目的:構(gòu)建鋅指蛋白Slug基因的慢病毒真核表達(dá)載體,研究Slug對ZR75-1乳腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及遷移的影響。方法:以乳腺文庫為模板,PCR擴(kuò)增Slug全長編碼序列,將其插入pCDH表達(dá)載體,構(gòu)建pCDH-Slug真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,Western印跡檢測Slug的表達(dá);將重組質(zhì)粒包裝慢病毒感染ZR75-1細(xì)胞,用嘌呤霉素篩選得到穩(wěn)定表達(dá)Slug的ZR75-1乳腺癌細(xì)胞,Western印跡和免疫熒光檢測Slug對E-鈣黏蛋白表達(dá)的影響,采用劃痕實驗檢測Slug在ZR75-1乳腺癌細(xì)胞中對細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果:雙酶切實驗證明Slug慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建成功;Western印跡表明Slug在293T細(xì)胞內(nèi)表達(dá)成功;穩(wěn)定表達(dá)Slug的ZR75-1乳腺癌細(xì)胞株構(gòu)建成功;鏡下觀察發(fā)現(xiàn),穩(wěn)定表達(dá)Slug的ZR75-1乳腺癌細(xì)胞形態(tài)變?yōu)樗笮?Slug在ZR75-1乳腺癌細(xì)胞中可以抑制E-鈣黏蛋白的表達(dá);劃痕實驗發(fā)現(xiàn)Slug在ZR75-1乳腺癌細(xì)胞中可以促進(jìn)細(xì)胞遷移。結(jié)論:構(gòu)建了Slug慢病毒真核表達(dá)載體,Slug可以促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,并通過調(diào)控E-鈣黏蛋白表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞遷移。

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 pCDH-Slug慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建
    1.3 穩(wěn)定克隆篩選
    1.4 Western印跡檢測
    1.5 免疫熒光檢測
    1.6 劃痕實驗
    1.7 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 PCR擴(kuò)增Slug基因
    2.2 pCDH-Slug表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.3 pCDH-Slug在293T細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)鑒定
    2.4 Slug對ZR75-1乳腺癌細(xì)胞形態(tài)的影響
    2.5 Slug對E-鈣黏蛋白表達(dá)的影響
    2.6 Slug對ZR75-1乳腺癌細(xì)胞遷移的影響
3 討論



本文編號：3969516