本文關(guān)鍵詞：SCN5A基因多態(tài)性與心臟性猝死的相關(guān)性研究

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【摘要】：【研究背景】 心臟性猝死(Sudden cardiac death，SCD)，是法醫(yī)病理學(xué)檢案和研究的重要內(nèi)容。已有的研究表明，在SCD的發(fā)生的病因中冠心病占第一位，此外還有心肌炎、心肌病、先天性冠脈發(fā)育異常、風(fēng)濕性心臟病、主動脈夾層等。上述疾病所引起的猝死，，通過系統(tǒng)的尸體解剖及法醫(yī)病理學(xué)檢查均可以明確診斷；但仍有較多SCD發(fā)生者，通過詳細的病理形態(tài)學(xué)檢查不能明確死亡病因，這類案例以往被稱為陰性解剖（Negative autopsy）和不明原因的心臟性猝死（Unexplained suddencardiac death），目前認為，此類案例與致死性心律失常的發(fā)生有關(guān)，由于該類死亡心臟形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，常規(guī)的法醫(yī)病理學(xué)檢查難以確定死因，給法醫(yī)病理學(xué)診斷帶來困難，通常引起糾紛，此類案件的發(fā)生率在國外約6%，國內(nèi)由北京阜外醫(yī)院牽頭本單位參加所報道的697例SCD的統(tǒng)計分析中，該類案例占10%，是目前SCD病因診斷研究的重點。 過去幾十年，由于分子遺傳學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，人們對不明原因的SCD有了新的認識。許多研究表明，該類疾病的發(fā)生與基因變異引起的離子通道異常有關(guān)，由于基因變異導(dǎo)致編碼相應(yīng)離子通道的蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而引發(fā)致死性心律失常。目前報道的此類異常有鈉離子通道和鉀離子通道疾病等，這類疾病主要包括有：長QT綜合征（longQT syndrome, LQTS）、Brugada綜合征（Brugada syndrome, BS）、兒茶酚胺敏感多態(tài)性室速（Catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia，CPVT）和短QT綜合征（short QT Syndrome，SQTS）�，F(xiàn)有的研究表明，青壯年猝死綜合征、嬰兒猝死綜合征的發(fā)生均與SCN5A基因變異引起的心肌鈉離子通道異常有關(guān)。 SCN5A基因編碼心臟Na+通道的成孔亞單位，負責(zé)心臟動作電位的快速除極，在控制心肌細胞的興奮的傳導(dǎo)和維持中起著關(guān)健作用。大量研究證實SCN5A的突變可導(dǎo)致多種致死性的家族性心律失常�，F(xiàn)有的研究表明，由SCN5A基因突變導(dǎo)致的心率失常按Na+通道功能改變可以分成兩類，一類是功能增強型突變?nèi)玳LQT綜合征3型；另外一類是功能減低型突變，包括Brugada綜合征，心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)疾病如病態(tài)竇房結(jié)綜合征等。目前SCN5A已成為心臟分子遺傳學(xué)及法醫(yī)病理學(xué)研究的重點及熱點，許多心臟的電生理學(xué)研究表明，SCN5A基因突變引起致死性心律失常是青壯年猝死發(fā)生重要病因。此外，也有研究證實SCN5A基因的一些常見單核苷酸多態(tài)位點(single nucleotide polymorphisms, SNP)變異也能引起心肌細胞Na+通道發(fā)生變化從而增加該類患者心律失常發(fā)生的易感性。2002年Splawski等首先報道了非裔美籍人中SCN5A的多態(tài)位點Y1102，2005年Allen Burke等證實SCN5A多態(tài)位點Y1102的變異與非裔美籍人中不明原因SCD（心臟正常，或者輕度-中度的肥大）的發(fā)生有關(guān)。大量的研究已經(jīng)表明，SNP存在種族及地區(qū)差異，在高加索人和亞洲人中沒有檢測到SCN5A多態(tài)性位點Y1102。目前已經(jīng)報道的SCN5A基因多態(tài)位點主要來自歐美的高加索人群和日本人群，國內(nèi)周峰、成建定等報道了中國人SCN5A基因多態(tài)位點H558R、R1193Q、C5457T及3666+69G㧐C，并且認為SCN5A基因多態(tài)位點5457C、3666+69C是中國南方人群青壯年猝死綜合征發(fā)生的易感基因。 本課題組在湖北同濟法醫(yī)學(xué)司法鑒定中心2002年至2012年10年SCD（980例）的統(tǒng)計分析中，發(fā)現(xiàn)不明原因的SCD約90例。本次實驗選取2009年至2010年的34例不明原因的SCD案例，這些案例有些發(fā)生在睡眠中，有的發(fā)生在日�；顒又�，有些為運動中猝死或遭受輕微外傷之后，其發(fā)生與SCN5A基因變異是否具有相關(guān)性，未見有類似報道，本研究通過對該類案例SCN5A基因的多態(tài)性位點進行觀察，分析該類死亡案例死亡與SCN5A基因多態(tài)性變異的關(guān)系，為法醫(yī)病理學(xué)死因診斷提供依據(jù)，為臨床上SCD的預(yù)防提供參考。 【目的】 本研究收集湖北同濟法醫(yī)學(xué)司法鑒定中心的不明原因SCD案例，提取基因組總DNA，應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)，通過對SCN5A基因多態(tài)性變異位點進行觀察，分析該類死亡案例與SCN5A基因多態(tài)性變異的關(guān)系，為法醫(yī)病理學(xué)診斷該類案例死因提供依據(jù)，為臨床上SCD的預(yù)防提供參考。 【研究對象和方法】 1.研究對象分組 不明原因SCD組:收集2009年至2010年間湖北同濟法醫(yī)學(xué)司法鑒定中心尸檢保存的蠟塊及血液樣本。病例入選標(biāo)準:平素身體健康,詳細的法醫(yī)病理學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)有可解釋死因的病理形態(tài)學(xué)改變，毒化檢驗陰性，心臟結(jié)構(gòu)及形態(tài)學(xué)正常，可有輕度肥厚，排除傳導(dǎo)系統(tǒng)出血及炎性病變。符合上述條件案例共34例，年齡16-45歲之間。 對照組：來自湖北同濟法醫(yī)學(xué)司法鑒定中心親子鑒定無親緣關(guān)系的個體（血樣）50例，年齡18~43歲之間，無暈厥和心律失常病史，體格檢查正常。 2.確定研究SCN5A基因的多態(tài)位點：根據(jù)Iwasa、Chen及周峰報道的SCN5A基因的多態(tài)位點選取H558R、C5457T為觀察位點。 3.不明原因SCD組選取蠟塊或者保存血液標(biāo)本，應(yīng)用DNA提取試劑盒提取基因組總DNA；健康對照組取外周血白細胞，采用常規(guī)酚-氯仿法提取基因組總DNA。 4.PCR擴增，根據(jù)NCBI（http://www.ncbi.ie/），獲取SCN5A基因(GeneballkNM000335)序列，利用primer primers軟件設(shè)計相應(yīng)的引物，擴增包含H558R、C5457T多態(tài)位點的片段。 5.所有研究樣本的多態(tài)位點及基因型的檢測均采用限制性片段長度的多態(tài)性(RFLP)的方法進行分析，以McrI、AcyI限制性內(nèi)切酶進行酶切。 6.統(tǒng)計分析采用SPSS18.0軟件。數(shù)據(jù)計量資料用均數(shù)±標(biāo)準差表示，兩組間比較計數(shù)資料采用x2檢驗，P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 【結(jié)果】 1.SCN5A基因位點H558R及C5457T在中國健康人群中存在有多態(tài)性，其少見等位基因頻率分別為9.0%、39.0%。 2.通過單變量分析，不明原因SCD組SCN5A的2個SNP位點（H558R，C5457T）與健康對照組相比，多態(tài)位點H558R的基因型頻率存在明顯差異（P=0.04）；多態(tài)位點C5457T的基因型頻率無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.961）。 【結(jié)論】 SCN5A多態(tài)位點H558R可能與不明原因SCD發(fā)生相關(guān)；其H等位基因可能是SCD的保護基因；R等位基因可能是SCD發(fā)生的易患基因。法醫(yī)病理學(xué)檢查中，檢測H558R對SCD的死因診斷有較好的參考意義。
【關(guān)鍵詞】：法醫(yī)病理學(xué) 不明原因心臟性猝死 SCN5A 限制性片段長度多態(tài)性
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：D919.1
【目錄】：

• 主要縮略語英文對照6-7
• 摘要7-11
• Abstract11-14
• 前言14-17
• 材料與方法17-24
• 實驗結(jié)果24-28
• 討論28-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻33-39
• 綜述39-52
• 參考文獻45-52
• 碩士在讀期間發(fā)表及待發(fā)表的文章52-53
• 致謝53

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 沈憶文,趙子琴,張其英,薛愛民,陳龍,顧云菊,李中;猝死156例分析[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2002年02期

2 周峰;張坤水;薛天羽;李杰;唐雙柏;成建定;;中國南方漢族人群SCN5A基因H558R、R1193Q、C5457T及3666+69G＞C多態(tài)性與青壯年猝死綜合征的相關(guān)性研究[J];國際內(nèi)科學(xué)雜志;2008年11期

3 楊昭慶,洪坤學(xué);單核苷酸多態(tài)性的研究進展[J];國外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊;2000年01期

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本文編號：1048121