發(fā)布時間：2025-04-01 00:34

　　 牛乳鐵蛋白（LfcinB）是一種陽離子抗菌肽,具有抗細菌、抗腫瘤等多種生物學活性.本文探討了利用SUMO（Small Ubiquitin-Related Modifier）融合標簽在大腸桿菌系統(tǒng)中通過LfcinB串聯(lián)表達策略制備重組LfcinB的方法.結果顯示,大于90%的SUMO-（LfcinB）_n蛋白以可溶形式表達于BL21（DE3）細胞中;SUMO-（LfcinB）₂的表達量高于SUMO-LfcinB和SUMO-（LfcinB）₃.通過SUMO特異性蛋白酶切除SUMO標簽,羥胺釋放單體,得到純化的重組LfcinB,產(chǎn)率約為15 mg/L.生物活性結果表明,重組LfcinB具有一定的抗菌和抗腫瘤活性.本研究為結合SUMO標簽與串聯(lián)表達策略大量制備獲得具有生物學功能的重組抗菌肽提供了一種有效的方法.

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

圖2 重組表達菌生長曲線及重組蛋白表達分析

為提高抗菌肽的表達產(chǎn)量,通常采用串聯(lián)多聚體形式來代替單體形式進行抗菌肽的融合表達[9,13].pSUMO是本實驗室前期構建的一個帶有SUMO標簽的原核表達質粒,具有BamHⅠ、XbaⅠ、BglⅡ等多克隆酶切位點.將擴增得到的LfcinB基因片段和pSUMO經(jīng)BamHⅠ和Hin....

圖1 pSUMO-(LfcinB)n表達質粒的構建

圖2重組表達菌生長曲線及重組蛋白表達分析2.2SUMO-(LfcinB)n重組蛋白的表達

圖3 SUMO-(LfcinB)n蛋白純化與鑒定的SDS-PAGE分析

由于抗菌肽自身的抗菌性,通常采用融合表達策略以降低潛在的宿主細胞毒性.然而,并非所有的融合標簽都能有效避免宿主細胞毒性,例如GST標簽并不能有效避免宿主細胞毒性[15].本研究發(fā)現(xiàn)SUMO標簽融合能在一定程度上避免(LfcinB)n宿主細胞毒性,并且影響的程度與串聯(lián)拷貝數(shù)有關....

圖5 重組LfcinB對金黃色葡萄球菌的抗菌檢測

經(jīng)親和層析純化得到的SUMO-(LfcinB)n融合蛋白用SUMO酶在30℃酶切30min,以釋放抗菌肽(LfcinB)n.Tricine-SDS-PAGE測定SUMO酶的酶切作用,結果如圖4所示.可見SUMO酶能高效切割SUMO-(LfcinB)n融合蛋白,釋放(Lf....

本文編號：4038665