【摘要】： 目的:用PCR基因分型技術(shù)分析研究昆明地區(qū)常住人口Rh陰性血型的D基因多態(tài)性,研究和探討這些等位基因的分子基礎(chǔ)及其Rh陰性血型的D基因在中國(guó)人中的群體頻率,發(fā)現(xiàn)更多的D變異基因;建立和完善本地區(qū)Rh血型的PCRRHD基因檢測(cè)方法,為產(chǎn)前診斷和臨床輸血提供RHD基因檢測(cè)信息。 方法:選擇昆明地區(qū)的健康人群為研究對(duì)象,首先用血清學(xué)方法篩選出46例Rh陰性血型樣本,再通過(guò)吸收放散試驗(yàn)從這46例Rh陰性血型樣本中檢測(cè)出Del表型個(gè)體。用經(jīng)典的苯酚-氯仿-異戊醇方法從樣本中提取基因組DNA作為PCR反應(yīng)的模板,通過(guò)PCR-SSP技術(shù)檢測(cè)D基因多態(tài)性,首先采用外顯子—序列特異性引物擴(kuò)增和檢測(cè)所有樣本的D基因外顯子組成情況,檢測(cè)結(jié)果為D基因部分存在者再采用內(nèi)含子—序列特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,聚丙烯酰胺凝膠電泳,硝酸銀染色顯帶分析結(jié)果,最后通過(guò)DNA測(cè)序技術(shù)檢測(cè)RHD假基因(RHDψ)和雜交RHD-CE-D基因。 結(jié)果:本研究在46例Rh陰性血型樣本中,D基因完整缺失者29例(63%),為真正Rh陰性;D基因完整存在者12例(26.1%),存在全部外顯子,即Del表型;D基因部分存在者5例(10.9%),其中2例僅存在D基因的第10外顯子,1例存在D基因的第7、9、10外顯子,1例存在D基因的第4、6外顯子,1例僅存在D基因的第6外顯子。DNA測(cè)序結(jié)果顯示,2例僅存在D基因的第10外顯子的樣本均為RHD-CE(3-9)-D雜合基因,1例存在D基因的第4、6外顯子為RHD-CE(2-3,5,7-9)-D雜合基因,是新發(fā)現(xiàn)的變異等位基因。本實(shí)驗(yàn)在所研究的46例Rh陰性血型樣本中未檢測(cè)到RHD假基因(RHDψ)。 結(jié)論: 1.昆明地區(qū)常住人群存在高頻率的Del表型和RHD-CE(3-9)-D雜合基因。 2.在昆明人群發(fā)現(xiàn)一種新型D變異等位基因即RHD-CE(2-3,5,7-9)-D雜合基因。
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圖片說(shuō)明： 圖2.真實(shí)Rh陰性(D基因外顯子全部缺失，內(nèi)參照正確)(2)Del表型本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到Del表型12例，占全部樣本26.1%，與吸收放散試驗(yàn)結(jié)果一致。在抗人球蛋白試驗(yàn)中，這12例樣本全部是Rh陰性，但PCR檢測(cè)其D基因，7個(gè)外顯子全部存在。(見(jiàn)圖3一圖6)多伙bP147bP
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圖片說(shuō)明： 圖2.真實(shí)Rh陰性(D基因外顯子全部缺失，內(nèi)參照正確)Del表型本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到Del表型12例，占全部樣本26.1%，與吸收放散試驗(yàn)結(jié)果一致。在抗人球蛋白試驗(yàn)中，這12例樣本全部是Rh陰性，但PCR檢測(cè)其D基因，7個(gè)外顯子全部存在。(見(jiàn)圖3一圖6)
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：D919

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

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本文編號(hào)：2513631