ZTL基因是控制植物生理節(jié)律和開花的關(guān)鍵因子,其表達(dá)受光周期和生物鐘的調(diào)控。為揭示高羊茅ZTL(命名為FeZTL)的生物學(xué)功能,采用RACE技術(shù)克隆得到FeZTL基因的全長(zhǎng)cDNA序列并進(jìn)行表達(dá)分析和亞細(xì)胞定位。結(jié)果顯示, FeZTL基因cDNA全長(zhǎng)1 785 bp,有一個(gè)長(zhǎng)度為1 344 bp的開放閱讀框,編碼447個(gè)氨基酸;FeZTL與禾本科植物的同源蛋白親緣關(guān)系較近。其中,與二穗短柄草、節(jié)節(jié)麥、短藥野生稻ZTL氨基酸序列相似性分別為89.69%、89.29%、83.61%。將構(gòu)建的目的蛋白與GFP融合表達(dá)載體經(jīng)共聚焦顯微鏡觀察,發(fā)現(xiàn)FeZTL蛋白主要定位在細(xì)胞核。實(shí)時(shí)熒光定量分析葉片中的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)FeZTL基因在不同光照處理下的表達(dá)都呈現(xiàn)出晝夜振蕩節(jié)律。由此得出, FeZTL基因的表達(dá)受生物鐘和光周期的調(diào)控。

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圖2FeZTL基因的核苷酸序列及氨基酸序列

圖1FeZTL基因不同片段的PCR結(jié)果圖3高羊茅與其他植物中已報(bào)道或預(yù)測(cè)的ZTL的系統(tǒng)發(fā)育樹

圖3高羊茅與其他植物中已報(bào)道或預(yù)測(cè)的ZTL的系統(tǒng)發(fā)育樹

圖2FeZTL基因的核苷酸序列及氨基酸序列2.3FeZTL蛋白的亞細(xì)胞定位

圖4FeZTL的亞細(xì)胞定位

由圖6-A可知,長(zhǎng)日照轉(zhuǎn)連續(xù)光照(LD–LL)下,FeZTL基因的表達(dá)在首日ZT0、ZT12出現(xiàn)兩個(gè)表達(dá)峰值。次日的表達(dá)模式與LD條件下的表達(dá)模式(圖5-A)基本相近,在ZT0時(shí)有個(gè)較小的峰值出現(xiàn),在ZT8時(shí)出現(xiàn)表達(dá)最高峰。從圖6-B可見,長(zhǎng)日照轉(zhuǎn)連續(xù)黑暗(LD–DD)下,FeZ....

圖1FeZTL基因不同片段的PCR結(jié)果

對(duì)FeZTL基因編碼的氨基酸序列與GenBank收錄的ZTL同源序列比對(duì)后構(gòu)建進(jìn)化樹(圖3),結(jié)果發(fā)現(xiàn)FeZTL的氨基酸序列與二穗短柄草(XP＿003573580.1)、節(jié)節(jié)麥(XP＿020170218.17)和短藥野生稻(XP＿01560577.1)的ZTL氨基酸序列相似性分別....

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