小RNA是重要的基因調(diào)控分子。自RNA干擾現(xiàn)象被發(fā)現(xiàn)以來,在秀麗隱桿線蟲中發(fā)現(xiàn)了多種小RNA。其中,piRNAs(Piwi-interacting RNAs)是一種在動物中高度保守的小RNA。在多種動物中,piRNA抑制轉(zhuǎn)座子與非我基因的表達,維持基因組穩(wěn)定性,是配子形成的重要因素。在秀麗隱桿線蟲中,piRNA開啟了基因沉默的代際遺傳。大多數(shù)piRNA前體從基因組上含有上千個獨立的piRNA轉(zhuǎn)錄單元的兩個基因簇中轉(zhuǎn)錄。之后,piRNA轉(zhuǎn)錄本經(jīng)過一系列加工過程,并結(jié)合到Piwi蛋白上。盡管我們已經(jīng)知道一些基因參與piRNA的生成過程,但是,piRNA的轉(zhuǎn)錄與加工過程并不完全明朗。本文利用遺傳學,細胞生物學,分子生物學中的多種技術(shù)來研究秀麗隱桿線蟲中的piRNA生成機制。首先,我們利用MosSCI技術(shù)構(gòu)建了單拷貝GFP::3xFLAG標記的TOFU(Twenty-One-u Fouled Ups)基因的轉(zhuǎn)基因線蟲。我們發(fā)現(xiàn)TOFU-1,TOFU-2和TOFU-7定位在生殖腺細胞質(zhì)中。TOFU-3,TOFU-4和TOFU-5在生殖腺細胞核中與piRNA生成因子PRDE-1蛋白共定位。利用顯微...

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1.1線蟲的生命周期((Corsietal.,2015)

圖注：秀麗隱桿線蟲的生命周期。順時針方向依次為成年線蟲，蟲卵，Ｌ１時期幼蟲，Ｌ２時??期幼蟲，Ｌ３時期幼蟲，Ｄａｒｅｒ蟲，Ｌ４時期幼蟲在體式解剖顯微鏡下的形態(tài)。并列的??上下兩個上為雌雄同體線蟲，下為雄蟲。??２??

圖１．６在ＲＮＡ干擾遺傳中ＷＡＧＯ－４和ＨＲＤＥ－１的不同角色（Ｘｕ?ｅｔ?ａＬ，?２０１８ａ）??圖注：ＧＦＰ基因ＲＮＡ干擾的表型

會延續(xù)到子代。而／ｊｒ也－／突變體中，ＧＦＰ在Ｆ１代卵中處于沉默狀態(tài)，在Ｌａｒｖａ丨??幼蟲中微量表達。在ｈｙ＾ｏ－４突變體中，ＧＦＰ在Ｆ１代的卵中就開始重新表達（如??圖１．６Ａ）。這說明ＨＲＤＥ－丨蛋白可能不參與到ＲＮＡ干擾在Ｆ１代卵和幼蟲中的沉??默，而ＷＡＧ０－４蛋白參與....

圖１．７秀麗隱桿線蟲中ｐｉＲＮＡ與ＰＲＧ?

會延續(xù)到子代。而／ｊｒ也－／突變體中，ＧＦＰ在Ｆ１代卵中處于沉默狀態(tài)，在Ｌａｒｖａ丨??幼蟲中微量表達。在ｈｙ＾ｏ－４突變體中，ＧＦＰ在Ｆ１代的卵中就開始重新表達（如??圖１．６Ａ）。這說明ＨＲＤＥ－丨蛋白可能不參與到ＲＮＡ干擾在Ｆ１代卵和幼蟲中的沉??默，而ＷＡＧ０－４蛋白參與....

圖1.8果蠅中的piRNA生成通路((CzechetaL,2018)

－－１．７）?（Ｂｕｃｋｌｅｙ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１２；?Ｄａｓ?ｅｔ?ａｌ．，?２００８；?Ｌｅｅ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１２；?Ｍａｏ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１５；??ＳｈｉｒａｙａｍａｅｔａＬ，?２０１２）。而部分的內(nèi)源靶標基因與ＣＳＲ－１的部分靶標基因重疊，??ＰＲＧ－１抑....

本文編號：3989398