基因拆分技術(shù)（gene splitting）能有效避免轉(zhuǎn)基因作物中目標性狀向環(huán)境中的逃逸。為了利用基因拆分技術(shù)培育新型耐草甘膦（glyphosate）的轉(zhuǎn)aroA_A1501基因水稻（Oryza sativa）,本研究依據(jù)aroA_A1501蛋白的高級結(jié)構(gòu)篩選出13個可能的拆分位點,PCR的方法將aroA_A1501拆分成N端（An）和C端（Ac） 2部分,并分別與Ssp DnaE intein的N端（In）和C端（Ic）結(jié)合形成融合基因An-In和Ic-Ac。以pETDuet-1為基礎載體,構(gòu)建了單獨含有An-In、Ic-Ac和同時含有An-In/Ic-Ac的原核表達載體共40個。將構(gòu)建好的原核表達載體導入營養(yǎng)缺陷型大腸桿菌（Escherichia coli）菌株ER2799中,通過功能互補試驗證明aroA_A1501在140/141、224/225和230/231位點處拆分后,拆分開的蛋白在蛋白內(nèi)含肽intein介導下重新組裝成有功能的完整蛋白。草甘膦耐受性試驗證明230/231是最適宜的拆分位點,拆分...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株、載體和試劑
    1.2 引物合成
    1.3 融合基因的克隆
    1.4 原核表達載體的構(gòu)建
    1.5 ER2799功能互補試驗
    1.6 草甘膦耐受性檢測
    1.7 RT-PCR
    1.8 熒光定量PCR
    1.9 ELASA測定酶活
2 結(jié)果與分析
    2.1 耐除草劑基因aroAA1501可拆分位點的確定
    2.2 不同位點拆分對重組蛋白功效的影響
    2.3 重組ER2799菌株中外源基因的表達分析
3 討論
4 結(jié)論



本文編號：4036509