本文關(guān)鍵詞： 特發(fā)性擴張型心肌病(IDCM) 變性高效液相色譜(DHPLC) 單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP) nesprin-1α 基因突變　出處：《四川大學》2007年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 目的特發(fā)性擴張型心肌病(Idiopathic DilatedCardiomyopathy，IDCM)是引起心衰和導致心臟移植的常見原因，目前的研究表明，遺傳因素在IDCM發(fā)病中起著重要作用。核膜蛋白nesprin家族中的亞型nesprin-1α定位于細胞核內(nèi)膜，對維持細胞正常結(jié)構(gòu)與功能發(fā)揮重要作用。nesprin-1α基因突變可能導致其與核纖層蛋白A／C、伊默菌素等結(jié)合性質(zhì)的改變，影響細胞核與細胞骨架之間的連接以及下游的信號傳遞系統(tǒng)，有可能參與了IDCM的發(fā)生、發(fā)展。本課題對IDCM組及正常對照組樣本nesprin-1α基因19個外顯子DNA序列進行突變篩查，獲得兩組樣本中各外顯子DNA突變數(shù)據(jù)，分析nesprin-1α基因突變與IDCM發(fā)病相關(guān)性，以期從分子基因水平為IDCM的早期診斷提供科學依據(jù)，幫助闡明IDCM的形成機制及其遺傳學基礎(chǔ)。方法應(yīng)用primer 3軟件，設(shè)計擴增nesprin-1α基因外顯子序列的引物，為達到DHPLC技術(shù)最高的陽性檢出率，同時滿足SSCP技術(shù)所需的最佳條件，PCR產(chǎn)物片斷大小控制在在150 bp-350 bp。各引物分別擴增后，采用6％的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物的特異性和濃度，分析片斷大小是否與設(shè)計大小相符，優(yōu)化PCR各項條件，確保PCR產(chǎn)物可用于后續(xù)的DHPLC及SSCP分析。通過構(gòu)建PCR產(chǎn)物DNA池與單個樣本間比較的方法，確定DHPLC檢測異源雙鏈的效能，建立篩查nesprin-1α基因突變的DHPLC方法；應(yīng)用不同的SSCP實驗參數(shù)對nesprin-1α基因各外顯子序列進行SSCP突變篩查預試驗，確定各序列最佳的SSCP突變篩查條件，建立篩查nesprin-1α基因突變的SSCP方法。用建立的方法，在218例IDCM組樣本及210例正常對照組樣本中，對nesprin-1α基因各外顯子序列進行突變篩查，獲得相應(yīng)的基因突變數(shù)據(jù)并分析其與IDCM發(fā)病相關(guān)性。結(jié)果分別擴增nesprin-1α19個外顯子DNA序列后，聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測結(jié)果表明，PCR產(chǎn)物片斷大小與設(shè)計引物的理論大小相符合，濃度適當且特異性好，，可以滿足DHPLC及SSCP分析的要求。DHPLC技術(shù)與SSCP技術(shù)共檢出nesprin-1α基因突變位點12個，其中錯義突變5處，分別為：Exon 9：1301 G→A，蛋白434：R→Q；Exon12：1696A→T，蛋白566：S→C；Exon 12：1773：C→A，蛋白591：N→K；Exon 19：2759 G→A，蛋白920 R→Q及Exon 19：2764 G→A，蛋白922G→S突變。同義突變7處，分別為：Exon 6：-12 G→A；Exon 8：-3 A→G；Exon 9：1311 G→A，蛋白437：p→p；Exon 9：1347 C→T，蛋白449：H→H：Exon 11：1593 C→T，蛋白：531 R→R；Exon 12：1683 G→C，蛋白561 L→L；Exon 12：1701 C→T，蛋白567：S→S。DHPLC檢出全部的突變，SSCP檢出10個突變位點，未能檢出Exon 6：-12 G→A突變及Exon 12：1701 C→T突變。IDCM組中檢出全部的基因突變，且有3個錯義突變?yōu)镮DCM組特有：蛋白434：R→O突變位于SR4與LEM-like區(qū)之間，蛋白566：S→C突變與蛋白591：N→K突變位于LEM-like與SR5區(qū)之間，對照組樣本中未發(fā)現(xiàn)這3個錯義突變，表明這些突變與IDCM發(fā)病是相關(guān)的。除1311 G→A與1593 C→T外的5個同義突變?yōu)镮DCM組特有，這些同義突變雖然對nesprin-1α蛋白序列沒有影響，但是它們可能通過DNA-蛋白質(zhì)相互作用、影響nesprin-1α表達水平、或者是影響其他相關(guān)蛋白的表達等途徑對IDCM的發(fā)生、發(fā)展產(chǎn)生影響。 結(jié)論本研究采用DHPLC技術(shù)及SSCP技術(shù)，對218例IDCM組樣本和210例對照組樣本進行了nesprin-1α外顯子DNA序列突變篩查。在發(fā)現(xiàn)的12個突變位點中，3個錯義突變以及5個同義突變只在IDCM組中檢出，表明nesprin-1α基因突變與IDCM密切相關(guān)。本研究首次提出nesprin-1α基因是IDCM的致病基因，為進一步研究IDCM，最終闡明其發(fā)病機制并進行早期診斷與基因治療研究提供了理論與實驗基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：四川大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：D919

【參考文獻】

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1 陳新云,饒莉,周斌,張林,陳航,王宇平,王斌;受磷蛋白基因突變與中國成都地區(qū)擴張型心肌病的相關(guān)性研究[J];四川大學學報(醫(yī)學版);2005年05期

2 王斌;饒莉;張林;周斌;王宇平;陳新云;;擴張型心肌病與Desmin及血小板活化因子乙酰水解酶基因相關(guān)性研究[J];四川大學學報(醫(yī)學版);2006年03期

3 楊志惠;張林;周斌;王闖;賈靜;;PCR-SSCP法檢測人類補體第八成分C8ADNA多態(tài)性研究[J];四川大學學報(醫(yī)學版);2006年03期

4 汪朝暉,廖玉華,董繼華,李淑莉,王金平,Michael LX Fu;Clinical significance and pathogenic role of anti-cardiac myosin autoantibody in dilated cardiomyopathy[J];Chinese Medical Journal;2003年04期

本文編號：1528949