目的:探討線粒體對血小板膜蛋白GPIbα酶切的調(diào)控作用和機制。方法:分離健康志愿者外周靜脈血血小板,選擇破壞或保護血小板線粒體的功能的羰基氰-3-氯苯腙(CCCP)和環(huán)胞素A(CsA)、抑制膜蛋白GPIbα酶切的金屬蛋白酶抑制劑GM6001、降低細胞內(nèi)活性氧(ROS)水平的抗氧化劑NAC分別與洗滌血小板共同孵育,應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測受刺激后血小板線粒體功能的變化對膜蛋白GPIbα酶切的影響。結(jié)果:CCCP誘導(dǎo)線粒體內(nèi)膜兩側(cè)膜電位去極化,直接破壞線粒體的呼吸功能;血小板GPIbα的酶切檢測發(fā)現(xiàn)GPIbα發(fā)生酶切,實驗結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。這提示當(dāng)血小板線粒體功能受損傷時,會伴隨出現(xiàn)GPIbα酶切現(xiàn)象;用CsA保護線粒體功能后,血小板GPIbα酶切現(xiàn)象被明顯的抑制,實驗結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義;而GM6001可以抑制GPIbα的酶切現(xiàn)象,但不影響線粒體的功能,實驗結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。這提示,血小板GPIbα的酶切在線粒體受到了調(diào)控。酶切調(diào)控酶ADAM17位于線粒體下游的信號通路上,用NAC抑制細胞內(nèi)出現(xiàn)的氧化損傷,檢測血小板受體的酶切變化發(fā)現(xiàn),NAC可以有效地抑制血小板受體的酶切現(xiàn)象,并呈濃度梯度依...

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    入組樣本
    試劑與儀器
    洗滌血小板的制備
    血小板P-selectin表達的流式細胞術(shù)分析
    血小板線粒體膜電位變化的流式細胞術(shù)分析
    血小板膜糖蛋白GPIbα酶切的流式細胞術(shù)分析
    統(tǒng)計學(xué)分析
結(jié)果
    GPIbα酶切與線粒體的相關(guān)性
    線粒體對GPIbα酶切作用
    線粒體下游Caspase-3蛋白對GPIbα酶切的作用
    線粒體影響GPIbα酶切的分子機制
討論



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