發(fā)布時間：2017-12-02 14:06

  本文關(guān)鍵詞：酒精對大鼠腦內(nèi)血管超微結(jié)構(gòu)及CD146蛋白表達變化的影響

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【摘要】：過量飲酒對健康造成極大損害,并引發(fā)眾多不良社會后果,每年造成約250萬人死亡,更為可怕的是越來越多的年輕人受到影響。世界衛(wèi)生組織發(fā)表的《酒精與健康全球狀況報告》中指出,酒精是世界上第三大導(dǎo)致疾病的危險因素。國內(nèi)外研究表明大量飲酒可通過多種途徑促進腦血管意外的發(fā)生,但其具體機制尚未明了。在法醫(yī)學(xué)實踐中,大量飲酒后輕度外力作用導(dǎo)致蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage SAH)的案件較為常見,大量飲酒對腦血管的損傷以及飲酒在此類案件中的參與度問題成為法醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)及基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的研究焦點。CD146為黑色素瘤粘附分子,在所有人血管內(nèi)皮細胞上成陽性表達,為血管內(nèi)皮粘附分子。 目的:本實驗?zāi)康氖窃诮⒋笫箫嬀颇Ｐ偷幕A(chǔ)上,采用頂空氣相色譜儀檢測大劑量飲酒后血乙醇濃度(blood alcohol content BAC)的變化情況;應(yīng)用自動凝血分析檢測儀測定飲酒不同時間大鼠凝血功能系列指標(biāo),觀察分析各指標(biāo)變化的內(nèi)在聯(lián)系;通過HE染色、免疫組織化學(xué)染色以及透射電子顯微鏡(transmission electron microscope TEM)技術(shù)與方法,深入觀察飲酒大鼠腦血管內(nèi)皮細胞及其細胞間連接的改變,觀察CD146在腦血管內(nèi)皮細胞的表達情況,探討其在大量飲酒后內(nèi)皮細胞連接改變中的作用,進一步闡明大量飲酒對腦血管的影響及作用機制,為飲酒后輕度外力作用導(dǎo)致SAH案件的飲酒參與度鑒定提供理論基礎(chǔ)。 方法:健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,體重220g±10g,用市售白酒北京紅星二鍋頭(56%v/v)制備模型,采用大鼠灌胃器進行灌胃,實驗前均給予適應(yīng)性蒸餾水灌胃1周。 1不同時間BAC測定:取6只220g±10g雄性SD大鼠,以56%v/v 1.2mL/100g給予白酒灌胃一次,分別于灌胃后0.5h、1h、2h、3h、6h、12h共6個時間點,由內(nèi)眥眶內(nèi)靜脈叢取血,左右眼輪換,每次每只取血約200-300μl,密封。應(yīng)用頂空氣相色譜儀檢測各時間點BAC,確定該劑量白酒灌胃后BAC峰值的出現(xiàn)時間。 2將60只雄性SD大鼠隨機分成正常對照組、飲酒1次組、飲酒7天組、飲酒14天組、飲酒21天組、飲酒28天組。飲酒各組以56%v/v 1.2mL/100g/次的灌酒量進行灌胃。除飲酒1次組,其他各飲酒組每天白酒灌胃2次,間隔10小時。正常對照組用等體積蒸餾水代替白酒進行灌胃。在此期間觀察大鼠的行為學(xué)改變,測量并記錄大鼠體重變化情況,記錄存活情況。各組末次灌胃后抽取心血,斷頭取腦組織、肝臟組織。取血后全自動凝血分析儀檢測凝血酶原時間(prothrombin time PT)、凝血酶時間(thrombin time TT)、活化部分凝血活酶時間(activated partial thromboplatin time APTT)及纖維蛋白原(fibrinogen FBG)。肝組織制備石蠟切片,進行HE染色觀察;全腦固定制作石蠟切片,應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法觀察大鼠腦血管CD146蛋白的表達變化;應(yīng)用TEM觀察大鼠基底動脈及大腦中動脈的病理損傷情況。 數(shù)據(jù)采用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(Mean士SD)表示,用SPSS 16.0統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析,各組均數(shù)的比較行單因素方差分析(ANOVA),用最小顯著差法(LSD)作兩兩比較,以P0.05為有顯著性差異。 結(jié)果: 1大鼠行為學(xué)改變,體重變化:大鼠白酒灌胃操作較蒸餾水灌胃困難。大鼠飲酒后短時間內(nèi)出現(xiàn)不同程度的興奮性增加的表現(xiàn),20min后逐漸出現(xiàn)昏睡,翻正反射消失等急性酒精中毒臨床表現(xiàn)。隨著后期實驗時間延長,飲酒組進食量減少,灌胃時抵抗反應(yīng)減輕,飲酒后未見明顯興奮性增強表現(xiàn),活動性減弱,反應(yīng)遲鈍,給予灌酒14天后個別大鼠出現(xiàn)肢體偏癱。體重增長緩慢,21天組和28天組大鼠體重與對照組相比增長明顯減少(21天組P0.05,28天組P0.01)。 2 BAC:按照56%v/v 1.2mL/100g劑量給予大鼠一次性灌酒,BAC在0.5小時為190.29±29.34mg/dl,至1小時濃度達到峰值,為225.06±43.10mg/dl,2小時BAC為194.08±32.30mg/dl,之后濃度逐漸下降,至12h為25.37±18.21mg/dl。說明大鼠飲酒后約1-2h乙醇吸收達高峰。 3凝血功能指標(biāo)檢測:各組末次灌胃后2小時采取血漿。飲酒14天組TT明顯縮短,與其他各組均有顯著差異(P0.05);飲酒14天組PT延長,與其他各組均有顯著差異(P0.05);飲酒各組APTT與正常對照組沒有明顯差異;飲酒7天組FBG延長,與其他各組有顯著差異(P0.05)。 4組織病理學(xué)改變: 4.1肝臟病理學(xué)改變:對照組可見肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列,細胞形態(tài)規(guī)整,肝小葉結(jié)構(gòu)清晰;飲酒1次組可見肝細胞水腫伴部分肝細胞輕度脂肪變性,隨著飲酒時間的增加可見肝細胞脂肪變性的加重,炎細胞聚集,進而又出現(xiàn)多發(fā)片狀壞死。 4.2 CD146免疫組織化學(xué)結(jié)果:正常對照組以及飲酒各組腦實質(zhì)微血管、靜脈、蛛網(wǎng)膜下腔血管和基底動脈血管壁均有CD146陽性表達,其中動脈血管壁主要在平滑肌層表達,靜脈及微血管在內(nèi)皮細胞表達明顯。其中對照組表達為(+),1次灌酒組所有類型血管中陽性表達為弱陽性(±),7天組、14天組、21天組各類血管陽性表達逐漸加強(++~++++),28天組陽性表達明顯減弱(±)。在各實驗組中,腦實質(zhì)毛細血管及微小血管陽性表達的變化較基底動脈、大腦中動脈及其他小動脈明顯。 4.3腦基底動脈、腦中動脈超微結(jié)構(gòu)改變:實驗7天組內(nèi)皮細胞間連接開始出現(xiàn)小階段融合,實驗14天組至28天組內(nèi)皮細胞損傷逐漸加重,出現(xiàn)內(nèi)皮細胞形態(tài)不規(guī)則,內(nèi)皮細胞細胞間質(zhì)可見圓形大空泡,新生吞飲小泡增多,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆�，F(xiàn)象。表面微絨毛卷曲,微絨毛凸起減少,細胞間緊密連接融合部分逐漸增加,模糊不清。各組基底動脈內(nèi)皮細胞的改變與大腦中動脈的內(nèi)皮細胞變化未見明顯不同。 結(jié)論: 1飲酒不同時期處死大鼠(處死時間均在飲酒后2小時),檢測結(jié)果表明大鼠凝血功能出現(xiàn)異常。 2長期大量飲酒引起大鼠腦血管內(nèi)皮粘附分子CD146的表達變化,并對血管內(nèi)皮連接造成不同程度的損傷,影響腦血管的通透性,增加了飲酒后外傷性蛛網(wǎng)膜下腔出血的危險性。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：D919;R743

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本文編號：1245152