【目的】克隆并原核和真核表達(dá)無(wú)特定病原(SPF)雞白細(xì)胞介素2(ChIL-2)和白細(xì)胞介素18(ChIL-18)基因,為后續(xù)開(kāi)展ChIL-2和ChIL-18蛋白功能、生物學(xué)活性及聯(lián)合應(yīng)用的免疫佐劑研究打下基礎(chǔ)�！痉椒ā窟\(yùn)用RT-PCR擴(kuò)增ChIL-2和ChIL-18基因,并進(jìn)行測(cè)序和序列比對(duì)分析,分別構(gòu)建其重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18及重組真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18,并將重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,將重組真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18分別轉(zhuǎn)染非洲綠猴腎(Vero)細(xì)胞。【結(jié)果】重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),其表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE和Western blotting分析,結(jié)果表明融合蛋白ChIL-2和ChIL-18在大腸桿菌中獲得高效表達(dá),表達(dá)的蛋白分子量分別為27和23 kD;重組真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
        1.1.1 菌種和克隆載體
        1.1.2 主要儀器設(shè)備
        1.1.3 工具酶和試劑
    1.2 試驗(yàn)方法
        1.2.1 引物合成
        1.2.2 無(wú)特定病原(SPF)雞脾淋巴細(xì)胞分離培養(yǎng)及總RNA提取
        1.2.3 ChIL-2和ChIL-18基因克隆與鑒定
        1.2.4 ChIL-2和ChIL-18基因原核表達(dá)
        1.2.5 ChIL-2和ChIL-18基因真核表達(dá)
2 結(jié)果與分析
    2.1 ChIL-2和ChIL-18基因克隆結(jié)果
        2.1.1 ChIL-2和ChIL-18基因PCR擴(kuò)增結(jié)果
        2.1.2 重組質(zhì)粒pMD19-T-ChIL-2和pMD19-T-ChIL-18酶切鑒定結(jié)果
        2.1.3 ChIL-2和ChIL-18基因的測(cè)序
    2.2 ChIL-2和ChIL-18蛋白的原核表達(dá)情況
        2.2.1 重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET32a-ChIL-2和pET28a-ChIL-18鑒定結(jié)果
        2.2.2 融合蛋白ChIL-2和ChIL-18的誘導(dǎo)表達(dá)情況
    2.3 ChIL-2和ChIL-18基因的真核表達(dá)情況
        2.3.1 重組真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-ChIL-2和pVAX1-ChIL-18鑒定結(jié)果
        2.3.2 融合蛋白ChIL-2和pVAX1-ChIL-18在Vero細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況
3 討 論
4 結(jié) 論



本文編號(hào)：4018696