組各取材部位組織中HSP70棕黃色陽性顆粒成片狀分布于細胞胞漿。SCD組AVN、SAN平均光密度值高于對照組,具有統(tǒng)計學意義(P0.05); 4、CX43、PKC和HSP70在心肌中陽性表達的相關性分析 在正常組及SCD組心肌和心臟傳導組織PKC和HSP70的表達具有顯著一致性(P0.05),并且呈正相關;CX43與PKC、HSP70表達呈負相關,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結論: 1、CX43在正常死亡者心肌及心臟傳導系統(tǒng)中高表達,在心源性猝死者的心肌及心臟傳導系統(tǒng)中表達則減少。 2、PKC和HSP70在正常心肌和心臟傳導系統(tǒng)中低表達,在心源性猝死者心肌和心臟傳導系統(tǒng)中表達增多。 3、CX43在心肌和心臟傳導組織中的表達分布符合人體心臟搏動電信號傳導的特征,其是心臟正常搏動的結構基礎。 4、CX43、PKC和HSP70在心源性猝死者的心肌及心臟傳導組織中的分布有相關性,有望協(xié)同作為心源性猝死法醫(yī)學鑒定的輔助檢查手段。
【關鍵詞】：心源性猝死 心臟傳導系統(tǒng) CX43 PKC HSP70
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：D919.4;R541
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-15
• 一. 材料及試劑13
• 二. 方法13-14
• 三、圖像分析測量和統(tǒng)計分析處理14
• 四、統(tǒng)計學分析方法14-15
• 結果15-21
• 討論21-26
• 結論26-27
• 參考文獻27-30
• 綜述30-38
• 參考文獻35-38
• 附圖38-40
• 致謝40

【參考文獻】

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1 陳新山;金秀文;張益鵠;;心肌病猝死者心肌連接蛋白43的免疫組化染色觀察[J];中國法醫(yī)學雜志;2006年02期

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本文編號：620523