At GDPD-Like3是編碼甘油磷酸二酯磷酸二酯酶（GDPD）類似基因,擬南芥該家族基因At GDPD-Like3突變體shv3存在嚴(yán)重的根毛發(fā)育缺陷。為了鑒定At GDPD-Like3關(guān)鍵氨基酸位點,我們構(gòu)建S⁵³⁸A、V⁵⁵⁶A和D⁶²⁸A單點突變At GDPD-Like3,分別轉(zhuǎn)化atgdpdl3突變體并觀察其恢復(fù)根毛缺陷程度。結(jié)果顯示V⁵⁵⁶A、D⁶²⁸A位點突變At GDPD-Like3完全恢復(fù)atgdpdl3根毛生長缺陷表型,但S⁵³⁸A突變At GDPD-Like3只是部分恢復(fù)根毛缺陷。這些結(jié)果表明Ser538是At GDPD-Like3較為關(guān)鍵的氨基酸位點,突變影響其蛋白質(zhì)功能行使,同時暗示At GDPD-Like3還存在其它的關(guān)鍵氨基酸位點。此研究結(jié)果為進(jìn)一步探究At GDPD-Like3蛋白功能行使的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

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圖1 At GDPD-Like3及其同源蛋白氨基酸序列比對

AtGDPD-Like3編碼759個氨基酸，含有GDPD-Like結(jié)構(gòu)域。選用大豆，毛果楊，油菜，甘藍(lán)，高粱，玉米等22個物種的AtGDPD-Like3同源基因，推測氨基酸序列一致性比對顯示Leu521、Ser538、Leu544、Val556、Glu621、Asp628是保....

圖4 At GDPD-Like3的Ser538、Val556、Asp628位點對根毛表型的作用

用浸花法對atgdpdl3突變體植株進(jìn)行轉(zhuǎn)化后，獲得轉(zhuǎn)FLAG-AtGDPDL3-S538A、-V556A和-D628A、FLAG-AtGDPDL3抗性植株4、4、3和4株系。以轉(zhuǎn)基因植株cDNA為模板，用引物AtGDPDL3-RT-up/down進(jìn)行半定量RT-PCR分析，結(jié)....

圖2 At GDPD-Like3單點S538A、V556A和D628A突變的載體構(gòu)建

圖1AtGDPD-Like3及其同源蛋白氨基酸序列比對圖3FLAG-AtGDPDL3-S538A、-V556A、-D628A和FLAG-AtGDPDL3轉(zhuǎn)基因分子鑒定

圖3 FLAG-AtGDPDL3-S538A、-V556A、-D628A和FLAG-AtGDPDL3轉(zhuǎn)基因分子鑒定

圖2AtGDPD-Like3單點S538A、V556A和D628A突變的載體構(gòu)建2.2S538A、V556A和D628A單位點突變的構(gòu)建

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