ABI5及其亞家族成員是ABA信號轉導通路中關鍵的堿性亮氨酸拉鏈類轉錄因子,它們參與并調控了ABA信號轉導途徑中的許多生理生化過程,如種子的發(fā)育與萌發(fā)、各種生物及非生物脅迫的應答等。ABI5的穩(wěn)定性和轉錄激活活性受多種激酶和磷酸酶的調節(jié)。雖然有報道表明,過表達ABI5植株無明顯表型,但是ABI5多個位點的模擬磷酸化突變體在不施加外源ABA的情況下可以激活ABI5控制的下游基因的轉錄表達,因此認為ABI5的磷酸化修飾對ABI5的轉錄激活活性起重要作用。Sn RK2家族被認為介導了ABI5多個位點的磷酸化,其中研究的較為清楚的是Sn RK2.6。我們通過多序列比對分析發(fā)現ABI5上存在多個Sn RK2的潛在磷酸化位點,但是這些潛在磷酸化位點是否均能被Sn RK2.6識別并磷酸化目前還不清楚。AFPs是一類能與ABI5發(fā)生相互作用的蛋白分子。有研究表明AFPs可促進ABI5的泛素化降解,并負向調節(jié)ABA信號。然而AFPs是如何通過促進ABI5蛋白降解來實現對ABA信號的負向調節(jié)的分子機制還不清楚。我們先前的研究表明AFP4/5可介導/激活ABI5的轉錄激活活性。然而,在AFPs上既沒有激酶活...

【文章頁數】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 ABA信號轉導概述
    1.2 ABI5亞家族
    1.3 ABI5相互作用蛋白的研究進展
    1.4 研究目的及內容
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 研究內容
        1.4.3 主要方法
第二章 擬南芥ABI5 亞家族蛋白序列比對及ABI5 雙向缺失突變體的構建
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株與載體
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 培養(yǎng)基、抗生素及常用溶液的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 ABI5保守區(qū)劃分
        2.2.2 引物設計
        2.2.3 ABI5 大片段缺失突變體的PCR擴增
        2.2.4 酵母雙雜交載體p GADT7-m ABI5 重組質粒的構建
        2.2.5 重組載體轉化酵母AH109及轉錄自激活活性的檢測
            2.2.5.1 AH109酵母感受態(tài)細胞的制備及轉化
            2.2.5.2 重組載體在 AH109 細胞中的毒性檢測
    2.3 結果與分析
        2.3.1 ABI5亞家族蛋白序列比對結果及保守區(qū)劃分
        2.3.2 ABI5雙向缺失突變體融合蛋白示意圖
        2.3.3 p GADT7-m ABI5 的構建
        2.3.4 mABI5在酵母中的轉錄自激活活性檢測
第三章 Sn RK2.6在ABI5 上的作用位點分析
    3.1 實驗材料
        3.1.1 菌株與載體
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 儀器
        3.1.4 常用試劑的配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 AH109酵母感受態(tài)細胞的制備
        3.2.2 p GBKT7-Sn RK2.6與p GADT7-m ABI5 共轉化AH109 酵母感受態(tài)細胞
    3.3 結果與分析
        3.3.1 ABI5上潛在磷酸化位點分析
        3.3.2 Sn RK2.6與ABI5 N端及ABI5C端作用的酵母雙雜交結果
        3.3.3 Sn RK2.6與ABI5 N端刪除突變體作用的酵母雙雜交結果
        3.3.4 Sn RK2.6與ABI5 C端刪除突變體作用的酵母雙雜交結果
        3.3.5 Sn RK2.6與ABI5 上刪除單元作用的酵母雙雜交結果
第四章 AFPs在 ABI5 上的相互作用位點分析
    4.1 實驗材料
        4.1.1 菌株與載體
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 儀器
        4.1.4 常用試劑的配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 AH109酵母感受態(tài)細胞的制備
        4.2.2 p GBKT7-AFPs與 p GADT7-m ABI5 共轉化AH109 酵母感受態(tài)細胞
        4.2.3 AFP精確相互作用位點載體p GADT7-m ABI5 的構建
        4.2.4 AFPs序列比對分析
    4.3 結果與分析
        4.3.1 AFPs序列比對
        4.3.2 AFPs與 ABI5 N端及ABI5C端作用的酵母雙雜交結果
        4.3.3 AFPs與 ABI5 N端刪除突變體作用的酵母雙雜交結果
        4.3.4 AFPs與 ABI5 C端刪除突變體作用的酵母雙雜交結果
        4.3.5 AFPs與 ABI5 上各刪除單元相互作用的酵母雙雜交結果
        4.3.6 AFPs與 ABI5上PTFGEMTLEDFLVK片段的酵母雙雜交結果
        4.3.7 AFPs與 ABI5 片段點突變體的相互作用
第五章 討論
第六章 結論與展望
    6.1 結論
    6.2 展望
參考文獻
致謝



本文編號：3969202