【摘要】： 第一部分氯胺酮對(duì)大鼠海馬Caspase-3和NF-κB蛋白表達(dá)的影響 目的:觀察多次氯胺酮給藥后,SD大鼠的行為表現(xiàn)、海馬區(qū)組織病理結(jié)構(gòu)的變化及對(duì)大鼠海馬區(qū)內(nèi)NF-κB、凋亡因子Caspase-3表達(dá)的影響及其相互關(guān)系,探討NF-κB在氯胺酮濫用中的可能作用。 方法: 104只SD大鼠隨機(jī)分為高劑量組、低劑量組和對(duì)照組,高、低劑量組大鼠分別予以氯胺酮60和10mg/kg腹腔注射給藥,1次/d ,連續(xù)7d。對(duì)照組予以生理鹽水。觀察大鼠的行為表現(xiàn)并通過(guò)HE染色觀察海馬組織病理結(jié)構(gòu)的變化,免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)海馬NF-κB及Caspase-3蛋白表達(dá)情況,Western blot檢測(cè)海馬中NF-κB蛋白水平。 結(jié)果:(1)行為表現(xiàn):對(duì)照組SD大鼠無(wú)明顯異常反應(yīng);低劑量組(10mg/kg)大鼠腹腔注射后10min左右來(lái)回跑動(dòng)次數(shù)增加,興奮性增加;高劑量組(60mg/kg)大鼠腹腔注射5min后出現(xiàn)呼吸急促,走路不穩(wěn),不時(shí)跌倒,幾乎不能站立,1min后全身陣攣,最后癱倒在地,持續(xù)時(shí)間20～45min。行為改變與氯胺酮的劑量有關(guān),隨著氯胺酮?jiǎng)┝康脑黾?大鼠的行為學(xué)改變?cè)矫黠@。(2)病理改變:反復(fù)多次氯胺酮注射后大鼠海馬組織大體標(biāo)本觀察未見(jiàn)明顯異常。光鏡下見(jiàn):對(duì)照組大鼠海馬神經(jīng)元排列規(guī)則、緊密,形態(tài)完整;低劑量組大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)完整,細(xì)胞結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯異常,未見(jiàn)明顯水腫;高劑量組大鼠海馬神經(jīng)元明顯疏松,排列紊亂,見(jiàn)胞核深染或見(jiàn)扁圓細(xì)胞增生。(3)免疫組化結(jié)果:高劑量氯胺酮組在注射結(jié)束后1h NF-κB蛋白及Caspase-3表達(dá)即增加,6～12h達(dá)到高峰,7d時(shí)表達(dá)與對(duì)照組無(wú)明顯差異(p㧐0.05);低劑量氯胺酮組在注射結(jié)束后6h NF-κB蛋白及Caspase-3表達(dá)開(kāi)始增加,12h～24h達(dá)高峰,3d、7d時(shí)表達(dá)與對(duì)照組無(wú)明顯差異(p㧐0.05)。高劑量組與低劑量組相比,高劑量組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯增多,差異有顯著性(p 0.01),且NF-κB與Caspase-3的表達(dá)呈正相關(guān)。(4)Western blot檢測(cè)結(jié)果:正常對(duì)照組大鼠海馬中NF-κB蛋白無(wú)表達(dá);低劑量氯胺酮組在注射結(jié)束后的12h NF-κB蛋白含量達(dá)高峰,較對(duì)照組相比有顯著性差異(p0.01),其余各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異;高劑量氯胺酮組在注射結(jié)束后的1h NF-κB蛋白含量即增加,6～12h達(dá)到高峰, 7d時(shí)表達(dá)與對(duì)照組無(wú)明顯差異(p㧐0.05),高劑量組與低劑量組相比,高劑量組大鼠海馬區(qū)NF-κB蛋白含量明顯增多,且表達(dá)持續(xù)的時(shí)間較長(zhǎng)。 結(jié)論:1、氯胺酮引起的大鼠行為學(xué)異常與海馬神經(jīng)元損傷有關(guān),呈劑量依賴性加重。 2、氯胺酮可誘導(dǎo)大鼠海馬區(qū)NF-κB和凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3的激活增加,兩者表達(dá)呈正相關(guān)并呈一定的時(shí)間-劑量依賴性趨勢(shì)。 第二部分氯胺酮急性中毒在大鼠體內(nèi)的分布研究 目的:1.研究氯胺酮在急性中毒大鼠體內(nèi)的分布情況; 2.觀察動(dòng)物的中毒表現(xiàn)和死后各組織臟器的病理變化。方法:1.氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用(GC/MS)、氣相色譜(GC)分析檢測(cè)方法:血、組織樣品中加入內(nèi)標(biāo)物利多卡因后堿化,乙醚提取,GC/MS全掃描定性,內(nèi)標(biāo)法、工作曲線法氣相色譜定量分析。 2.體內(nèi)分布研究:對(duì)照組大鼠以生理鹽水灌胃,實(shí)驗(yàn)組大鼠以氯胺酮2倍LD50(460mg/kg)灌胃,1小時(shí)后處死,在室溫下取心血、心肌、肝、大腦、肺、腎、脾檢測(cè)其中氯胺酮的含量。 3.病理觀察:取氯胺酮急性中毒死亡大鼠的腦、心、肺、肝、腎、脾等組織,用4㳠甲醛固定,石蠟包埋,切片,HE染色,光鏡觀察。 結(jié)果:1.動(dòng)物的中毒表現(xiàn):對(duì)照組大鼠在灌胃后,至1h處死時(shí),性格一直較溫順,行動(dòng)正常,易于捕捉。實(shí)驗(yàn)組大鼠在灌胃后2min～5min開(kāi)始出現(xiàn)興奮、左右跑動(dòng)次數(shù)增多、呼吸急促等現(xiàn)象,10min左右出現(xiàn)站立不穩(wěn)、不時(shí)跌倒,眼球突出、繼而四肢震顫、呼吸淺表、口角流涎、全身陣攣、癱倒在地等癥狀。2.病理變化:大鼠主要臟器改變基本相似,均呈現(xiàn)明顯的非特異的急死征象。3.死后分布:本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示鹽酸氯胺酮在灌胃染毒大鼠體內(nèi)含量變化明顯,大鼠體內(nèi)各組織中檢出高濃度的氯胺酮,血液中檢出的氯胺酮含量較低,各組織與血液比較呈顯著性差異(P㩳0.01),氯胺酮在大鼠體內(nèi)的含量分布為:腎肝腦脾心肌肺心血。 結(jié)論:1.大鼠主要臟器病理改變基本相似,均呈現(xiàn)明顯的非特異的急死征象; 2.氯胺酮廣泛分布于大鼠體內(nèi)組織和血液中,組織臟器中濃度顯著高于血液中。
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【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：D919

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2380049