目的 在pMDT-18克隆質(zhì)粒載體的基礎(chǔ)上,構(gòu)建實用型的能夠穩(wěn)定轉(zhuǎn)染甲型流感病毒RNPs并且可體外定量檢測的RNA聚合酶I熒光報告系統(tǒng)。方法 設(shè)計并人工合成人RNA聚合酶I啟動子、小鼠終止子序列及毒株A/Puerto Rico/8/34的NP基因的UTR,利用嵌合PCR方法將綠色熒光蛋白（eGFP）基因與上述元件體外連接,形成小鼠終止子-3’UTR-eGFP-5’UTR-人RNA聚合酶I啟動子報告元件,將報告元件克隆至不攜帶任何啟動子的pMDT-18質(zhì)粒載體中,構(gòu)建實用型RNA聚合酶I熒光報告質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達流感病毒A/Puerto Rico/8/34 RNPs的HeLa細胞,觀察熒光表達及測定相對熒光度。結(jié)果 該系統(tǒng)在轉(zhuǎn)染HeLa細胞后,無任何熒光產(chǎn)生,而轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達流感病毒A/Puerto Rico/8/34 RNPs的HeLa細胞后24 h、36 h、48 h和60 h均有熒光產(chǎn)生,強度隨時間逐漸增強。結(jié)論 成功構(gòu)建了實用型RNA聚合酶I熒光報告系統(tǒng),有助于提高流感病毒反向遺傳系統(tǒng)的拯救效率、研究流感病毒聚合酶功能以及探索UTR多態(tài)性對特定基因的復(fù)制或轉(zhuǎn)錄的影響機制,為流感工作... 

【文章來源】：國際病毒學雜志. 2020,(01)

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【參考文獻】：
期刊論文
[1]穩(wěn)定表達H1N1流感病毒核糖核蛋白的Hela細胞株的建立[J]. 丁小滿,王昕,俞若曦,彭博,武偉華,劉慧,耿一介,董方圓,俞慕華,房師松.  熱帶醫(yī)學雜志. 2016(02)
[2]流感病毒兩種反向遺傳學操作系統(tǒng)的初步構(gòu)建[J]. 連孟洋,王昕,彭博,武偉華,劉慧,董方圓,丁小滿,房師松,鄭青.  中國人獸共患病學報. 2015(05)



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