本文關(guān)鍵詞：嗜尸性麗蠅分子標(biāo)記的檢測(cè)及發(fā)育規(guī)律的研究　出處：《中南大學(xué)》2013年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 法醫(yī)昆蟲(chóng)學(xué) 演替 種屬鑒定 細(xì)胞色素氧化酶亞基Ⅰ(COⅠ) 嗜尸性麗蠅 生長(zhǎng)發(fā)育

【摘要】：背景 法醫(yī)昆蟲(chóng)學(xué)在實(shí)踐中主要應(yīng)用于死亡時(shí)間(postmortem inteval, PMI)推斷。法醫(yī)昆蟲(chóng)學(xué)推斷PMI的原理主要有兩種：一是研究尸體上主要嗜尸性昆蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律來(lái)推斷PMI；二是研究尸體上昆蟲(chóng)的種類(lèi)及演替規(guī)律來(lái)推斷PMI。即依據(jù)蠅類(lèi)的生活史、群落組成隨季節(jié)和時(shí)間的變動(dòng)規(guī)律來(lái)推斷PMI。中國(guó)幅員遼闊,不同地域昆蟲(chóng)的種類(lèi)及生活習(xí)性均不相同,不能簡(jiǎn)單地照搬其它地方的研究資料來(lái)進(jìn)行法醫(yī)實(shí)踐,但有必要借鑒前人的研究方法來(lái)對(duì)各地區(qū)嗜尸性昆蟲(chóng)群落演替展開(kāi)調(diào)查研究,發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)氐膬?yōu)勢(shì)物種,并加以飼養(yǎng),進(jìn)一步研究其生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律,逐步建立適合于當(dāng)?shù)氐氖仁岳ハx(chóng)種類(lèi)的數(shù)據(jù)庫(kù)和推測(cè)系統(tǒng),為法醫(yī)實(shí)踐提供依據(jù)。對(duì)嗜尸性昆蟲(chóng),尤其是嗜尸性麗蠅進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的種類(lèi)鑒定,是PMI推斷的關(guān)鍵環(huán)節(jié),有著特別重要的作用。麗蠅往往是第一批到達(dá)尸體并產(chǎn)卵的嗜尸性昆蟲(chóng),具有重要的法醫(yī)學(xué)意義,但一些近緣麗蠅物種和麗蠅幼蟲(chóng)之間的鑒別尚缺乏明顯的形態(tài)學(xué)特征。分子生物學(xué)物種鑒定技術(shù),是形態(tài)學(xué)鑒定的有力補(bǔ)充,此類(lèi)方法快捷、簡(jiǎn)便、有效。中國(guó)地理環(huán)境多樣,麗蠅種類(lèi)繁多,還需要積累更多的基因資源來(lái)進(jìn)行鑒定研究。因此有必要在全國(guó)范圍收集大量麗蠅樣本,并開(kāi)發(fā)新的嗜尸性麗蠅的分子標(biāo)記,完善嗜尸性麗蠅的鑒定系統(tǒng)。同時(shí)完善各種嗜尸性蠅類(lèi)的發(fā)育歷期、生長(zhǎng)曲線、及嗜尸性昆蟲(chóng)的演替等資料。但目前,國(guó)內(nèi)這些方面的資料還很缺乏。 目的 1.在全國(guó)多個(gè)地區(qū)收集麗蠅樣本,對(duì)我國(guó)常見(jiàn)嗜尸性麗蠅的種類(lèi)、分布及嗜尸特性展開(kāi)調(diào)查,并在長(zhǎng)沙地區(qū)夏季豬尸體上對(duì)常見(jiàn)嗜尸性昆蟲(chóng)群落種類(lèi)和演替規(guī)律進(jìn)行調(diào)查研究。 2.利用278bp COI線粒體基因片段和272bp COI片段對(duì)來(lái)自全國(guó)28個(gè)地區(qū)的130個(gè)麗蠅樣本進(jìn)行種類(lèi)鑒定,檢測(cè)這兩個(gè)基因片段對(duì)不同麗蠅物種的鑒別效力,構(gòu)建并完善我國(guó)嗜尸性麗蠅的分子標(biāo)記系統(tǒng)。 3.飼養(yǎng)優(yōu)勢(shì)嗜尸性蠅種,并研究其生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律,為本地區(qū)法醫(yī)昆蟲(chóng)學(xué)實(shí)踐奠定理論基礎(chǔ)和提供科學(xué)依據(jù)。 方法 1.在全國(guó)不同經(jīng)緯度的28個(gè)地區(qū),用動(dòng)物尸體誘捕麗蠅并收集樣本。夏季在長(zhǎng)沙地區(qū)連續(xù)三年用豬尸體進(jìn)行演替實(shí)驗(yàn)。 2.用Primer5.0設(shè)計(jì)引物,用勻漿法、蛋白酶K+酚／氯仿／異戊醇法提取足夠的基因組DNA,用Promega試劑盒擴(kuò)增PCR,用常規(guī)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA和PCR產(chǎn)物。擴(kuò)增產(chǎn)物用膠回收試劑盒純化,產(chǎn)物批量送測(cè)序。測(cè)序結(jié)果用Chromas及ClustalW等軟件閱讀、比對(duì),截取等長(zhǎng)度片段。用Mega4.0進(jìn)行序列分析及系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建。將所獲得嗜尸性麗蠅基因片段的數(shù)據(jù)上傳GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)。 3.夏季在室內(nèi)自然條件下飼養(yǎng)絲光綠蠅、大頭金蠅和棕尾別麻蠅,測(cè)量它們的幼蟲(chóng)的體長(zhǎng)和體重,還測(cè)量蠅蛹的長(zhǎng)、寬、重,并繪制它們隨時(shí)間變化的生長(zhǎng)曲線圖、構(gòu)建相關(guān)方程。 結(jié)果 1.三年以來(lái)在全國(guó)范圍17個(gè)省28個(gè)地區(qū)收集了大量麗蠅樣本,初步形態(tài)學(xué)鑒定并選出13種130個(gè)麗蠅樣本。 2.連續(xù)三年夏季在長(zhǎng)沙地區(qū)野外及室內(nèi)用豬尸體進(jìn)行演替實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)嗜尸性昆蟲(chóng)29種,分屬3目15科。 3.用278bp COI和272bp COI基因片段對(duì)來(lái)自全國(guó)多個(gè)地區(qū)的麗蠅進(jìn)行物種鑒定,發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)片段均適合于嗜尸性麗蠅的物種鑒定,尤其是一些近緣種類(lèi)的鑒別。 4.用278bp COI片段進(jìn)行鑒定時(shí),發(fā)現(xiàn)絲光綠蠅Lucilia sericata (Meigen,1826)和叉葉綠蠅Lucilia caesar (Linnaeus,1758)存在種內(nèi)基因地域差異。而272bp COI片段進(jìn)行鑒定時(shí),發(fā)現(xiàn)大頭金蠅Chrysomya megacephala (Fabricius,1794)和新陸原伏蠅Protophormia terraenovae (Robineau-Desvoidy,1830)存在種內(nèi)基因地域差異。 5.成功地飼養(yǎng)了絲光綠蠅L. sericata、大頭金蠅C. megacephala和棕尾別麻蠅Boerttcherisca peregrine (Robineau-Desvordy,1830)。繪制了幼蟲(chóng)體長(zhǎng)、體重,蠅蛹長(zhǎng)、寬、重隨時(shí)間變化的生長(zhǎng)曲線圖。發(fā)現(xiàn)幼蟲(chóng)體長(zhǎng)和時(shí)間的關(guān)系吻合三次方程L=aT3+bT2蠅蛹體重則符合一次方程W=aT+b。相關(guān)性顯著(R20.9,P0.05)其中,L代表蛆長(zhǎng),W代表蛹重,T代表時(shí)間,a、b、c、d為常數(shù)。 結(jié)論 1.在我國(guó)多個(gè)地區(qū)進(jìn)行嗜尸性麗蠅樣本的采集,補(bǔ)充了嗜尸性麗蠅種類(lèi)及分布資料。 2.三年來(lái)在長(zhǎng)沙地區(qū)進(jìn)行了嗜尸性昆蟲(chóng)演替實(shí)驗(yàn),對(duì)推斷PMI等法醫(yī)實(shí)踐具有一定的實(shí)用價(jià)值。 3.短片段COI(278bp COI和272bp COI基因片段),具有快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、有效鑒別物種等優(yōu)點(diǎn),適合基層法醫(yī)工作者應(yīng)用。 4.向GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)上傳了13種麗蠅物種的145條COI基因片段,完善了數(shù)據(jù)庫(kù)并初步構(gòu)建了我國(guó)嗜尸性麗蠅分子標(biāo)記系統(tǒng)。 5.飼養(yǎng)一些有法醫(yī)學(xué)重要意義的嗜尸性蒼蠅并進(jìn)行生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律研究,獲得了一些基礎(chǔ)性科學(xué)數(shù)據(jù),為法醫(yī)實(shí)踐工作提供了理論依據(jù),也為今后研究多種嗜尸性蠅類(lèi)的生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律提供了方法。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：D919.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王勇;陳克平;姚勤;;系統(tǒng)發(fā)生分析軟件PAUP和TreePuzzle使用方法介紹[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年02期

2 張愛(ài)兵,張真,王鴻斌,孔祥波;中國(guó)枯葉蛾科昆蟲(chóng)地理分布及其與環(huán)境的相關(guān)性[J];北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2004年04期

3 李玲,張幼芳,馬玉X;哈爾濱地區(qū)常見(jiàn)尸食性昆蟲(chóng)及在豬尸上出現(xiàn)的規(guī)律[J];東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年05期

4 成新躍,周紅章,張廣學(xué);分子生物學(xué)技術(shù)在昆蟲(chóng)系統(tǒng)學(xué)研究中的應(yīng)用[J];動(dòng)物分類(lèi)學(xué)報(bào);2000年02期

5 樸美花,陳學(xué)新,何俊華;膜翅目昆蟲(chóng)干標(biāo)本的基因組DNA提取[J];動(dòng)物分類(lèi)學(xué)報(bào);2002年04期

6 張亞平,施立明;動(dòng)物線粒體DNA多態(tài)性的研究概況[J];動(dòng)物學(xué)研究;1992年03期

7 蒙世杰,李笑松;我國(guó)大陸部分地區(qū)黑腹果蠅群體線粒體DNA多態(tài)性研究[J];動(dòng)物學(xué)研究;1998年04期

8 胡佳林;鄭學(xué)禮;王倩;陳曉光;黃勇平;;應(yīng)用簡(jiǎn)單序列重復(fù)區(qū)間擴(kuò)增多態(tài)性分子標(biāo)記鑒定我國(guó)12個(gè)城市與地區(qū)常見(jiàn)嗜尸蠅類(lèi)的研究[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年04期

9 黃瑞亭;法醫(yī)昆蟲(chóng)學(xué)研究進(jìn)展[J];法律與醫(yī)學(xué)雜志;1994年01期

10 楊玉璞,任嘉誠(chéng),劉力,李彥文,閻榮,汪興鑒,張學(xué)忠;北京地區(qū)尸生性蠅類(lèi)研究及其在法醫(yī)鑒定中的應(yīng)用[J];中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志;1998年03期

，

本文編號(hào)：1332457