背景金黃色葡萄球菌腸毒素(Staphylococcal Enterotoxins,SEs)是一類具有較強(qiáng)超抗原活性的蛋白。SEs作為典型的超抗原,在臨床上具有顯著的抗腫瘤活性,但其所引起的發(fā)熱及致嘔吐毒性等副作用嚴(yán)重限制了其在惡性腫瘤生物治療中的廣泛應(yīng)用。而金黃色葡萄球菌類腸毒素(Staphylococcal Enterotoxin-like,SEls)的發(fā)現(xiàn)為腫瘤的免疫治療提供了潛在的候選生物制劑,其具有與SEs相似的結(jié)構(gòu)及其超抗原活性,但無(wú)致嘔吐毒性或僅具有較低的嘔吐毒性。目的1.構(gòu)建金黃色葡萄球菌類腸毒素Q(SElQ)的原核表達(dá)載體。2.探討SElQ對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞以及人外周血單核細(xì)胞(Peripheral Blood Mononuclear Cells,PBMCs)活化的影響。3.檢測(cè)SElQ的體內(nèi)外抗腫瘤活性。方法1.通過(guò)PCR技術(shù)克隆獲得selq基因,雙酶切后連接至pET28a原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化E.coli DH5α菌株后進(jìn)行菌落PCR及質(zhì)粒雙酶切驗(yàn)證,隨后轉(zhuǎn)化E.coli BL21菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。通過(guò)BeaverBeads?IDA-Nickel試劑盒純化SElQ蛋白。2...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1SElQ原核表達(dá)載體構(gòu)建及鑒定圖注：A：pET-28a(+)載體圖；B：selq基因擴(kuò)增的引物；C：SElQPCR擴(kuò)增產(chǎn)物片段；D：菌落PCR（泳道1和2）；pET28a-SElQ的雙酶切片段（泳道3和4）；E：SElQ蛋白的表達(dá)：加入1mMIPTG

圖1SElQ原核表達(dá)載體構(gòu)建及鑒定圖注：A：pET-28a(+)載體圖；B：selq基因擴(kuò)增的引物；C：SElQPCR擴(kuò)增產(chǎn)物片段；D：菌落PCR（泳道1和2）；pET28a-SElQ的雙酶切片段（泳道3和4）；E：SElQ蛋白的表達(dá)：加入1mMIPTG在30℃誘導(dǎo)5h....

圖2SElQ蛋白純度的檢測(cè)Fig.2ThepurityofSElQwasdeterminedbysilverstaining

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文h、1h、2h、3h、4h和5h，每隔1h收集1mL菌離心；加入100μLPBS重懸沉淀后后加入SDSSDS-PAGE電泳，通過(guò)考馬斯亮藍(lán)和快速銀染試定結(jié)果如圖1E所示，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后可高效獲得與預(yù)期結(jié)果一致。隨后用BeaverBead....

圖3SElQ對(duì)小鼠脾淋巴和人PBMCs的影響

圖3SElQ對(duì)小鼠脾淋巴和人PBMCs的影響圖注：A-B：小鼠脾淋巴細(xì)胞和人PBMCs分別用不同濃度的SElQ刺激48h，用MTT法檢測(cè)增殖能力（n=5）。紅色虛線表示陰性對(duì)照組（BSA處理）的PI。*P<0.05；**P<0.01。Fig.3Effec....

圖4SElQ刺激后CD4+和CD8+T細(xì)胞的增殖圖注：A：流式細(xì)胞儀檢測(cè)SElQ（1μg/mL）刺激后小鼠脾淋巴細(xì)胞中CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞的百分比

36圖4SElQ刺激后CD4+和CD8+T細(xì)胞的增殖A：流式細(xì)胞儀檢測(cè)SElQ（1μg/mL）刺激后小鼠脾淋巴細(xì)胞中CD4+和CD8+T淋巴細(xì)比。B-C：在SElQ刺激和未刺激的脾淋巴細(xì)胞中，CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞的百分比和數(shù)據(jù)代表至少三個(gè)獨(dú)立....

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