血紅素(Heme)是含有鐵離子的卟啉化合物,作為過氧化物酶等多種酶的輔因子,具有多種重要的生物學功能。本論文旨在探究大腸桿菌(Escherichia coli,E.coli)血紅素前體轉(zhuǎn)運蛋白的表達對于血紅素合成代謝的影響。通過構(gòu)建前體轉(zhuǎn)運蛋白基因rhtA與tolC缺失菌株,分析血紅素及其前體含量的變化;基于轉(zhuǎn)錄組以及qRT-PCR實驗結(jié)果,闡述缺失菌株中血紅素合成的調(diào)控機制。主要研究結(jié)果如下:(1)血紅素前體轉(zhuǎn)運蛋白的表達調(diào)控。通過Red同源重組的方式,構(gòu)建大腸桿菌rhtA缺失、tolC缺失和tolC、rhtA雙缺失菌株WT-R、WT-T與WT-RT。通過一步克隆方式構(gòu)建rhtA、tolC與雙缺失基因的回補菌株pET-R、pET-T與pRT-TR。將過表達hemA基因的質(zhì)粒pEA分別轉(zhuǎn)入WT、WT-R、WT-T與WT-RT中,得到菌株pEA、pEA-R、pEA-T與pEA-RT。生長曲線測定結(jié)果表明tolC、rhtA缺失對于E.coli生長沒有顯著影響。(2)血紅素前體轉(zhuǎn)運蛋白表達對于血紅素合成的影響。與原菌株WT相比,WT-R胞外5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic ...

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【學位級別】：碩士

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圖1-1血紅素結(jié)構(gòu)圖

合物的典型代表，其卟啉環(huán)中為C34H32N4FeO4，分子質(zhì)量為熔點約在300℃以上，不溶于鈉的水溶液或熱醇中[2]。種生物學功能，可以作為生）的輔因子，在轉(zhuǎn)錄和翻譯水以及細胞分化[3]。在有氧以及Heme參與了生物細胞中許5,6]。對原核生物而言，Heme更[9,10]....

圖1-3ALA合成途徑Fig.1-3ThesyntheticpathwayofALA

生物體內(nèi)通常有兩條ALA合成途徑：C4途徑（theSheminpathw以及C5途徑[29,30,31]。其中，C4途徑中的5-氨基乙酰丙酸合成酶（5-aminolevulinicsynthase，ALAS）以5'-磷酸吡哆醛（5'-pyridoxalpho....

圖1-2ALA結(jié)構(gòu)圖

通常有兩條ALA合成途徑：CC4途徑中的5-氨基乙酰丙酸吡哆醛（5'-pyridoxalphosphatA）和甘氨酸（Glycine）縮合ALA，反應(yīng)涉及三個酶：谷氨酰-tRNA還原酶、谷氨酸-1-半GSA-AM），分別由gltX[35,36]生成谷氨酰-tRNA[4....

圖1-4E.coli中的血紅素合成代謝Fig.1-4ThehemesynthesisE.coli

第一章緒論1.2.2大腸桿菌中Heme的合成如圖1-4所示，大腸桿菌以C5途徑合成ALA，經(jīng)GluRS、GluTR和GSA-AM三步催化生成ALA。ALA由基因hemB編碼的ALA脫水酶（ALAdehydratase，ALAD）催化下縮合形....

本文編號：3964891