【摘要】：大蒜自古以來就具有藥食兩用的功能,《本草拾遺》和明朝李時珍著《本草綱目》等對大蒜的藥用特性都具詳細記載�，F(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn),大蒜在防治心血管疾病、抗炎、抗微生物和抗腫瘤等方面具備顯著功效。進一步的研究發(fā)現(xiàn),其主要活性物質(zhì)是大蒜中的蒜氨酸。蒜氨酸在大蒜體內(nèi)是一種相對穩(wěn)定的化合物,在大蒜組織破碎的情況下蒜氨酸與蒜酶接觸,觸發(fā)系列酶解反應,形成含硫化合物大蒜素等。后者很不穩(wěn)定,常溫條件下即降解為多種不具活性的物質(zhì)。本文從新鮮大蒜出發(fā),研究了高效獲得大量高純度蒜氨酸產(chǎn)品的工藝方法,以期對工業(yè)化生產(chǎn)提供參考。首先對高效液相測定蒜氨酸的方法進行了修訂,確定了符合本實驗的高效液相色譜條件為:流動相為乙腈:水(55:45),在210nm紫外吸收波長下檢測,柱溫控制在室溫,流速為1.0mL/min,進樣量為20μL。詳細考察了蒜氨酸的提取工藝條件。第一個內(nèi)容是對大蒜的預處理工藝實驗條件的考察;第二個內(nèi)容是對蒜氨酸的提取工藝條件考察。預處理采用正交試驗法考察了微波滅酶處理下滅酶功率和滅酶時間對蒜氨酸酶滅活的影響,確定了在中火條件下滅酶60s的最佳條件。使用20%乙醇作為提取溶劑輔以超聲波提取技術,通過單因素試驗和響應面法優(yōu)化得到了蒜氨酸的最佳提取條件:料液比為1:4.5,超聲功率為67W,超聲時間為1.7 h。通過對該工藝進行驗證,發(fā)現(xiàn)蒜氨酸的提取率最高可達到91.8%。對蒜氨酸的分離純化進行了研究。采用層析柱的方法對蒜氨酸進行分離純化,考察了使用732型強酸性陽離子樹脂對蒜氨酸進行分離的條件。最終確定了以下工藝參數(shù):上樣液濃度控制在3mg/ml左右,上樣液流速為1.0 BV/h,該條件下蒜氨酸的吸附率可達到821.3mg/100g;確定氨水作為洗脫液,洗脫液濃度為0.30mol/L,洗脫液流速為1.0 BV/h。通過工藝驗證,該分離條件下蒜氨酸純度可達到64.3%。在等電點調(diào)節(jié)結合結晶和重結晶的方法對蒜氨酸進行精制�？疾炝私Y晶溫度和溶劑對蒜氨酸結晶的影響。發(fā)現(xiàn)蒜氨酸在40℃條件下以60%乙醇溶液進行結晶,靜置一定時間。重復進行三次,獲得純度可達到92%以上的蒜氨酸精制品。對蒜氨酸終產(chǎn)品分別采用了高效液相色譜法、紅外光譜法和質(zhì)譜法進行分析鑒別。結果都一致地認為:通過以上工藝方法獲得的蒜氨酸產(chǎn)品在結構上與標準品一致。
【學位授予單位】：沈陽化工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R284.2
【圖文】：

RAW264.7 細胞的炎癥反應的抑制作用進行了研究。試驗通過誘導一氧化氮合酶（iNOS）和環(huán)氧合酶-2（COX-2）的基因和蛋白質(zhì)表達來調(diào)節(jié)一氧化氮（NO）、活性氧（ROS）和炎癥相關細胞因子的產(chǎn)生。結果發(fā)現(xiàn)蒜氨酸可以通過下調(diào) NF-κB 的活性來抑制 iNOS 和 COX-2 的表達，最終達到抗炎的效果。Shi 等[9]通過 DSS 誘導小鼠炎癥模型對蒜氨酸的抗炎活性進行了深入的研究。試驗采用 qRTPCR 法檢測檢測炎癥因子 mRNA 表達水平，和 Western blotting 法檢測炎癥因子蛋白表達或激酶活化情況。結果表明口服蒜氨酸組小鼠的 NO、MDA 和 MPO 含量均有所降低，iNOS、炎癥因子、MAPK 及 PPAR-γ磷酸化表達水平均受到抑制。進一步研究發(fā)現(xiàn)蒜氨酸是通過調(diào)節(jié) p38 和 JNK 的磷酸化來誘導 AP-1 、NF-κB 和 STAT-1 的活性的。植物學研究表明，蒜氨酸在大蒜體內(nèi)的生物合成途徑認為主要有以下兩條：其一是谷胱甘肽中的半胱氨酸被烯丙基化，然后經(jīng)過一系列步驟，生成蒜氨酸。在這個過程中同時也伴隨著谷胱甘肽的降解；另一條途徑是谷胱甘肽不直接參與反應，而是直接半胱氨酸烯丙基化，隨后生成 S-烯丙基半胱氨酸，最后經(jīng)過氧化生成蒜氨酸[10-11]。其主要步驟如圖 1-1。

圖 1-2 蒜氨酸酶解轉(zhuǎn)化圖Fig.1-2 Enzymatic conversion of alliin蒜氨酸（S-烯丙基-L-半胱氨酸亞砜）是大蒜中含量最高的具備一定藥理活性的化合物，極易溶于水，不溶于純無水乙醇、氯仿、丙酮、乙醚和苯。蒜氨酸具備旋光性，在水溶液中的旋光度為右旋 63.5 度。其等電點為 PI=48.6,在調(diào)節(jié)蒜氨酸溶液pH 值到等電點，改變?nèi)軇O性的條件下可以得到白色針簇狀結晶�？捎糜趯λ獍彼岬木芠20]。1.2 蒜氨酸的含量檢測方法研究現(xiàn)狀在蒜氨酸的研究過程中，國內(nèi)外對蒜氨酸的定性定量方法進行了較為廣泛的開發(fā)。其中具有相對簡單易行的定硫法以及現(xiàn)在普遍應用的色譜法。色譜法作為新興的高效精確的檢測手段，其應用被廣泛普及。根據(jù)色譜柱交換分配原理的不同，將色譜法進一步細分為反向高壓液相色譜法、高效離子交換色譜法、高效毛細管電泳法以及 HPLC-MS 連用法。在對色譜檢測方法的開發(fā)過程中，逐步得到完善。開發(fā)了

沈陽化工大學碩士論文 實驗結果與分析第三章 實驗結果與分析3.1 高效液相定量檢測蒜氨酸實驗結果3.1.1 流動相的優(yōu)化與選擇結果分別使用甲醇：水=30:70、乙腈：水=55:45、乙腈：甲醇：水=65:20:15 和甲醇：磷酸緩沖液（pH=5.5）=10:90 四中流動相進行試驗，實驗結果分別為圖 3-1、圖 3-2、圖 3-3 和圖 3-4。

【參考文獻】

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本文編號：2753876