【摘要】： 前言 在臨床法醫(yī)學(xué)鑒定工作中，涉及腰椎間盤突出癥(Lumbar intervertebral disc herniation，LDH)的案件較多。目前，工作中關(guān)于LDH的鑒定主要依據(jù)臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查以及神經(jīng)電生理學(xué)技術(shù)。然而由于臨床表現(xiàn)的主觀性，影像學(xué)檢查只能單純反應(yīng)形態(tài)學(xué)變化，而神經(jīng)電生理技術(shù)側(cè)重于神經(jīng)根功能狀態(tài)的評估，各自具有一定的局限性。近年來，LDH免疫學(xué)方面的研究有望為腰椎間盤退行性改變與LDH的鑒別及LDH發(fā)病時(shí)間的法醫(yī)學(xué)鑒定提供新的手段。 椎間盤的髓核組織自胚胎發(fā)育成熟后便因血管退化而無血供，被纖維環(huán)包裹其中與血液及淋巴系統(tǒng)相隔絕，與外界物質(zhì)的交換僅通過軟骨終板的滲透作用完成。獨(dú)特的解剖結(jié)構(gòu)和物質(zhì)交換方式使其具備了自身抗原的基礎(chǔ)。在損傷或疾病等病理情況下，髓核組織接觸免疫系統(tǒng)，引起自身免疫反應(yīng)(autoimmune response)。 本研究采用新西蘭大耳兔髓核組織免疫同種兔后制備抗血清，，免疫酶斑點(diǎn)技術(shù)(Dot-ELISA)測定免疫前后及實(shí)驗(yàn)組與對照組血清IgG、IgM抗體滴度變化情況，從而檢測髓核組織的免疫原性，并探討血清中抗髓核抗體滴度變化對法醫(yī)學(xué)鑒定腰椎間盤突出癥的意義所在。 材料與方法 1、新西蘭大耳兔，雄性，健康狀況良好，體重2.0—2.5千克，月齡在六個(gè)月以上。 2、無菌條件下提取新西蘭大耳兔髓核組織勻漿、離心后的的懸濁液做為抗原溶液。 3、實(shí)驗(yàn)組皮下注射髓核組織懸濁液與佐劑的乳化劑免疫新西蘭大耳兔，生理鹽水對照組注射與實(shí)驗(yàn)組相同劑量生理鹽水，佐劑對照組注射與實(shí)驗(yàn)組相同劑量佐劑，實(shí)驗(yàn)方法相同。 4、免疫酶斑點(diǎn)技術(shù)檢測血清IgG、IgM抗體滴度的變化及程度。 5、卡方檢驗(yàn)分析免疫前后血清IgG、IgM抗體滴度變化及實(shí)驗(yàn)組與對照組血清IgG、IgM抗體滴度變化的差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1、方陣實(shí)驗(yàn)篩選IgG抗體最適實(shí)驗(yàn)條件，包被抗原濃度50μg／ml時(shí)，免疫后血清1：1—1：128稀釋范圍內(nèi)，硝酸纖維膜顯色效果良好，且隨著血清中抗體濃度的下降，顏色呈現(xiàn)逐級遞減趨勢。 2、方陣實(shí)驗(yàn)篩選IgM抗體最適實(shí)驗(yàn)條件，包被抗原濃度40μg／ml時(shí)，免疫后血清1：1—1：32稀釋范圍內(nèi)，硝酸纖維膜顯色效果良好，且隨著血清中抗體濃度的下降，顏色呈現(xiàn)逐級遞減趨勢。 3、兔髓核組織懸濁液為抗原皮下注射免疫同種兔，免疫后血清中IgG、IgM抗體滴度較免疫前升高，血清中IgG抗體滴度為1：128，IgM抗體滴度為1：32，二者升高程度有較大差異。 4、髓核組織懸濁液為抗原免疫后的實(shí)驗(yàn)組與生理鹽水對照組及佐劑對照組相比較，實(shí)驗(yàn)組血清中IgG、IgM抗體滴度較對照組升高。 討論 當(dāng)抗原與其對應(yīng)抗體分子比例最為合適時(shí)，它們才會彼此相互連接成具有完整主體結(jié)構(gòu)的免疫復(fù)合物巨大網(wǎng)格狀聚集體，使蛋白質(zhì)分子的疏水結(jié)構(gòu)充分暴露，此時(shí)的抗原與其對應(yīng)的抗體結(jié)合最為牢固。經(jīng)過方陣實(shí)驗(yàn)可知，包被抗原濃度為50μg／ml免疫后血清稀釋1：128為檢測IgG抗體的最適實(shí)驗(yàn)條件；包被抗原濃度為40μg／ml，免疫后血清稀釋1：32為檢測IgM抗體的最適實(shí)驗(yàn)條件。 在最適實(shí)驗(yàn)條件下，檢測血清IgG、IgM抗體滴度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果按α=0.05水平檢驗(yàn)，免疫前后血清中IgG、IgM抗體滴度變化及實(shí)驗(yàn)組與對照組血清中IgG、IgM抗體滴度變化的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明髓核組織具有免疫原性，與機(jī)體的免疫系統(tǒng)接觸后，可刺激機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答，導(dǎo)致血清中抗髓核IgG抗體、抗髓核IgM抗體滴度的升高。 髓核組織抗原成分復(fù)雜，具有較高異質(zhì)性，其中一部分不是髓核組織所特有的，與兔體內(nèi)其他組織器官具有相同或相似的抗原；或髓核組織內(nèi)含有的特異性抗原尤其是蛋白質(zhì)抗原成分具有多個(gè)抗原決定簇，與體內(nèi)其他組織器官的抗原決定簇相同或相似，血清中存在的抗體能與髓核組織內(nèi)抗原成分發(fā)生交叉反應(yīng)。則未經(jīng)過免疫的兔血清中抗體和髓核組織能夠發(fā)生反應(yīng)，出現(xiàn)陽性或者弱陽性改變。 在排除感染、肝腎疾病及其他自身免疫性疾病等導(dǎo)致血清中抗體滴度升高的情況下，根據(jù)血清中抗體滴度變化情況，可對腰椎問盤退行性改變與腰椎間盤突出進(jìn)行鑒別。而動態(tài)檢測腰椎間盤突出癥患者血清IgG、IgM抗體滴度的變化，有望對早期階段的破裂型、游離型腰椎間盤突出癥發(fā)病時(shí)間做出粗略推斷。 結(jié)論 髓核組織具有免疫原性，與機(jī)體的免疫系統(tǒng)接觸后，可刺激機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答，導(dǎo)致血清中IgG、IgM抗體滴度的升高。 依據(jù)免疫學(xué)血清IgG、IgM抗體表達(dá)規(guī)律，為法醫(yī)學(xué)鑒別腰椎間盤退行性改變與LDH及LDH發(fā)病時(shí)間奠定免疫學(xué)理論基礎(chǔ)。
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【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：D919

【引證文獻(xiàn)】

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1 楊輝;郭麗新;武媛媛;;頸椎病病因的相關(guān)性研究進(jìn)展[J];中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2012年06期

本文編號：2355318